日本血吸蟲毛感染對湖北釘螺生存及抗氧化酶系統(tǒng)的影響

日本血吸蟲毛感染對湖北釘螺生存及抗氧化酶系統(tǒng)的影響

湖北刺槐是日本蜘蛛的唯一中間控制權(quán)。日本蜘蛛的毛必須在釘螺體中通過無性繁殖形成感染人和動(dòng)物的尾腺。毛蚴感染釘螺后，釘螺體內(nèi)的免疫應(yīng)答反應(yīng)將導(dǎo)致螺體內(nèi)產(chǎn)生大量的不穩(wěn)定活性氧自由基，進(jìn)而可能誘導(dǎo)機(jī)體抗氧化酶體系激活以適應(yīng)高度的氧化脅迫壓力1材料和方法1.1成螺和成螺的選取在春季藥物滅螺前從湖北省陽新縣現(xiàn)場采集肋殼釘螺，室內(nèi)經(jīng)逸蚴法鑒定為陰性后，用爬行法選取活力較強(qiáng)的成螺（7～8個(gè)螺旋）用于實(shí)驗(yàn)。采用湖北省血吸蟲病防治研究所實(shí)驗(yàn)室數(shù)次傳代的日本血吸蟲湖北株尾蚴人工感染家兔，45d后解剖分離兔肝臟，用搗碎法提取新鮮蟲卵，按常規(guī)方法孵化獲得毛蚴。1.2實(shí)驗(yàn)處理和樣本采集1.4處理數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)整理后，用SPSS22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)算各觀察時(shí)間釘螺的死亡率、酶活性及MDA含量（以算術(shù)均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示），并用χ2結(jié)果2.1釘螺科兩組感染的單次感染的比較自感染結(jié)束第1周起，每周實(shí)驗(yàn)組和對照組均有釘螺死亡，但有血吸蟲感染的實(shí)驗(yàn)組釘螺每周死亡率均高于對照組，且二者之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。第10周后實(shí)驗(yàn)組釘螺死亡數(shù)增多，至15周時(shí)實(shí)驗(yàn)組釘螺累計(jì)死亡率為43.60%，對照組累計(jì)死亡率為5.93%。2.2釘螺感染血吸蟲毛前后抗氧化酶活性比較釘螺感染血吸蟲毛蚴后72h內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組和對照組釘螺SOD、CAT、POD活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（SOD:F=34.63,P<0.01;CAT:F=23.50,P<0.01;POD:F=8.594,P<0.01），實(shí)驗(yàn)組釘螺SOD、CAT、POD活性隨時(shí)間逐步升高。釘螺感染血吸蟲毛蚴后24、48、72h，實(shí)驗(yàn)組SOD活性分別為（42.78±5.81)U/mgprot、（46.11±2.91)U/mgprot和（47.91±2.12)U/mgprot，與對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）（圖1a）；感染血吸蟲毛蚴后72h，實(shí)驗(yàn)組CAT和POD活性分別為（23.15±1.21)U/mgprot和（15.66±1.44)U/mgprot，較對照組相比活性上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）（圖1b、圖1c）。2.3感染血吸蟲毛的釘螺組與對照組sod、cat活性的變化釘螺感染血吸蟲毛蚴后12周內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組和對照組SOD、CAT、POD活性和MDA含量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（SOD:F=88.00,P<0.01;CAT:F=68.69,P<0.01;POD:F=49.19,P<0.01;MDA:F=56.1,P<0.01）。與對照組相比，感染血吸蟲毛蚴的釘螺組SOD活性在第1周出現(xiàn)上升，第4周到達(dá)峰值，第6周開始下降至對照組水平，隨后趨于穩(wěn)定，第1、2、4周實(shí)驗(yàn)組SOD活性與對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）（圖2a）。實(shí)驗(yàn)組CAT活性在第1周就達(dá)到峰值，隨后開始下降，第4周開始趨近于對照組水平，隨后趨于穩(wěn)定。與對照組相比，第1、2周CAT活性上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）（圖2b）。實(shí)驗(yàn)組POD活性在第1周出現(xiàn)上升，第2周到達(dá)峰值，第4周下降，隨后趨于穩(wěn)定。與對照組相比，第1、2周POD活性上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）（圖2c）。實(shí)驗(yàn)組MDA含量隨著時(shí)間逐漸上升，自第2周開始，MDA含量均高于對照組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01）（圖2d）。3機(jī)械勻漿制備及指標(biāo)測定實(shí)驗(yàn)設(shè)置對照組和實(shí)驗(yàn)組，每組各設(shè)3個(gè)平皿做平行對照。每個(gè)平皿中放入500只釘螺，實(shí)驗(yàn)組釘螺毛蚴感染參照文獻(xiàn)按釘螺組織與生理鹽水質(zhì)量比為1∶9的比例加入生理鹽水，冰水浴條件下機(jī)械勻漿。充分勻漿后，700g離心10min，取上清液用于蛋白質(zhì)濃度、酶活及MDA含量的測定。試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，所有測定步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。蛋白濃度測定采用考馬斯亮藍(lán)法，測定單位為g/L;SOD活性測定采用WST-1法，SOD活力單位定義為37℃下，每毫克組織蛋白（mgprot）在每毫升反應(yīng)液中超氧化物歧化酶抑制率達(dá)50%時(shí)所對應(yīng)的酶量為1個(gè)活力單位（U);CAT活性測定采用可見光法，CAT活力單位定義為每毫克組織蛋白（mgprot）每秒鐘分解1μmolH1.3抗菌肽、凝集素、溶菌素、酚氧化酶等高效免疫方式攻擊入侵螺釘螺感染血吸蟲后，會(huì)產(chǎn)生幼蟲移行的機(jī)械損傷、螺體抗感染的免疫損害、營養(yǎng)物質(zhì)被掠奪的生理代謝紊亂等損害，甚至導(dǎo)致死亡釘螺通常能夠通過抗菌肽、凝集素、溶菌酶、酚氧化酶等體液免疫方式攻擊入侵的寄生蟲總之，本研究表明感染早期釘螺能夠通過調(diào)節(jié)抗氧化酶的活性來適應(yīng)毛蚴入侵的脅迫，以清除體內(nèi)積累的活性氧自由基，免受氧化損傷