鹽酸貝那普利含量有關(guān)物質(zhì)方法確認方案

目的(Purpose)對鹽酸苯那普利USP含量有關(guān)物質(zhì)分析方法進行方法確認。范圍(Scope)含量分析法的確認內(nèi)容包括方法的專屬性和重現(xiàn)性。2.2有關(guān)物質(zhì)分析法由兩個實驗構(gòu)成：Test1:苯那普利雜質(zhì)A,Test2：苯那普利雜質(zhì)B,C,D,E,F,和G。 有關(guān)物質(zhì)分析法的確認內(nèi)容包括方法的專屬性，方法的重現(xiàn)性，和定量限(LOQ)。所配含量標準溶液和樣品溶液的穩(wěn)定性也將予于考察。職責(zé)(Responsibilities)3.1質(zhì)量管理部(QADept.)QA經(jīng)理負責(zé)驗證方案和報告的批準；負責(zé)監(jiān)督管理整個確認活動，確保確認按進度計劃進行。QA人員負責(zé)過程監(jiān)督，確保按批準的方案進行，確保質(zhì)量管理的原則體現(xiàn)在確認過程之中。注冊部審核方案和報告與cGMP的符合性?；炇?QCDept.)負責(zé)確認方案的起草,確認過程的實施,并完成驗證報告。確認試驗所用標準品和樣品(TestArticles)標準品USP鹽酸苯那普利工作對照品,或昌明自制工作對照品USP鹽酸苯那普利有關(guān)物質(zhì)A,B,C,D,E,F,G工作對照品，或昌明自制工作對照品。樣品鹽酸苯那普利,批號；生產(chǎn)廠家：浙江昌明藥業(yè)有限公司含量分析方法確認試驗(VerifcationForAssaymethod)含量分析方法重現(xiàn)性試驗QC檢驗員按照附錄含量分析方法用相同批的鹽酸苯那普利(批號：)配制6個鹽酸苯那普利供試品溶液。5.1.1.2按照附錄含量分析方法(HPLC)對每個樣品溶液進行含量分析。按照附錄含量分析方法規(guī)定的進樣程序進樣。每個樣品溶液重復(fù)進樣兩針,并且每隔12針樣品溶液和進樣程序完成后進1針程序控制標準品溶液。5.1.2數(shù)據(jù)有效性標準滿足附錄含量方法規(guī)定的系統(tǒng)適應(yīng)性要求同一樣品溶液重復(fù)進樣的面積比率在0.980和1.020之間可接受標準樣品的分析結(jié)果都應(yīng)該滿足產(chǎn)品的質(zhì)量要求6個樣品的含量的RSD不得超過2.0%6有關(guān)物質(zhì)分析-Test1方法確認（鹽酸苯那普利雜質(zhì)A）（VerificationForBenazeprilRelatedCompoundA）專屬性（Specificity）:試驗6.1.1.1根據(jù)附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1方法，準備分離度溶液（鹽酸苯那普利約1.0mg/ml，雜質(zhì)A約0.005mg/ml）。6.1.1.2按附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1中的色譜方法，進1針流動相（準備分離度溶液的稀釋液）。6.1.1.3按附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1中的色譜方法，進1針分離度溶液?？山邮軜藴?.1.2.1鹽酸苯那普利與鹽酸苯那普利雜質(zhì)A的分離度不小于2.06.1.2.2流動相（稀釋液）色譜行為對鹽酸苯那普利和鹽酸苯那普利雜質(zhì)A的色譜峰沒有明顯的干擾。LOQ確認：6.2.1試驗6.2.1.1根據(jù)附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1方法.，準備稀釋標準品溶液（苯那普利雜質(zhì)A濃度約1^g/ml）。6.2.1.2按附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1中的色譜方法，進1針稀釋標準品溶液50山。6.2.1.3按附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1中的色譜方法，進1針稀釋標準品溶液，進樣體積減少到25山。6.2.1.4從兩針色譜中，計算苯那普利雜質(zhì)A的信/噪比S/N。接受標準6.2.2.1當(dāng)進樣體積為50山，信噪比S/N三10。6.2.2.2報告進樣體積為25山時的信噪比S/N。重現(xiàn)性：6.3.1.試驗QC檢驗員按照附錄苯那普利雜質(zhì)A分析方法用相同批的鹽酸苯那普利（批號：）配制3個鹽酸苯那普利供試品溶液。按照附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1中的色譜方法，對配制的3個鹽酸苯那普利供試品溶液進行苯那普利雜質(zhì)A分析（每個供試品溶液進樣一針）。6.3.1.2配制標準加入溶液：精確稱取約50mg鹽酸苯那普利（批號：）并移取1.0ml標準儲備液置同一50ml容量瓶中。加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。標準加入溶液中，鹽酸苯那普利約為1.0mg/ml，苯那普利雜質(zhì)A約為0.001mg/ml。按照附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1中的色譜方法，對標準加入溶液重復(fù)進樣6針。數(shù)據(jù)有效性標準6.3.2.1滿足附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test1中的規(guī)定的系統(tǒng)適應(yīng)性要求可接受標準3針鹽酸苯那普利供試品溶液進樣色譜圖中色譜峰相對保留時間RRT和峰形相似。6.3.3.2報告標準加入溶液重復(fù)6針進樣色譜圖中雜質(zhì)A峰面積的RSD。7有關(guān)物質(zhì)分析-Test2方法確認（鹽酸苯那普利雜質(zhì)B,C,D,E,F,和G）（VerificationForBenazeprilRelatedCompoundsB，C，D，E，F(xiàn)，G）專屬性Specificity試驗7.1.1.1根據(jù)附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test2中的色譜方法配制系統(tǒng)適應(yīng)性溶液（鹽酸苯那普利約400憾/ml、雜質(zhì)B約400|ig/ml）。7.1.1.2根據(jù)附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test2中的色譜方法配制工作標準品溶液（雜質(zhì)B,C,D,E,F,G各約10:g/ml）。7.1.1.3按附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test2中的色譜方法進2針流動相空白。7.1.1.4按附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test2中的色譜方法進工作標準品溶液。7.1.1.5按附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test2中的色譜方法進系統(tǒng)適應(yīng)性溶液?？山邮軜藴?.1.2.1鹽酸苯那普利與雜質(zhì)B的分離度三1.7。流動相（稀釋液）色譜行為對鹽酸苯那普利和鹽酸苯那普利雜質(zhì)的色譜峰沒有明顯的干擾。7.1.2.3報告每個苯那普利有關(guān)物質(zhì)相對保留時間RRT。7.1.2.4報告已知相鄰峰的分離度。LOQ（0.02%）確認：7.2.1試驗7.2.1.1用流動相稀釋工作標準品溶液得到稀釋標準品溶液（雜質(zhì)B,C,D,E,F,G各約1:g/ml）。7.2.1.2用流動相稀釋系統(tǒng)適應(yīng)性溶液得到LOQ溶液（苯那普利和雜質(zhì)B各約0.2:g/ml）。7.2.1.3稀釋液，LOQ溶液和稀釋標準品溶液進樣。7.2.1.4在LOQ溶液進樣色譜圖中，計算苯那普利峰和雜質(zhì)B峰的信噪比S/N。7.2.1.5在稀釋標準品溶液進樣色譜圖中，分別計算苯那普利雜質(zhì)B,C,D,E,F,G峰的信噪比S/N?？山邮軜藴?.2.2.1在LOQ溶液進樣色譜圖中，苯那普利峰和雜質(zhì)B峰的信噪比S/N三10。7.2.2.2報告稀釋標準品溶液進樣色譜圖中相關(guān)峰的信噪比S/N。7.3雜質(zhì)分析重現(xiàn)性試驗7.3.1.1華海QC化驗員按照有關(guān)物質(zhì)分析-Test2分析方法用相同批的鹽酸苯那普利（批號 ）配制3個鹽酸苯那普利供試品溶液。7.3.1.2按照附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test2中的色譜方法，進行苯那普利雜質(zhì)分析（每個供試品溶液進一針）。數(shù)據(jù)有效性標準7.3.2.1滿足附錄有關(guān)物質(zhì)分析-Test2中的規(guī)定的系統(tǒng)適應(yīng)性要求可接受標準3針鹽酸苯那普利供試品溶液進樣色譜圖中色譜峰相對保留時間RRT和峰形相似。計算3個鹽酸苯那普利供試品溶液總雜質(zhì)的平均值。每個供試品溶液總雜質(zhì)與平均值的絕對偏差W0.5%。8溶液穩(wěn)定性（SolutionStability）在檢測環(huán)境條件下來評估含量分析工作標準溶液和含量分析樣品溶液的穩(wěn)定性。雜質(zhì)分析標準溶液和雜質(zhì)分析樣品溶液是新鮮配制，所以不在這個方案中研究。分析溶液的穩(wěn)定性含量分析工作標準溶液、含量分析樣品溶液是第5部分（實驗室內(nèi)重現(xiàn)性）配制，這個樣品放置在適當(dāng)?shù)沫h(huán)境條件下的試驗臺上，放置一定的時間，以評估樣品的穩(wěn)定性。放置的溶液將在第1天、2天、3天、4天、5天（120小時）各檢測一次。儲存溶液必須要求由新鮮配制的標準品溶液來計算，儲存的標準品溶液和樣品溶液要重復(fù)進樣。數(shù)據(jù)有效性標準滿足系統(tǒng)適應(yīng)性要求。含量分析工作標準溶液、含量分析樣品溶液重復(fù)進樣峰面積的比率在0.980~1.020之間。接受標準每個時間點測試的含量分析工作標準溶液和含量分析樣品溶液結(jié)果與初始的結(jié)果相比偏差在±2%以內(nèi)，表明樣品和標準品溶液是穩(wěn)定的。確認報告（VerificationReport）本方案完成后，由驗證小組長負責(zé)總結(jié)確認數(shù)據(jù)，并完成確認報告附錄方法（Attachments）10.1含量分析方法（Assay）10.2有關(guān)物質(zhì)分析方法（RelatedCompounds）附錄（Attachments）1含量分析方法（Assay）1.1色譜條件：儀器：Waters2695/2996,自動進樣器，紫外檢測器，或與之相當(dāng)?shù)囊合嗌V檢測系統(tǒng)。流動相：甲醇：四丁基溴化銨溶液=64:36溶解0.81g四丁基溴化銨于360ml含有0.2ml冰醋酸的色譜級水中，加入640ml甲醇?；靹颉ＩV柱：Waters:BondapakC18,3.9mmX30cm,10:m柱溫：30°C流速：1.0ml/min檢測波長：240nm運行時間：15分鐘進樣量：25:l溶液配制：系統(tǒng)適應(yīng)性溶液：精密稱取鹽酸苯那普利對照品和苯那普利雜質(zhì)B對照品各4mg置同一10ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。（鹽酸苯那普利約0.4mg/ml、雜質(zhì)B約0.4mg/ml）供試品溶液:精密稱取約20mg鹽酸苯那普利樣品置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。標準品溶液：精密稱取鹽酸苯那普利對照品約20mg置100ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。（鹽酸苯那普利約0.2mg/ml）進樣程序：系統(tǒng)適應(yīng)性要求：重復(fù)進五針系統(tǒng)適應(yīng)性溶液；鹽酸苯那普利與雜質(zhì)B的分離度三1.7,鹽酸苯那普利與雜質(zhì)B各自對應(yīng)的五針峰面積相對標準偏差（RSD）都不得大于2.0%待系統(tǒng)適應(yīng)性建立后分別進一針標準品溶液和供試品溶液。1.3.3每進12個供試品溶液和序列的最后進1針程序控制標準品溶液。系統(tǒng)運行（系統(tǒng)適應(yīng)性溶液+程序控制標準品溶液）中鹽酸苯那普利與雜質(zhì)B各自對應(yīng)峰面積的相對標準偏差（RSD）都不得大于3.0%計算：%鹽酸苯那普利（以干基計）=a城W（i0O%-W%）stdspl其中：A忙供試品溶液中鹽酸苯那普利峰面積；splAtd:標準溶液中鹽酸苯那普利峰面積；stdWspl:稱取鹽酸苯那普利供試品粉末的重量（mg）；Wstd:稱取鹽酸苯那普利標準品的重量（mg）；P： 鹽酸苯那普利標準品的純度因子；W%：干失測定值。2有關(guān)物質(zhì)分析方法（RelatedCompounds）2.1雜質(zhì)A（對映異構(gòu)體）：色譜條件：儀器：Waters2695/2996,自動進樣器，紫外檢測器，或與之相當(dāng)?shù)囊合嗌V檢測系統(tǒng)流動相：pH6.0磷酸鹽緩沖液：甲醇=80:20pH6.0磷酸鹽緩沖液:溶解9.66gKH2PO4和2.68gNa2HPO4?7H2O于900ml水中，并用水稀釋到1000ml。色譜柱：ChiralPakAGP,4.0mmX10cm,5:m柱溫：30°C流速：0.9ml/min檢測波長：240nm運行時間：30min進樣量：50:l溶液配制：空白溶液：流動相標準品儲備液：精密稱取約5mg鹽酸苯那普利雜質(zhì)A對照品置10ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。移取5ml該溶液置50ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，混勻。（雜質(zhì)A約0.05mg/ml）分離度溶液：精密稱取約50mg鹽酸苯那普利對照品置50ml容量瓶中，移取5ml標準儲備液置該容量瓶，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。（鹽酸苯那普利約1.0mg/ml，雜質(zhì)A約0.005mg/ml）標準品溶液:精密移取5ml標準儲備液置50ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。（雜質(zhì)A約5:g/ml）稀釋標準品溶液：精密移取1ml標準儲備液置50ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。（雜質(zhì)A約1:g/ml）供試品溶液：精密稱取約50mg鹽酸苯那普利樣品置50ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。進樣程序：系統(tǒng)適應(yīng)性要求：2.131.1進一針分離度溶液，相對于鹽酸苯那普利，鹽酸苯那普利雜質(zhì)A的相對保留時間為約2.3,鹽酸苯那普利與鹽酸苯那普利雜質(zhì)A的分離度三2.0。2.1.3.1.2進2針流動相?？瞻讏D譜在鹽酸苯那普利和苯那普利雜質(zhì)A標準品出峰位置無明顯干擾。2.1.3.1.3進1針稀釋標準品溶液，要求信噪比S/N2102.1.3.1.4重復(fù)進樣6針標準品溶液（系統(tǒng)適應(yīng)性溶液）并紀錄峰面積，6針標準品溶液苯那普利雜質(zhì)A峰面積RSDW10%2.1.3.2待系統(tǒng)適應(yīng)性建立后每個供試品溶液進樣1針。2.1.3.3每進12個樣品溶液和序列的最后進1針程序控制標準品溶液。系統(tǒng)運行（系統(tǒng)適應(yīng)性溶液+程序控制標準品溶液）的相對標準偏差（RSD）不得大于15%計算：AXW X50XPX100%鹽酸苯那普利雜質(zhì)A=A X肪X（100%-W%）X10000std-Aspl其中：AlA：供試品溶液中鹽酸苯那普利雜質(zhì)A峰面積；spl-AAtdA：標準溶液中鹽酸苯那普利雜質(zhì)A峰面積；std-AW：稱取鹽酸苯那普利雜質(zhì)A標準品重量（mg）；std-AW]:稱取鹽酸苯那普利供試品粉末的重量（mg）；splP：標準品純度因子W%：干失測定值。2.2有關(guān)物質(zhì)（雜質(zhì)B、C、D、E、F、G）：2.2.1色譜條件：同2.1.1色譜條件，運行時間：45分鐘。溶液配制：系統(tǒng)適應(yīng)性溶液：精密稱取鹽酸苯那普利對照品和苯那普利雜質(zhì)B對照品各4mg置同一10ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。（鹽酸苯那普利約0.4mg/ml、雜質(zhì)B約0.4mg/ml）標準品溶液：精密稱取以下對照品各5mg置同一10ml容量瓶中：雜質(zhì)B、雜質(zhì)C、雜質(zhì)D、雜質(zhì)E、雜質(zhì)F、雜質(zhì)G。加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。移取1ml該溶液置50ml容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，混勻。（雜質(zhì)各約0.01mg/ml）供試品溶液：精密稱取50mg樣品置50ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，混勻。進樣程序：系統(tǒng)適應(yīng)性要求：進2針流動相空白。2.331.2重復(fù)進五針系統(tǒng)適應(yīng)性溶液。鹽酸苯那普利與雜質(zhì)B的分離度三1.7，鹽酸苯那普利與苯那普利雜質(zhì)B各自對應(yīng)的五針峰面積相對標準偏差（RSD）都不得大于2.0%2.331.3進一針標準品溶液。相對于鹽酸苯那普利，雜質(zhì)E（S-氨基物水解物）相對保留時間約為0.4