石油降解率的測定

產生物表面活性劑的石油降解菌AciiietobacterBHSN的研究曹娟等培養(yǎng)結束后在25mL石油培養(yǎng)基中加入5mL正己烷及用正己烷溶解10000mg/L菲25卩L內標,充分振蕩溶解石油。然后倒入50inL離心管中，于4°C,lOOOOr/niiii離心5min,取上清液用正己烷重復萃取2次，合并萃取液定容至25inL,然后取luL上清液進行GC測定。氣相色譜儀為HP5890,色譜柱為HP?5。色譜條件：80￡保持511訕，以3°C/min升至165°C,保持2min,再以5 升至270°C，保持lOniiiio進樣口溫度250°C,檢測器溫度280°Co選用此法的原因有：實驗用的是液體培養(yǎng)基，且石油的體積分數(shù)為0.5%,含量較低。因此排除重量法；實驗中液體培養(yǎng)基近30ml,與該方法的數(shù)據(jù)較為接近；且，該文獻是測定單種菌對石油的降解效率，與后續(xù)實驗目的一致；實驗過程較簡單，步驟清晰，需要的實驗器材較常見，因此可減少實驗器具的浪費，節(jié)省開支；北極海洋沉積物石油降解菌的篩選及系統(tǒng)發(fā)育分析林學政等降解率的測定（重量法）：將石油降解菌活化后以2%的接種量接種于含50mL篩選培養(yǎng)基的100111L三角瓶中，于5°C下振蕩（150r/niiii）培養(yǎng)14d。培養(yǎng)液用10mL正己烷萃取2次，收集合并上層有機相，經旋轉蒸發(fā)和50°C烘干，置于干燥器中冷卻至恒重，稱重。以不接菌的培養(yǎng)基經上述步驟處理為對照。除油率按式（1）計算:n=((Mo-M)—(McO-Mc))/M0x100%(1)式中，Mo為處理樣的接菌前石油的質量(g);M為處理樣經接菌處理后殘油的質量(g);Meo為對照處理前石油的質量(g);Me為對照樣經振蕩14d后的殘油質量(g)。生物表面活性劑鼠李糖對水體中石油短降解的促進作用吳小紅等石油降解率的測定：由于本實驗中含油量遠大于2mg/L,因此采用重量法測定油含量。往石油坯培養(yǎng)基中加入篩選所得菌和鼠李糖脂溶液，經搖床培養(yǎng)(180T/min)后，取樣分析。首先加入1+1硫酸(51111硫酸/1L樣液)，酸化樣液，然后轉至分液漏斗，加入氯化鈉(其樣約為樣液的8%),用25ml石油醯(30-60°C)萃取3min,靜置分層，收集上層液；用石油瞇萃取樣液2次，合并上層液用干燥的無水硫酸鈉脫水，過濾，收集濾液于60°C水浴蒸至近干，在置于65°C恒溫箱內烘干lh,然后放入干燥器中冷卻30nmi,稱重。以不接菌的培養(yǎng)液為對照組。石油怪降解率的計算：mi-m2〈—降解率%二 X100nil式中，mi：對照組殘油重量(g)；m?:樣品殘油質量(g)o高溫姪降解菌在含油污水生化處理中的應用劉俊強等人單株菌種石油降解率的測定：將篩選的各個菌種用無菌水制成菌懸液，以相同加入量接入到原油培養(yǎng)基中，并放置于50°C,180r/niin的搖床培養(yǎng)7d,用平板計數(shù)法測定活菌數(shù)，并用紫外分光光度法測定殘余油含量，按下式計算石油降解率訊％):紫外分光光度法測定殘余油含量：I.殘余油含量1山一初始油含量"100%5?高效的石油降解菌的篩選鑒定及修復能力研究汪杰等采用非分散紅外石油儀進行石油炷含量測定(GB/T16488-1996)o柴油含量測定：測定時，將三角瓶中液體全部倒入玻璃離心管屮,lOOOOr/niiii離心lOiiiiii,倒出上清液轉入12-51I1L分液漏斗屮；加3滴體積比1:1的鹽酸酸化，加3.5gNaCl為破乳劑，用5111L精制CC14溶液清洗原三角瓶，倒入分液漏斗，同時加入10111LCC14,萃取5niiii；下層CCh相經裝有無水Na?S()4脫水柱除水后，歸入25mL比色管中，萃取兩次后定容至251I1L,取0.5mL重新定容于251I1L比色管中。用lcm石英比色皿在紅外分光光度儀下進行測定，與標準曲線對比得到結果。土壤石油姪含量測定：測定時取士樣2.5g,放入碾缽中，滴加3滴1:1(體積比)鹽酸，加入2.0g無水Na2S04研磨均勻后，倒入50n)L玻璃離心管中；用移液管取25111L精制CC14至離心管，擰蓋后，放入超聲清洗機中進行超聲萃取，萃取時間為40111B1；完畢后,6000r/niiii離心，取上層澄清液0.5mL于25mL比色管中，定容后測疋O柴油日平均降解速率計算公式如下:丫=(Wa-Wb)/(ta-tb)(l)式中，丫為日平均陣解速率(mg-L^d1),Wa為第a天溶液柴油含量(mg?L"),Wb為第b天溶液柴油含量(mg?l/)。根據(jù)美國環(huán)境保護局以及其他研究者的報告(Piiiice,1993；Jonge,1997；張旭,2000),土壤微生物對石油類污染物的降解遵循一級反應關系，即：dC/dt=-KyC(2)式中，C為土壤中油含量(mg-g1)；Kt為基質去除常數(shù)(d'1)o由式(2)可得：C/G=exp(-ArQ (3)將式(3)兩邊取對數(shù)后可得式(4).hiC=liiCo-K7t(4)以時間t為橫坐標，InC為縱坐標，對實驗點做線性回歸，則直線的截距為hiC0,斜率為從而導出土壤中石油坯的半衰期(ti/2)公式(5).11/2=1h3/Kt(5)6.遼河油田凍融石油污染土壤中原位修復微生物李素玉等降解試驗采用以原油為碳源的選擇性液體培養(yǎng)基，含油量0.5%,接種量為10%,細菌置32°C恒溫搖床+150i7niiib振蕩培養(yǎng)7d。真菌置2LC恒溫搖床中150〃min,振蕩培養(yǎng)帀。試驗結束時，用石油醛萃取降解液中殘留的石油，紫外分光光度計法測定降解液中的石油含量,以不接菌的空白培養(yǎng)基為對照，通過下式計算石油的降解率：降解率(%)=x100%降解率(%)=x100%.耐熱石油坯降解混合菌的篩選及其群落結構分析劉其友等石油姪的測定方法：石油姪的濃度依據(jù)國標“GE/T16488—1996水質石油類和動植物油的測定紅外分光光度法”進行。將含有菌液的原油無機鹽培養(yǎng)基轉移至2501111分液漏斗中，利用lmol-L1的鹽酸使其酸化至pHW2,用20mL壞保專用CCb洗滌三角瓶，洗滌液也加到分液漏斗中，然后加入2g氯化鈉破乳，充分振蕩3min后，靜置5inin待其分層，將萃取溶液轉移至一新的三角瓶中，用CCb萃取，重復操作兩次，合并三次的萃取液。將15mm厚的無水Na2S04(300°C烘干2h)平鋪于玻璃砂芯漏斗內，萃取液緩慢通過砂芯漏斗除去其中的水分，隨后用真空泵將濾液抽至抽濾瓶中，用適量CCb洗滌砂芯漏斗，洗滌液也轉移至抽濾瓶中。將抽濾瓶中的濾液移至lOOniL容量瓶中，用CCh定容至刻度、搖勻。并用OIL510型全自動紅外分光測油儀測定石油類含量，并計算石油坯的降解率。8?石油降解菌的分離鑒定及石油污染土壤的細菌多樣性任隨周等石油中飽和姪和芳香姪含量的分析：用石油醯將培養(yǎng)基中殘余的石油提取出來，濃縮一定體積后采用FiiuiigaiiTraceDSQ(ThennoElectronCoipoiatio)氣質聯(lián)用儀進行分析，色譜柱為DB-5MS(30111x0.25舊nx0.25mm),氣相色譜操作條件為：進樣口溫度數(shù)220°C,程序升溫，掃描范圍19?650ainu,掃描速度500aiini/s,電子能量70eV,離子源溫度250°C,傳輸線溫度250°C,載氣流速l.Onil/iiiBio石油污水灌區(qū)的微生物生態(tài)及其降解石油的研究劉期松等微生物降解石油的測定方法：取液體培養(yǎng)基25ml置125ml三角瓶中,力ni0-15mg油,約占0.04-0.06基質,震蕩培養(yǎng),28°C,7天。萃取培養(yǎng)液中的油：用處理過的二氯甲烷或四氯化碳萃取未被降解的石油。萃取油的測定：用5-lOnil的四氯化碳洗燒杯中上述殘渣，將溶液置石英槽中，以四氯化碳作參比。于IR-27G紅外分光光度計上在3200-2800nm1(3.43|Lim)掃描，測定各點2491nm'1(3.43gm)的吸光強度。石油污染土壤生物修復菌Z??B的分離鑒定與調控研究司美茹等石油組分分析：在250ml培養(yǎng)瓶中放入501H1石油/無機鹽液體培養(yǎng)基(石油質量濃度為1.0g/L),接種菌劑5%(體積分數(shù)，下同),于20°C,180r/nunJg床培養(yǎng)14d,制的培養(yǎng)發(fā)酵液2。采用HP5890SERIESII氣相色譜儀和HP5972質譜儀進行降解前后的石油組分分析。培養(yǎng)發(fā)酵液2用20ml石油醯萃取后進行GC/MS分析。GC/MS條件：HP?5石英毛細管色譜柱(30mx0.25inmx0.25)im),He載氣，進樣口溫度290°C,檢測器溫度300°C；升溫順序：初始80°C,恒溫5iiiiiiW3°C/mill升至290°C,并保留lOniiiio石油污染土壤生物修復高效菌的降解特性徐金蘭石油姪的測定：在滅菌的原油培養(yǎng)基中接種石油降解菌，經定時搖床培養(yǎng)后，將PH調至3以下，轉移至分液漏斗中，加入201111CC14劇烈震蕩100次以萃取培養(yǎng)基中的坯類物質，靜置分層。下層液用無水硫酸鈉脫水干燥后，過濾至501U1容量瓶中；上層液再用CCh萃取2次，過濾至50ml容量瓶中，定容后用非分散紅外石油儀測定石油坯質量濃度按下式計算石油炷生物降解率:65和G分別為對照試樣和接種菌試樣中殘余石油姪質量濃度，mg/Lo生物菌劑對石油污染土壤生物修復作用的研究黃廷林等石油姪含量采用OCMA?350非分散紅外石油分析儀測定。石油組分采用氣象色譜?質譜聯(lián)用儀測定。氣象色譜(GC)為Trace2000型,質譜(MS)為Voyager,柱子DB-5，長30m,固定相0.25卩m厚,測試相對分子質量范圍為30-450,前6~10min為溶劑峰。分析條件為：100°C開始，每分鐘上升10°C至200°C,再以5°C/mill升至280°C，保留lOniiii,質譜與色譜連接溫度為250°Co海洋石油降解菌劑在大連溢油污染岸灘修復中的應用研究鄭立等石油降解率計算：將降解后的石油培養(yǎng)液及陰性對照在100OOr/niiii,1Oniiii的條件下離心去除細菌細胞，準確量取5Oinl二氯甲烷萃取其中的殘余油污。從二氯甲烷相吸取20ml萃取液轉移到尖底燒瓶中°40°C減壓濃縮，稱量帶有殘留油污的燒瓶總重，減去燒瓶本身重量，得到殘留油污的重量m,按照以下公式計算求得降解率(D)：D={(m0—2.5m)/mo}xioo%式中為最初加入培養(yǎng)基中的石油重量。另從二氯甲烷相準確量取4inl溶液，用無水Na2SO4脫水過0.22pm耐有機溶劑濾月莫。量取2ml氮氣吹干，以lml正己烷重新溶解，移入GC樣品瓶中，用GC-FID,GC-MS對石油降解后殘留的烷姪芳香姪組分進行分析測定。GC-FID氣相色譜條件：色譜柱HP-5MS(30mx0.25nmix0.25nm)；進樣口溫度260°C,載氣為高純He,流速l.Onii/niin,恒流模式，不分流進樣1卩1。柱溫箱采用升溫程序：起始50°(?,保持2111111,以6.0°C/mill升至300°C,保持16min,采用選擇離子掃描模式(SIM)oGC-MS的分析條件：色譜柱HP?5S(30mX0.25mmX0.25卩m)；進樣口溫度280°C,離子源溫度250°C。載氣為氨氣(99.999%),流速1ml/min。程序升溫：50°C保持2iiiin,以6°C/mill升至300°C,保持lOmin。掃描模式：SCAN,SIM模式；掃描質量范圍：50-500o進樣：HP7683自動進樣器，不分流樣lul。數(shù)據(jù)采集和處理：HP3365化學工作站。海洋石油降解微生物的篩選及降解條件的優(yōu)化包木太等石油降解率的測定方法：降解率的測定采用紫外分光光度法。在紫外區(qū)225.50iun處，原油濃度在0~100mg/L范圍內與其OD值具有很好的線性關系。原油降解率的計算方法：生物降解率=(對照吸光度■培養(yǎng)液吸光度)/對照吸光度xlOO%氣相色譜與紫外分光光度法評價石油怪類污染物的微生物降解過程田貞樂等在經微生物降解的樣品中，準確的加入linl鄰二氯苯儲備液作為內標物，加入10ml石油醯，超聲振蕩3min后，轉移到125ml分液漏斗，靜置分層，將下層溶液收集于原錐形瓶屮，上層溶液則用25ml容量瓶收集。再在收集后的下層溶液中加入10ml石油醛，用相同的方法重新萃取一次，棄去下層溶液，將上層溶液一并收集于25ml容量瓶中，并用石油醛稀釋至刻度，搖勻，用于GC測試。測定條件為：色譜柱：SE30毛細管柱（30mx0.25mm）；氣化室溫度300°C；檢測器（FID）溫度300°C；柱溫程序：起始溫度溫度300°C；柱溫程序：起始溫度60°C（lnuii）15°C/min>240°C10°C/min>300°C；進樣量2ul。取0.5ul上述所得GC測試溶液于25ml容量瓶屮，用石油醯稀釋至刻度，搖勻；用含有相同濃度鄰二氯苯內標物的石油醯為空白，在2501U11波長下測定其吸光度。南海高效石油降解菌的篩選及降解特性研究姜胖等石油降解菌降解特性研究：采用GC-MS對6株降解菌的石油降解特性進行分析。將降解后產物除菌體后用二氯甲烷萃取，并從二氯甲烷相準確量取4mL溶液，用無水Na2SO4脫水，過0.22uin耐有機溶劑濾膜。量取2mL氮氣吹干，以lml正己烷重新溶解，移入GC樣品瓶中,GC-MS對石油降解后殘留的烷姪、芳香怪成分進行分析（內標法）測定。GC-MS運行條件為：HP?5MS譜柱（30mX0.25imnX0.25nin）；載氣為氨氣；樣口溫度50°C；GC-MS接口溫度280°C；柱溫（程序升溫模式）：初