自制新中藥配方治療燒傷的研究

自制新中藥配方治療燒傷的研究

燒傷是一種常見的損傷，近年來發(fā)病率呈逐漸上升趨勢。燒傷治療中存在創(chuàng)面疼痛、進行性壞死、易感染、瘢痕愈合四大難題。本研究中的新中藥配方,由虎杖、梔子、白及、白芷、紫草等7味中藥組成。其有效成分具有抑菌消炎、促進結(jié)痂和調(diào)節(jié)免疫功能的功效。通過動物實驗探討對新中藥配方在燒傷中的療效進行客觀評價。1材料和方法1.1提純的制備新中藥配方由虎杖、梔子、白及、白芷、紫草等7味中藥提純制成,購自湖州平家大藥房;美寶濕潤燒傷膏(汕頭市美寶制藥有限公司,產(chǎn)品批號:1200603A);昆明種小白鼠50只,湖州市食品藥品檢驗所提供。1.2實驗方法1.2.1藥渣水制備濃縮先用酒精浸泡中藥,時間約為30min。30min后濾出藥液,將其濃縮至飽和后倒入已消毒的杯子中,并且蓋好以免揮發(fā),同時將藥渣水煎提純濃縮至300mL。將濃縮的酒精藥液與濃縮的藥水倒在一起,并且攪拌均勻,測試該溶液的密度為0.94g/mL(在溶液均勻無沉淀的情況下),制成中藥提取物,用已消毒的蒸餾水配出中藥成品提取物濃度分別為100%、80%、60%的藥品。1.2.2脫毛劑一反合利小球活化小鼠在實驗期間均正常飲水,普通飲食,于試驗前24h在小鼠背部涂上8%硫化鈉脫毛劑,然后用生理鹽水洗凈脫毛區(qū),背部脫毛面積約3cm×3cm。實驗當(dāng)日,先用乙醚將小鼠進行淺麻醉,用100℃恒溫水通過一平底玻璃小瓶(瓶底面積為3.14cm2)分別燙傷小鼠背部皮膚,燙傷時間為17s,造成淺Ⅱ度燙傷模型。1.2.3給藥及定劑量將已造成淺Ⅱ度燙傷模型的小鼠50只隨機分為新配方高劑量組、新配方中劑量組、新配方低劑量組、陽性對照組和空白對照組,每組10只。新配方高劑量組為中藥提取物100%組,新配方中劑量組為中藥提取物80%組,新配方低劑量組為中藥提取物60%組,陽性對照組為美寶濕潤燒傷膏組。新配方高、中、低劑量組每只涂藥0.5mL,陽性對照組每只涂藥0.5g,涂藥面積需超過創(chuàng)面2mm,需覆蓋創(chuàng)面,厚度薄于1mm。每日定時定量給藥3次,給藥時間為7:30、13:00、18:30,連續(xù)20d。空白對照組除敷藥外其他實驗條件均與其他組相同。1.2.4計算面積計算定時觀察燙傷創(chuàng)面的變化,如有無滲出、潰破、感染,觀察各組皮膚創(chuàng)面結(jié)痂情況。并于燙傷后第1、5、10、15天將硫酸紙貼于創(chuàng)面描繪創(chuàng)面圖形,并由紙重計算出創(chuàng)面面積。以第1天的創(chuàng)面面積作為初始面積計算各組動物燙傷后各天的留痂率、留疤率、完全脫痂只數(shù)。于用藥結(jié)束后,制作病理切片。留痂率=留痂面積/創(chuàng)面初始面積×100%留疤率=留疤面積/創(chuàng)面初始面積×100%病理取材:切取各組小鼠燙傷局部皮膚組織,取材深度包括表皮、真皮、皮下組織,用4%的福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,切成5μm切片,HE染色,制成病理切片(病理切片由湖州市第一人民醫(yī)院病理科制作),光鏡檢查,觀察組織學(xué)變化。1.3統(tǒng)計處理計量資料以ue0af±s表示,應(yīng)用SPSS12.0.1軟件包,進行方差分析及SNK檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1小鼠視角組織中皮肉皮肉燙傷模型制備后,肉眼觀察:皮膚外觀蒼白。燙傷后第1天均結(jié)痂,未發(fā)現(xiàn)水泡。第11天新配方中、低劑量組中各有1只小鼠創(chuàng)面皮肉微黃,陽性對照組中有2只老鼠創(chuàng)面皮肉內(nèi)有黃色物質(zhì)。第15天空白對照組中有1只小鼠創(chuàng)面有膿液滲出。2.2療效與空白對照的比較創(chuàng)面留痂率(見表1)以及創(chuàng)面留疤率(見表2)。根據(jù)觀察指標(biāo)統(tǒng)計學(xué)SNK處理,可發(fā)現(xiàn)新配方低劑量組在第5天的療效明顯優(yōu)于其他組(P<0.01),而新配方高、中劑量組和陽性對照組的療效與空白對照組無差別。在第10天新配方低劑量組治療效果優(yōu)于新配方高劑量組(P<0.05),與其他實驗組無差別,在第15天后,各組創(chuàng)面愈合與空白對照組無差別。2.3小鼠完全脫復(fù)合性的情況燙傷小鼠完全脫痂只數(shù)(見表3)。各組小鼠完全脫痂的只數(shù)隨時間推移而增加,從第15天開始新配方低劑量組的小鼠完全脫痂只數(shù)明顯多于其他組。從第5天開始,陽性對照組小鼠完全脫痂只數(shù)多于空白對照組,但在第15天后未超過新配方低劑量組的完全脫痂只數(shù)。2.4新中藥配方的療效燙傷部位的病理切片(見圖1)。各組小鼠的燙傷經(jīng)治療后背部皮膚病理切片顯示,各組小鼠皮膚表皮均覆蓋有復(fù)層鱗狀上皮。新配方低劑量組皮膚組織結(jié)構(gòu)清晰,肉芽組織明顯減少,炎性細(xì)胞滲出和小血管增生明顯少于新配方高劑量組、新配方中劑量組和空白對照組,而與陽性對照組無顯著差異,鏡下觀察見圖1C。新配方高劑量組表皮因藥物刺激使鱗狀上皮增生而明顯變厚,表皮下方結(jié)構(gòu)較紊亂,可見肉芽組織增生,出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞滲出和小血管增生現(xiàn)象,鏡下觀察見圖1A。新配方中劑量組組織結(jié)構(gòu)較清晰,肉芽組織增生包括炎性細(xì)胞滲出和小血管增生明顯少于新配方高劑量組,鏡下觀(見圖1B)。陽性對照組與新配方低劑量組無顯著差異,但其表皮下方有角化囊形成,并且從病理切片看,其形成角化囊的小鼠只數(shù)明顯多于新配方高、中、低劑量組,鏡下觀察見圖1D?？瞻讓φ战M中形成的表皮層較厚,表皮下方組織結(jié)構(gòu)紊亂,肉芽組織增生,出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞滲出和小血管增生現(xiàn)象,光鏡下可見大量中性粒細(xì)胞,多數(shù)切片中可見表皮下方有角化囊形成,鏡下觀察見圖1E。中草藥治療燒燙傷具有悠久的歷史,中醫(yī)有云:“燒傷既是傷又是瘍,傷則血瘀氣滯,瘀則不通,不通則痛,氣滯則濕積,濕積則霉腐”。因此,治療燙傷需做到活血化瘀,祛腐生肌。但與此同時也需要做到抗感染和抗炎的作用,否則會使創(chuàng)面腫痛、化膿。自制的新中藥配方中,虎杖屬苦寒之品,苦燥濕,寒勝熱,又苦先入心,能清滌血熱,可清熱解毒,其含有的大黃素對創(chuàng)面起到良好的抗炎效果,在燒傷藥中早有虎杖、虎杖鞣質(zhì)及虎杖復(fù)方等多種制劑作為燒傷創(chuàng)面用藥,具有促進結(jié)痂、抗感染等作用,能減少創(chuàng)面滲出,防止水分及電解質(zhì)丟失,加快創(chuàng)面愈合。梔子中的環(huán)烯醚萜類、有機酸和色素具有鎮(zhèn)靜、降溫、鎮(zhèn)痛、抗菌和抗炎作用。白芷中的香豆精及其衍生物和揮發(fā)性成分具有抗菌、鎮(zhèn)痛、抗炎和解熱作用。白及含有的膠狀物成分具有止血作用,可顯著縮短凝血酶原生成時間,并加速紅細(xì)胞沉降率;白及提取物的抗菌活性與其結(jié)構(gòu)的關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)其含有的羥基芐基化合物對金黃色葡萄球菌和白色念珠球菌有抑制作用,能控制及防止感染;白及的治療作用可能是通過神經(jīng)反射機制而增強集體的防衛(wèi)能力,刺激肉芽組織的增生并且可縮短凝血時間,減少出血,從而有利于創(chuàng)面愈合。甘草補氣血以排膿,還具有補脾益氣、潤肺止咳、緩急止痛、緩和藥性的功效,在臨床上應(yīng)用于脾胃虛弱、食少便溏、潤肺平喘、食物或藥物中毒、止痛,其藥理作用在解毒、抗菌、抗腫瘤方面非常顯著,而且對免疫調(diào)節(jié)、抗肝炎病毒和抗艾滋病毒也有一定的藥理作用。石膏涼而能散,透表解肌,亦具有清熱瀉水、除煩止渴的功效,經(jīng)研究其所含有的鈣質(zhì)可退熱,含有的微量元素可調(diào)節(jié)免疫、抗病毒,還可用來鎮(zhèn)痛消炎。紫草中含有的紫草素具有抗菌、消炎、抗病毒活性和抗腫瘤活性的作用,抑制炎癥、控制水腫和抑制慢性關(guān)節(jié)炎、刺激成纖維細(xì)胞的生長以加速傷口愈合的用處,已有研究者制造紫草膜和紫草油紗來研究其在燒傷方面的療效。據(jù)《本草綱目》記載:“是以藥不具五味,不備四氣,而久服之,雖暫獲勝,久必致天?！边@是指中藥配方中應(yīng)集起五味,而在新中藥配方中七味藥分別使該配方聚齊了五味四氣。本研究通過動物實驗觀察自制的新中藥配方治療燒傷的療效,新配方低劑量組在第5天的留痂率、留疤率和完全脫痂只數(shù)中,可發(fā)現(xiàn)其促進創(chuàng)面愈合的療效優(yōu)于其它各組;從病理切片中,可發(fā)現(xiàn)其促進創(chuàng)面愈合的療效優(yōu)于新配方高劑量組、新配方中劑量組和空白對照組。在小鼠燙傷用藥后第5天可發(fā)現(xiàn)新配方高、中劑量組未顯現(xiàn)其療效,其留痂率與留疤率均高于新配方低劑量組,這可能是其提取物濃度過高,使經(jīng)過淺Ⅱ度燙傷的皮膚受到刺激,并將藥物成分當(dāng)做抗原物質(zhì)進行炎癥反應(yīng),從而使創(chuàng)面在愈合過程中,因炎癥反應(yīng)使肉芽組織過度增生且明顯高于正常皮膚水平面從而抑制了創(chuàng)面的愈合。在用藥后第10天,新配方高劑量組與新配方低劑量組在留痂率和留疤率上的差異,也提示了過高的藥物濃度可抑制創(chuàng)面的愈合,這在病理切片中得到了更充分的說明,新配方高劑量組的表皮因受刺激而增生,并伴有肉芽組織增生包括炎性細(xì)胞滲出和小血管增生。在第15天后,各組創(chuàng)面愈合與空白對照組無差別,這與淺Ⅱ度燙傷的自愈時間有關(guān)。在此實驗中,陽性對照組在留痂率、留疤率和完全脫痂只數(shù)上未明顯顯示其陽性,可能與燙傷程度低、濃度過高等因