hplc測(cè)定5種蘆薈中蘆薈苷的含量

hplc測(cè)定5種蘆薈中蘆薈苷的含量

蘆葦（alo）是百合科的一種多年生草本植物。這些草本植物集醫(yī)學(xué)、食用、美容和觀賞于一體。其味苦性寒,歸肝、胃、大腸經(jīng),具有清肝熱、潤(rùn)腸瀉下、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤和調(diào)節(jié)血糖等多種藥理作用。蘆薈苷是其主要有效成分。2008年5月26日,我國(guó)衛(wèi)生部第12號(hào)《公告》,批準(zhǔn)了庫(kù)拉索蘆薈凝膠為新資源食品及原料,明確了蘆薈食品產(chǎn)業(yè)發(fā)展定位。但蘆薈的種類(lèi)繁多,可以入藥用的只有10多種,可食用的蘆薈也只有幾種。如果誤食了觀賞性蘆薈,就可能會(huì)因中毒引起惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛和血便等。在300多種蘆薈中,目前獲批可以作為新資源食品及原料的只有庫(kù)拉索蘆薈。因此,對(duì)庫(kù)拉索蘆薈的特征進(jìn)行深入的研究是非常有必要的,可以保證蘆薈食品的安全性。筆者采用HPLC法測(cè)定5種常見(jiàn)蘆薈(華蘆薈、木立蘆薈、庫(kù)拉索蘆薈、不夜城蘆薈和?；⑻m)中蘆薈苷的含量,并從其液相色譜圖上獲取色譜特征對(duì)5種蘆薈進(jìn)行區(qū)分,以期為庫(kù)拉索蘆薈的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供依據(jù)。1材料和方法1.1材料表面1.1.1研究的對(duì)象蘆薈(中華蘆薈、木立蘆薈、庫(kù)拉索蘆薈、不夜城蘆薈和?；⑻m),自己栽培或購(gòu)買(mǎi)于花卉市場(chǎng),由張家口市藥監(jiān)局正高級(jí)中藥師孟燕鑒定。1.1.2主要設(shè)備紫外檢測(cè)器,四元泵,HP化學(xué)工作站,均購(gòu)自Agilent公司;JN-5200DT超聲波清洗機(jī),購(gòu)自寧波江南儀器廠。1.1.3蘆薈大黃素對(duì)照品,5.蘆薈苷對(duì)照品,由成都曼思特生物科技有限公司提供,編號(hào)A0371-20mg;蘆薈大黃素對(duì)照品,由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供,編號(hào)110709-200806;其他試劑均為分析純,市售。1.2方法1.2.1提取液的制備精密稱(chēng)量蘆薈鮮品適量,粉碎,用50ml濃度80%乙醇浸泡,超聲振蕩提取20min,移取上清液,殘?jiān)貜?fù)提取2次,提取液合并,過(guò)濾、定容,即得。1.2.2溶劑的溶解精密稱(chēng)量0.0007g蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品,用無(wú)水甲醇溶解并定容至1ml,即得;精密稱(chēng)量0.0013g蘆薈大黃素標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品,用無(wú)水甲醇溶解并定容至1ml,即得。1.2.3流動(dòng)相、柱溫色譜柱為ODS2(6mm×150mm,5μm),檢測(cè)波長(zhǎng)為359nm;流動(dòng)相為無(wú)水甲醇-濃度1%醋酸(45∶55,V/V);柱溫為40℃;流速為1ml/min。1.2.4木立蘆薈標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備①色譜系統(tǒng)適用性。以蘆薈苷為指標(biāo)考察色譜系統(tǒng)的適用性。R1為蘆薈苷與其前一組分的分離度,R2為蘆薈苷與其后一組分的分離度。②精密度試驗(yàn)。蘆薈苷標(biāo)準(zhǔn)品(700μg/ml),稀釋80倍進(jìn)樣,每次20μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,分別測(cè)定峰面積,計(jì)算蘆薈苷含量的RSD。③重復(fù)性試驗(yàn)。按溶液的制備方法制備木立蘆薈溶液3份,用高效液相色譜法測(cè)定,每份進(jìn)樣3次,每次進(jìn)樣20μl,分別測(cè)定峰面積,并計(jì)算RSD。④回收率試驗(yàn)。取適量華蘆薈樣品3份,分別按高、中、低加入蘆薈苷對(duì)照品,按上述方法提取、過(guò)濾、濃縮、定容、進(jìn)樣分析等,根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算回收率和RSD。1.2.5分析采樣質(zhì)量在“1.2.2”色譜條件下,每個(gè)樣品重復(fù)進(jìn)樣3次,每次20μl,分別測(cè)定峰面積,計(jì)算蘆薈苷的含量。1.2.6對(duì)蘆筍的色度特征的分析建立5種蘆薈的HPLC圖譜,并對(duì)圖譜特征進(jìn)行分析。2結(jié)果與分析2.1響應(yīng)面試驗(yàn)①色譜系統(tǒng)適用性。由表1可知,5種蘆薈的分離度均較好,理論塔板數(shù)均大于6000,表明系統(tǒng)的適應(yīng)性良好。②精密度試驗(yàn)。計(jì)算得RSD為2.88%(n=5),表明該方法有較好的精密度。③重復(fù)性試驗(yàn)。計(jì)算得RSD為1.6%(n=3),說(shuō)明重復(fù)性較好。④回收率試驗(yàn)。由表2可知,平均回收率為108.0%,RSD為2.2%,表明該方法準(zhǔn)確,可靠,可用于蘆薈中蘆薈苷的含量測(cè)定。2.2夜城激勵(lì)機(jī)制1.32g/g由表3可知,5種蘆薈中蘆薈苷的含量分別為:華蘆薈72.92μg/g、不夜城蘆薈2.62μg/g、木立蘆薈614.30μg/g、庫(kù)拉索蘆薈135.30μg/g和?；⑻m212.50μg/g;其中,只有華蘆薈中檢測(cè)出了蘆薈大黃素,含量為33.45μg/g,而其他蘆薈中均沒(méi)有檢測(cè)出來(lái)。2.3庫(kù)拉索采用不同峰高樹(shù)聚類(lèi)分析檢測(cè)圖2～7表明,蘆薈的色譜圖上有一典型的特征:在3～5min范圍內(nèi)有一組雙峰,其中后一組分經(jīng)對(duì)照品驗(yàn)證是蘆薈苷(色譜圖上標(biāo)注“1”的組分),該雙峰保留時(shí)間相近,但分離度較好,基本達(dá)到了基線分離。庫(kù)拉索蘆薈與木立蘆薈的色譜圖相似,該雙峰峰高基本相等(庫(kù)拉索蘆薈左邊的峰高稍低,但差別不明顯),在其后沒(méi)有明顯的色譜峰。華蘆薈組雙峰前低后高,峰高相差明顯,且在15min處有一小峰,證明該組分是蘆薈大黃素(色譜圖上標(biāo)注“2”的組分)。?；⑻m色譜圖上該雙峰峰高相近,不同之處是在此雙峰右側(cè)接近5min處有一小峰,其后再?zèng)]有色譜峰。不夜城蘆薈色譜圖上該雙峰特征不明顯,此雙峰都較低,且前高后低,蘆薈苷組分峰高很低,說(shuō)明蘆薈苷含量較低,在右側(cè)接近5min處有一與蘆薈苷峰高相近的色譜峰,其后再?zèng)]有色譜峰。由色譜圖可知,庫(kù)拉索蘆薈在3～5min出現(xiàn)的雙峰左邊的峰高稍低,但相差不明顯,雙峰基本達(dá)到基線分離,在其后再?zèng)]有明顯的色譜峰。該特征僅與木立蘆薈的色譜圖相似,與華蘆薈、不夜城蘆薈和?；⑻m色譜圖相差較遠(yuǎn),較易區(qū)分。3超聲振蕩和回流提取法(1)試驗(yàn)比較了庫(kù)拉索蘆薈果皮和果肉中蘆薈苷的含量,庫(kù)拉索蘆薈果皮中蘆薈苷含量為177.6μg/g,其果肉中的含量為18.28μg/g,比果皮中的低很多(圖8～9)。(2)試驗(yàn)用華蘆薈表皮研究了超聲波振蕩和回流2種提取方法對(duì)蘆薈苷的提取效率。結(jié)果表明,超聲波振蕩提取液中蘆薈苷含量為208.1μg/g,回流提取液中含量為72.79μg/g。顯然超聲振蕩提取法要優(yōu)于回流提取法。因此,試驗(yàn)采用超聲振蕩提取法(圖10～11)。(3)蘆薈苷和蘆薈大黃