高考二輪復(fù)習(xí)發(fā)酵工程課件(96張)新教材新高考版

第1講發(fā)酵工程基礎(chǔ)自查·明晰考位考點(diǎn)梳理·整合突破(聚焦新課標(biāo)：概念3發(fā)酵工程利用微生物的特定功能規(guī)?；a(chǎn)對人類有用的產(chǎn)品；3．1獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是發(fā)酵工程的基礎(chǔ)；發(fā)酵工程為人類提供多樣的生物產(chǎn)品)基礎(chǔ)自查·明晰考位[縱引橫連建網(wǎng)絡(luò)]泡菜果酒果醋考點(diǎn)梳理·整合突破整合考點(diǎn)20微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)酵工程及其應(yīng)用[考點(diǎn)突破固考基]1．圖解識記微生物的培養(yǎng)、分離與計數(shù)平板劃線法紫外線碳源氮源高壓蒸汽滅菌稀釋涂布平板法2．熟記微生物分離與計數(shù)的實(shí)例土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)(1)篩選菌株：利用_________篩選菌株。(2)測定微生物數(shù)量的常用方法：________和________直接計數(shù)。(3)過程：土壤取樣→________→微生物的培養(yǎng)與觀察。(4)鑒定方法：含酚紅指示劑的以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基→細(xì)菌→指示劑________，則該菌能分解尿素。選擇培養(yǎng)基活菌計數(shù)法顯微鏡樣品稀釋變紅3．理清微生物培養(yǎng)的“4”種基本技術(shù)(1)無菌技術(shù)：主要包括________和________。(2)倒平板操作：待培養(yǎng)基冷卻至________左右時，在__________附近倒平板。

(3)平板劃線法：平板劃線法是通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面________的操作，將聚集的菌種________分散到培養(yǎng)基的表面。注意劃線的方法(如圖)。(4)稀釋涂布平板法：先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成___________。稱量滅菌50℃酒精燈火焰連續(xù)劃線逐步稀釋單個的菌落4．(1)理清選擇培養(yǎng)基的“4”種制作方法(2)比較歸納統(tǒng)計菌落數(shù)目的“2”種方法比較項目間接計數(shù)法(稀釋涂布平板法)直接計數(shù)法(顯微鏡直接計數(shù)法)原理樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量缺點(diǎn)當(dāng)兩個或多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落不能區(qū)分細(xì)胞死活誤差比實(shí)際值偏小比實(shí)際值偏大細(xì)菌的數(shù)目還可以通過濾膜法來測定5.理清“4”種傳統(tǒng)發(fā)酵食品的技術(shù)

項目內(nèi)容

果酒和果醋的制作腐乳制作制作泡菜菌種果酒：①________果醋：②________③________④________原理(1)酵母菌在無氧條件下將葡萄糖氧化成乙醇(2)醋酸菌在有氧條件下將乙醇氧化為醋酸毛霉將蛋白質(zhì)、脂肪分解成⑤________乳酸菌將糖轉(zhuǎn)化為乳酸原料選擇⑥________(或蘋果)⑦_(dá)______大白菜、花椰菜等新鮮干凈的蔬菜酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌小分子有機(jī)物新鮮葡萄豆腐實(shí)驗(yàn)流程

制作裝置沖洗榨汁6.認(rèn)清發(fā)酵裝置——大型發(fā)酵罐的結(jié)構(gòu)示意圖(1)攪拌葉輪在發(fā)酵過程中的作用。①通過葉輪的攪拌作用，使培養(yǎng)基在發(fā)酵罐內(nèi)得到充分的混合，盡可能使微生物在發(fā)酵罐里的每一處均能得到充足的________和培養(yǎng)基中的__________。②良好的攪拌有利于微生物發(fā)酵過程中產(chǎn)生的熱量傳遞給____________。③攪拌能使發(fā)酵液充分混合，發(fā)酵罐的發(fā)酵液中的固型物質(zhì)保持________狀態(tài)。氧氣營養(yǎng)物質(zhì)冷卻介質(zhì)懸浮(2)發(fā)酵罐中發(fā)酵條件的控制。①溫度的控制：發(fā)酵過程中可以通過溫度傳感器和控制裝置進(jìn)行檢測和由________進(jìn)、出口水流來調(diào)整。②溶解氧的控制：通過________和攪拌速度加以調(diào)節(jié)。③pH的控制：可以通過pH計檢測，并由加料裝置添加酸和堿進(jìn)行調(diào)節(jié)，也可以在培養(yǎng)基中添加________等。計算機(jī)應(yīng)用的發(fā)酵工程中實(shí)現(xiàn)了對溫度、酸堿度、通氣量、轉(zhuǎn)速的自動記錄和自動控制。冷卻水通氣量pH緩沖液(3)與傳統(tǒng)的容器相比，發(fā)酵罐最明顯的優(yōu)勢。發(fā)酵罐能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模連續(xù)生產(chǎn)，最大限度地利用原料和設(shè)備，獲得高產(chǎn)量和高效率。①進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，能使空氣按需要流通，從而提供良好的發(fā)酵環(huán)境。②實(shí)施攪拌、震蕩以促進(jìn)微生物生長。③對溫度、壓力、空氣流量實(shí)行自動控制。④通過各種生物傳感器測定發(fā)酵罐內(nèi)菌體濃度、營養(yǎng)成分、產(chǎn)品濃度等，并用電腦隨時調(diào)節(jié)發(fā)酵進(jìn)程。7．發(fā)酵工程的應(yīng)用(1)在食品工業(yè)上的應(yīng)用。①生產(chǎn)傳統(tǒng)的發(fā)酵產(chǎn)品：例如a.霉菌(如黑曲霉)將大豆等原料中的蛋白質(zhì)分解成小分子的____________，然后經(jīng)淋洗、調(diào)制成醬油。b．利用釀酒酵母發(fā)酵生產(chǎn)各種酒類。②生產(chǎn)各種食品添加劑：例如a.黑曲霉的發(fā)酵制得食品酸度調(diào)節(jié)劑檸檬酸。b．谷氨酸棒狀桿菌發(fā)酵得到________，經(jīng)過一系列處理制成味精。③生產(chǎn)酶制品：例如發(fā)酵制得α--淀粉酶、β--淀粉酶、果膠酶、氨基肽酶和脂肪酶等。肽和氨基酸谷氨酸(2)在醫(yī)藥工業(yè)上的應(yīng)用。例如：應(yīng)用基因工程、蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)生長激素釋放抑制激素、乙型肝炎疫苗。(3)在農(nóng)牧業(yè)上的應(yīng)用。①生產(chǎn)微生物肥料：根瘤菌肥、固氮菌肥。②生產(chǎn)微生物農(nóng)藥：利用微生物或其代謝產(chǎn)物來防治病蟲害屬于________防治。③生產(chǎn)微生物飼料：單細(xì)胞蛋白。(4)其他方面的應(yīng)用。生物[題組集訓(xùn)提考能]題組一

高考分類練明考向類型1等級考真題體驗(yàn)1．[2021·浙江6月]下列關(guān)于原生質(zhì)體和細(xì)胞計數(shù)的敘述，錯誤的是(

)A．測定植物原生質(zhì)體的密度時，可用血細(xì)胞計數(shù)板B．紅墨水不能進(jìn)入活細(xì)胞，可用于檢測細(xì)胞的存活狀態(tài)并計數(shù)C.涂布分離法和劃線分離法均能得到單菌落，都可用于細(xì)菌計數(shù)D．酵母菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間后，可用比濁計測定其密度答案：C解析：血細(xì)胞計數(shù)板法適用于較大細(xì)胞或顆粒，因此可以將原生質(zhì)體制成的懸浮液滴加在血細(xì)胞計數(shù)板上，對植物原生質(zhì)體進(jìn)行顯微計數(shù)，A正確；活細(xì)胞的質(zhì)膜具有選擇透性，不會被紅墨水染上顏色，死細(xì)胞的質(zhì)膜選擇透性喪失，會被紅墨水染上顏色，故可通過觀察細(xì)胞內(nèi)部是否變紅來判斷細(xì)胞活性并計數(shù)，B正確；涂布分離法可以對樣液中的細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)，而劃線分離法無法對樣液中的細(xì)菌進(jìn)行計數(shù)，C錯誤；酵母菌懸液的混濁度和透光度成反比、與光密度成正比，因此可用光電比色計測定細(xì)菌懸液的OD值，以O(shè)D值代表培養(yǎng)液中的濁度即微生物量，此方法能檢測液體培養(yǎng)基中酵母菌的密度，D正確。2．[2021·浙江1月]用白蘿卜制作泡菜的過程中，采用適當(dāng)方法可縮短腌制時間。下列方法中錯誤的是(

)A．將白蘿卜切成小塊

B．向容器中通入無菌空氣C．添加已經(jīng)腌制過的泡菜汁D．用沸水短時處理白蘿卜塊答案：B解析：將白蘿卜切成小塊可增大與腌料的接觸面積，用沸水短時處理可抑制其他雜菌的繁殖，這兩種方法均可縮短腌制時間，A、D正確；制作泡菜主要利用的是乳酸菌，其在無氧條件下進(jìn)行發(fā)酵，因此向容器中通入無菌空氣不利于腌制，B錯誤；泡菜汁含有一定量的發(fā)酵菌種，添加已經(jīng)腌制過的泡菜汁相當(dāng)于接種了菌種，可以縮短腌制時間，C正確。3．[2020·浙江7月]下列關(guān)于微生物培養(yǎng)及利用的敘述，錯誤的是(

)A．利用尿素固體培養(yǎng)基可迅速殺死其他微生物，而保留利用尿素的微生物B．配制培養(yǎng)基時應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pHC．酵母菌不能直接利用糯米淀粉發(fā)酵得到糯米酒D．適宜濃度的酒精可使醋化醋桿菌活化答案：A解析：利用尿素固體培養(yǎng)基篩選尿素分解菌時，尿素固體培養(yǎng)基并不直接殺死其他微生物，而是其他微生物不能以尿素為氮源，無法在尿素固體培養(yǎng)基中存活，A錯誤；不同的微生物生長所需的最適pH不同，如細(xì)菌適宜生活在中性偏堿環(huán)境，霉菌適宜生活在中性偏酸環(huán)境，因此配制培養(yǎng)基時應(yīng)根據(jù)微生物的種類調(diào)整培養(yǎng)基的pH，B正確；利用糯米釀酒需要先進(jìn)行糖化，酵母菌不能直接利用淀粉進(jìn)行發(fā)酵，C正確；醋化醋桿菌的發(fā)酵底物為一定濃度的酒—水混合物，適宜濃度的酒精可使醋化醋桿菌活化，D正確。4．[2021·河北卷，節(jié)選]葡萄酒生產(chǎn)過程中會產(chǎn)生大量的釀酒殘渣(皮渣)。目前這些皮渣主要用作飼料或肥料，同時研究者也采取多種措施拓展其利用價值。回答下列問題：(2)為了解皮渣中微生物的數(shù)量，取10g皮渣加入90mL無菌水，混勻、靜置后取上清液，用稀釋涂布平板法將0.1mL稀釋液接種于培養(yǎng)基上。104倍稀釋對應(yīng)的三個平板中菌落數(shù)量分別為78、91和95，則每克皮渣中微生物數(shù)量為__________個。×107解析：(2)三個平板中菌落數(shù)量平均值為(78＋91＋95)/3＝88，10g皮渣加入90mL無菌水，稀釋倍數(shù)為104，接種量為0.1mL，則每克皮渣中微生物數(shù)量為×104×100÷10＝107個。(3)皮渣堆積會積累醋酸菌，可從中篩選優(yōu)良菌株。制備醋酸菌初篩平板時，需要將培養(yǎng)基的pH調(diào)至_____性，滅菌后須在未凝固的培養(yǎng)基中加入無菌碳酸鈣粉末、充分混勻后倒平板，加入碳酸鈣的目的是_______________________________________________。培養(yǎng)篩選得到的醋酸菌時，在缺少糖源的液體培養(yǎng)基中可加入乙醇作為____。(4)皮渣堆積過程中也會積累某些兼性厭氧型乳酸菌。初篩醋酸菌時，乳酸菌有可能混入其中，且兩者菌落形態(tài)相似。請設(shè)計一個簡單實(shí)驗(yàn)，區(qū)分篩選平板上的醋酸菌和乳酸菌。(簡要寫出實(shí)驗(yàn)步驟和預(yù)期結(jié)果)酸醋酸菌產(chǎn)生的醋酸使碳酸鈣溶解產(chǎn)生透明圈，從而篩選菌株碳源將篩選培養(yǎng)基放入無氧環(huán)境中培養(yǎng)，透明圈變大的為乳酸菌，透明圈大小不變的為醋酸菌解析：(3)醋酸菌適于在酸性環(huán)境中生存，因此應(yīng)將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性。由于醋酸菌產(chǎn)生的醋酸遇到碳酸鈣會使碳酸鈣溶解，因此在培養(yǎng)基中加入碳酸鈣，優(yōu)良菌株產(chǎn)生的醋酸較多，能使碳酸鈣溶解產(chǎn)生較大的透明圈，從而篩選菌株。在缺少糖源的培養(yǎng)基中加入乙醇，可提供碳源。(4)醋酸菌為好氧菌，只能在有氧條件下生存，乳酸菌為兼性厭氧型菌，在有氧和無氧條件都可生存，故可將篩選培養(yǎng)基放入無氧環(huán)境中培養(yǎng)，透明圈變大的菌落為乳酸菌，透明圈大小不變的菌落為醋酸菌。

時期時段(天)鹽度(%)溫度(℃)前期0～12612中期12～16637后期16～301537兩種工藝的結(jié)果比較如下圖。(1)下列關(guān)于本研究的實(shí)驗(yàn)方法與原理的描述，錯誤的是(

)A．發(fā)酵開始階段的微生物主要來源于制曲過程的積累B．蠶豆瓣可提供微生物生長繁殖所需的碳源和氮源C．溫度與鹽度都影響微生物的生長繁殖D．定期取樣，使用平板劃線法統(tǒng)計活細(xì)菌總數(shù)(2)下列對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析，錯誤的是(

)A．新工藝中期活霉菌總數(shù)下降由溫度升高導(dǎo)致B．新工藝后期活細(xì)菌總數(shù)下降由溫度、鹽度均升高導(dǎo)致C.新工藝中期氨基酸產(chǎn)生速率較前期末加快，是因?yàn)闇囟壬咛岣吡说鞍酌富钚訢．新工藝中甜瓣子風(fēng)味提升，與前、中期活微生物總數(shù)高和氨基酸終產(chǎn)量高均有關(guān)DB解析：(1)根據(jù)工藝流程可知，蠶豆瓣制曲形成豆瓣曲，說明發(fā)酵開始階段的微生物主要來源于制曲過程的積累，A正確；蠶豆瓣含有豐富的糖類和蛋白質(zhì)，因此蠶豆瓣可為微生物的生長繁殖提供碳源和氮源，B正確；根據(jù)圖中發(fā)酵前期、中期和后期的活霉菌、活細(xì)菌總數(shù)變化以及表格數(shù)據(jù)可知，溫度與鹽度都影響微生物的生長繁殖，C正確；定期取樣，使用稀釋涂布平板法統(tǒng)計活細(xì)菌總數(shù)，D錯誤。(2)與前期相比，中期的鹽度不變，溫度上升，因此新工藝中期活霉菌總數(shù)下降與溫度升高有關(guān)，A正確；新工藝中期、后期溫度不變，鹽度升高，因此新工藝后期活細(xì)菌總數(shù)下降是由鹽度升高導(dǎo)致的，B錯誤；與前期末相比，新工藝中期氨基酸產(chǎn)生速率加快，是因?yàn)闇囟扔?2℃升高到37℃，溫度升高提高了蛋白酶活性，C正確；綜合分析三圖中兩條曲線的變化，新工藝中甜瓣子風(fēng)味提升，與前、中期活微生物總數(shù)高和氨基酸終產(chǎn)量高均存在密切關(guān)系，D正確。類型2小高考共性借鑒6．[2020·江蘇卷，31]產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究。請回答下列問題：(1)常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)中，下列物品及其滅菌方法錯誤的是______(填編號)。編號①②③④物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧(2)稱取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)________后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長出了46個酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌__________________個。(3)為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對分離所得的菌株，采用射線輻照進(jìn)行________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以______________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑________的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。④梯度稀釋×105(或460000)誘變脂肪(或油脂)較大解析：(1)涂布器一般用干熱滅菌法或灼燒滅菌法進(jìn)行滅菌。(2)99mL無菌水中加入1.0g土壤制成的菌懸液為100mL，取稀釋10倍后的菌懸液0.1mL涂布平板，平板上的平均菌落數(shù)為46，則每克土壤約含酵母菌×10×100＝×105(個)。(3)輻射可以提高基因突變的頻率，利用射線輻照進(jìn)行的育種為誘變育種。本實(shí)驗(yàn)的目的是篩選產(chǎn)脂肪酶的菌株，所用的培養(yǎng)基應(yīng)該以脂肪(或油脂)為唯一碳源；最終形成的菌落直徑越大，形成該菌落的菌株分解脂肪(或油脂)的能力越強(qiáng)，生產(chǎn)脂肪酶的能力也越大。(4)在處理含油廢水的同時，可獲得單細(xì)胞蛋白，實(shí)現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株________進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是__________________________________________________________。B

該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強(qiáng)，凈化效果好解析：(4)由圖可知，相對于菌株A，菌株B的增殖速度更快，降解脂肪能力更強(qiáng)；根據(jù)題干信息“在處理含油廢水的同時，可獲得單細(xì)胞蛋白”可進(jìn)一步推知菌株B處理含油廢水時可得到更多的單細(xì)胞蛋白，故菌株B更適合作為后續(xù)研究的材料。7．[2019·海南卷，節(jié)選]回答下列問題。(2)某同學(xué)在通過發(fā)酵制作果酒時，發(fā)現(xiàn)在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度，原因是_______________________________________________________________________________________。在家庭以葡萄為原料制作葡萄酒時，可以不添加酵母菌，原因是___________________________；在制作葡萄酒的過程中，如果密封不嚴(yán)混入空氣，發(fā)酵液會變酸，可能的原因是____________________________。

糖類是主要的能源物質(zhì)，可以為酵母菌的生長、繁殖提供能源物質(zhì)，還可以作為酒精發(fā)酵的原料葡萄皮上附著有野生的酵母菌醋酸菌大量增殖，進(jìn)行醋酸發(fā)酵解析：(2)糖類是主要的能源物質(zhì)，可以為酵母菌的生長、繁殖提供能源物質(zhì)，還可以作為酒精發(fā)酵的原料。故在通過發(fā)酵制作果酒時，在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度。在家庭以葡萄為原料制作葡萄酒時，由于葡萄皮上附著有野生的酵母菌，故可以不添加酵母菌；在制作葡萄酒的過程中，如果密封不嚴(yán)混入空氣，會造成醋酸菌大量增殖，進(jìn)行醋酸發(fā)酵，發(fā)酵液會變酸。8．[2018·江蘇卷，31]酵母的蛋白質(zhì)含量可達(dá)自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業(yè)廢甲醇作為碳源進(jìn)行培養(yǎng)，這樣既可減少污染又可降低生產(chǎn)成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進(jìn)行大量培養(yǎng)。下圖所示為操作流程，請回答下列問題：(1)配制培養(yǎng)基時，按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分，將其溶解、定容后，調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的_____，及時對培養(yǎng)基進(jìn)行分裝，并進(jìn)行__________滅菌。(2)取步驟②中不同梯度的稀釋液加入標(biāo)記好的無菌培養(yǎng)皿中，在步驟③中將溫度約________(在25℃、50℃或80℃中選擇)的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿混勻，冷凝后倒置培養(yǎng)。(3)挑取分離平板中長出的單菌落，按步驟④所示進(jìn)行劃線。下列敘述合理的有___________。a．為保證無菌操作，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌b．劃線時應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，以免不能形成正常菌落c．挑取菌落時，應(yīng)挑取多個菌落，分別測定酵母細(xì)胞中甲醇的含量d．可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，可獲得甲醇高耐受株pH高壓蒸汽50℃a、b、d解析：(1)配制培養(yǎng)基的操作步驟為稱量→溶化→定容→調(diào)pH→培養(yǎng)基的分裝→包扎→滅菌，因此微生物的培養(yǎng)基配制好后應(yīng)該先調(diào)節(jié)pH，再分裝。常見的滅菌方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌。培養(yǎng)基適宜用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。(2)在步驟③中，待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時進(jìn)行倒平板。(3)在劃線過程中，接種針、接種環(huán)使用前都必須滅菌，以防止雜菌污染，a正確；劃線時應(yīng)避免劃破培養(yǎng)基表面，否則將不能形成正常菌落，b正確；該實(shí)驗(yàn)的目的是獲得利用工業(yè)廢甲醇作為碳源的酵母菌，不需要測定酵母菌中的甲醇含量，c錯誤；培養(yǎng)基中的甲醇濃度越高，此種培養(yǎng)基中得以生存的酵母菌利用甲醇的能力越強(qiáng)，因此可以通過逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度，可獲得甲醇高耐受株，d正確。(4)步驟⑤中，為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和________供應(yīng)。為監(jiān)測酵母的活細(xì)胞密度，將發(fā)酵液稀釋1000倍后，經(jīng)等體積臺盼藍(lán)染液染色，用25×16型血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)5個中格中的細(xì)胞數(shù)，理論上____色細(xì)胞的個數(shù)應(yīng)不少于_____，才能達(dá)到每毫升3×109個活細(xì)胞的預(yù)期密度。氧氣無30解析：(4)酵母菌通過有氧呼吸大量繁殖，因此為使酵母數(shù)量迅速增加，培養(yǎng)過程中需保證充足的營養(yǎng)和氧氣供應(yīng)；臺盼藍(lán)是大分子物質(zhì)，不能將活細(xì)胞染色，再根據(jù)25×16型的血球計數(shù)板：1毫升懸液中待測標(biāo)本(菌體)總數(shù)＝80小方格內(nèi)菌體數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)。而臺盼藍(lán)與菌液等體積加入，因此要達(dá)到每毫升3×109個活細(xì)胞的預(yù)期密度，理論上無色細(xì)胞數(shù)應(yīng)該不少于(3×109)÷(1000×2×104×400÷80)＝30個。9．[2017·江蘇卷，31]苯酚及其衍生物廣泛存在于工業(yè)廢水中，對環(huán)境有嚴(yán)重危害。小明同學(xué)準(zhǔn)備依據(jù)下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題：(1)酚降解菌富集培養(yǎng)基含有蛋白胨、K2HPO4、MgSO4、苯酚和水，其中可作為碳源的有______________。(2)將采集到的樣品接種培養(yǎng)，苯酚用量應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸______，以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集，應(yīng)進(jìn)一步________，以便于菌落計數(shù)與分離。制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加________。

(3)右圖為連續(xù)劃線法示意圖，在圖中________(填圖中序號)區(qū)域更易獲得單菌落。蛋白胨、苯酚增加稀釋涂布凝固劑③解析：(1)分析富集培養(yǎng)基的成分可知，培養(yǎng)基中蛋白胨、苯酚都是含碳有機(jī)物，可作為碳源。(2)在接種培養(yǎng)時，隨轉(zhuǎn)接次數(shù)的增加，應(yīng)逐漸增加培養(yǎng)基中苯酚(碳源)的含量，以達(dá)到富集酚降解菌的目的。若接種培養(yǎng)后平板中菌落過于密集，應(yīng)繼續(xù)稀釋涂布，以降低平板上的菌落密度，便于菌落計數(shù)與分離。稀釋涂布時所用的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，制備平板培養(yǎng)基時除了需要水、營養(yǎng)物質(zhì)外，還必須添加瓊脂等物質(zhì)作為凝固劑。(3)利用連續(xù)劃線法接種時，越在最后劃線區(qū)域，菌落的密度越稀，越容易獲得單菌落，所以，圖中③區(qū)域更易獲得單菌落。(4)采用比色測定法(使用苯酚顯色劑)檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進(jìn)行顯色反應(yīng)，下表中1～5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為________________________。如果廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋_______(填序號：①5

②10

③20)倍后，再進(jìn)行比色。管號123456苯酚濃度(mg/L)

10、、、、③解析：(4)根據(jù)表中6號比色管中苯酚濃度為1mg/L可以推知，1～5號比色管的苯酚濃度應(yīng)分別為0mg/L、0.2mg/L、0.4mg/L、0.6mg/L、0.8mg/L。根據(jù)題意，廢水為50mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，要使稀釋后的苯酚殘留液濃度介于0～1mg/L之間，需將殘留液稀釋20倍左右，再進(jìn)行比色。類型3原味品全國卷非選擇題10．[2021·全國乙卷]工業(yè)上所說的發(fā)酵是指微生物在有氧或無氧條件下通過分解與合成代謝將某些原料物質(zhì)轉(zhuǎn)化為特定產(chǎn)品的過程。利用微生物發(fā)酵制作醬油在我國具有悠久的歷史。某企業(yè)通過發(fā)酵制作醬油的流程示意圖如下?；卮鹣铝袉栴}：(1)米曲霉發(fā)酵過程中，加入大豆、小麥和麥麩可以為米曲霉的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)，大豆中的_______可為米曲霉的生長提供氮源，小麥中的淀粉可為米曲霉的生長提供______。(2)米曲霉發(fā)酵過程的主要目的是使米曲霉充分生長繁殖，大量分泌制作醬油過程所需的酶類，這些酶中的________、________能分別將發(fā)酵池中的蛋白質(zhì)和脂肪分解成易于吸收、風(fēng)味獨(dú)特的成分，如將蛋白質(zhì)分解為小分子的肽和________。米曲霉發(fā)酵過程需要提供營養(yǎng)物質(zhì)，通入空氣并攪拌，由此可以判斷米曲霉屬于________(填“自養(yǎng)厭氧”“異養(yǎng)厭氧”或“異養(yǎng)好氧”)微生物。(3)在發(fā)酵池發(fā)酵階段添加的乳酸菌屬于________(填“真核生物”或“原核生物”)；添加的酵母菌在無氧條件下分解葡萄糖的產(chǎn)物是________。在該階段抑制雜菌污染和繁殖是保證醬油質(zhì)量的重要因素，據(jù)圖分析該階段中可以抑制雜菌生長的物質(zhì)是_________________(答出1點(diǎn)即可)。蛋白質(zhì)碳源蛋白酶脂肪酶氨基酸

異養(yǎng)好氧原核生物CO2和酒精酒精(乳酸、食鹽)解析：(1)大豆的主要成分為蛋白質(zhì)，可為米曲霉的生長提供氮源；淀粉屬于多糖，小麥中的淀粉可為米曲霉的生長提供碳源。(2)蛋白酶可以將蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以將脂肪水解為甘油和脂肪酸。由題干信息可知，米曲霉發(fā)酵過程需要提供營養(yǎng)物質(zhì)、通入空氣并攪拌，可推斷出米曲霉屬于異養(yǎng)好氧微生物。(3)乳酸菌為原核生物。酵母菌在無氧條件下通過無氧呼吸將葡萄糖分解成CO2和酒精。在發(fā)酵池發(fā)酵階段添加的酵母菌和乳酸菌通過無氧呼吸產(chǎn)生的酒精、乳酸可以抑制雜菌的生長，加入的食鹽也可抑制雜菌生長。11．[2020·全國卷Ⅰ，37]某種物質(zhì)S(一種含有C、H、N的有機(jī)物)難以降解，會對環(huán)境造成污染，只有某些細(xì)菌能降解S。研究人員按照下圖所示流程從淤泥中分離得到能高效降解S的細(xì)菌菌株。實(shí)驗(yàn)過程中需要甲、乙兩種培養(yǎng)基，甲的組分為無機(jī)鹽、水和S，乙的組分為無機(jī)鹽、水、S和Y?；卮鹣铝袉栴}：(1)實(shí)驗(yàn)時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶通常采用___________的方法進(jìn)行滅菌。乙培養(yǎng)基中的Y物質(zhì)是______。甲、乙培養(yǎng)基均屬于______培養(yǎng)基。(2)實(shí)驗(yàn)中初步估測搖瓶M中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個/mL，若要在每個平板上涂布100μL稀釋后的菌液，且保證每個平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋_____倍。(3)在步驟⑤的篩選過程中，發(fā)現(xiàn)當(dāng)培養(yǎng)基中的S超過某一濃度時，某菌株對S的降解量反而下降，其原因可能是_______________________________(答出1點(diǎn)即可)。(4)若要測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)，請寫出主要實(shí)驗(yàn)步驟：____________________________________________________________。(5)上述實(shí)驗(yàn)中，甲、乙兩種培養(yǎng)基所含有的組分雖然不同，但都能為細(xì)菌的生長提供4類營養(yǎng)物質(zhì)，即_________________________。高壓蒸汽滅菌瓊脂選擇104

S的濃度超過某一值時會抑制菌株的生長取淤泥加入無菌水中，涂布(或稀釋涂布)到乙培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數(shù)水、碳源、氮源和無機(jī)鹽解析：(1)實(shí)驗(yàn)時，盛有水或培養(yǎng)基的搖瓶常采用高壓蒸汽滅菌法進(jìn)行滅菌。題圖中搖瓶M內(nèi)裝有液體培養(yǎng)基甲，培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基乙為固體培養(yǎng)基，相比甲需添加凝固劑Y瓊脂。依據(jù)題干信息，甲、乙培養(yǎng)基均為以S(一種含有C、H、N的有機(jī)物)為唯一氮源和碳源的培養(yǎng)基，可抑制或阻止其他微生物繁殖，僅使能夠降解和利用S的菌株生長和繁殖，故屬于選擇培養(yǎng)基。(2)若使平板上長出的菌落數(shù)不超過200個，則接種液中的菌體濃度至多為200個/0.1mL＝2×103個/mL，已知搖瓶M中的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個/mL，則至少應(yīng)將搖瓶M中的菌液稀釋104倍。(3)S作為一種營養(yǎng)物質(zhì)，在培養(yǎng)基中濃度過高，可導(dǎo)致培養(yǎng)液滲透壓升高，細(xì)菌細(xì)胞滲透失水，使其代謝速率下降；另一方面S作為污染物，其濃度過高可能抑制菌體生長、代謝和繁殖。(4)若要測定淤泥中能降解S的細(xì)菌細(xì)胞數(shù)，需進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)步驟如下：稱取一定質(zhì)量(10g)的淤泥溶于一定體積的(90mL)無菌水中，制備土壤浸出液，經(jīng)梯度稀釋(對于細(xì)菌，一般選用104、105、106倍的稀釋液)后，采用稀釋涂布平板法接種于以S為唯一碳源和氮源的固體培養(yǎng)基(即乙培養(yǎng)基)中，每個稀釋倍數(shù)下設(shè)置三組重復(fù)實(shí)驗(yàn)；在適宜條件下培養(yǎng)，待長出菌落且菌落數(shù)目達(dá)到穩(wěn)定后，選取菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)，統(tǒng)計并計算平均值。(5)在甲、乙兩種培養(yǎng)基中，S既作為碳源，又作為氮源，同時培養(yǎng)基中還含有水、無機(jī)鹽等營養(yǎng)物質(zhì)。12．[2019·全國卷Ⅰ，37]已知一種有機(jī)物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細(xì)菌(目標(biāo)菌)。Ⅰ號培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X(5g/L)。Ⅱ號培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(15g/L)。Ⅲ號培養(yǎng)基：氯化鈉(5g/L)，硝酸銨(3g/L)，其他無機(jī)鹽(適量)，X(45g/L)。回答下列問題。(1)在Ⅰ號培養(yǎng)基中，為微生物提供氮源的是______________。Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機(jī)物是____。(2)若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，不能降解X的細(xì)菌比例會______，其原因是____________________________________________________。(3)Ⅱ號培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目標(biāo)菌并對菌落進(jìn)行計數(shù)，接種時，應(yīng)采用的方法是________________。(4)假設(shè)從Ⅲ號培養(yǎng)基中得到了能高效降解X的細(xì)菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供______和__________________。牛肉膏、蛋白胨X下降不能降解X的細(xì)菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的細(xì)菌能夠增殖稀釋涂布平板法能量合成其他物質(zhì)的原料解析：(1)在Ⅰ號培養(yǎng)基中，牛肉膏、蛋白胨可以為微生物提供氮源，Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的是有機(jī)物X。(2)Ⅱ號培養(yǎng)基中，碳源只有X，不能降解X的細(xì)菌會因缺乏碳源而不能增殖，使該類細(xì)菌比例降低。(3)利用固體培養(yǎng)基對菌落進(jìn)行計數(shù)時，需采用稀釋涂布平板法進(jìn)行接種。(4)在有氧條件下，丙酮酸可被分解為CO2和H2O且釋放能量，為該菌的生長提供能量和合成其他物質(zhì)的原料。13．[2019·全國卷Ⅱ，37]物質(zhì)W是一種含氮有機(jī)物，會污染土壤。W在培養(yǎng)基中達(dá)到一定量時培養(yǎng)基表現(xiàn)為不透明。某研究小組欲從土壤中篩選出能降解W的細(xì)菌(目標(biāo)菌)。回答下列問題。(1)要從土壤中分離目標(biāo)菌，所用選擇培養(yǎng)基中的氮源應(yīng)該是_____。(2)在從土壤中分離目標(biāo)菌的過程中，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上甲、乙兩種細(xì)菌都能生長并形成菌落(如圖所示)。如果要得到目標(biāo)菌，應(yīng)該選擇______菌落進(jìn)一步純化，選擇的依據(jù)是_______________________________________。W乙乙菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明乙菌能降解W解析：(1)要從土壤中分離能降解W的細(xì)菌，培養(yǎng)基中應(yīng)以W為唯一氮源。(2)乙菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明乙菌能降解W。(3)土壤中的某些微生物可以利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?。若要設(shè)計實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定甲、乙菌能否利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?，請簡要寫出?shí)驗(yàn)思路、預(yù)期結(jié)果和結(jié)論，即_________________________________________________________________________________________________________。(4)該小組將人工合成的一段DNA轉(zhuǎn)入大腸桿菌，使大腸桿菌產(chǎn)生能降解W的酶(酶E)。為了比較酶E與天然酶降解W能力的差異，該小組擬進(jìn)行如下實(shí)驗(yàn)，請完善相關(guān)內(nèi)容。①在含有一定濃度W的固體培養(yǎng)基上，A處滴加含有酶E的緩沖液，B處滴加含有相同濃度天然酶的緩沖液，C處滴加_________，三處滴加量相同。②一段時間后，測量透明圈的直徑。若C處沒有出現(xiàn)透明圈，說明__________________；若A、B處形成的透明圈直徑大小相近，說明_________________________________。

將甲、乙菌分別接種在無氮源培養(yǎng)基上，若細(xì)菌能生長，則說明該細(xì)菌能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈淳彌_液緩沖液不能降解W酶E與天然酶降解W的能力相近解析：(3)要判斷甲、乙能否利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈矗瑧?yīng)將甲、乙菌分別接種在無氮源的培養(yǎng)基上，觀察細(xì)菌能否生長，若細(xì)菌能生長，則說明該細(xì)菌能利用空氣中的氮?dú)庾鳛榈?，否則不能。(4)①實(shí)驗(yàn)設(shè)計應(yīng)遵循單一變量原則，C處應(yīng)滴加等量不含酶的緩沖液。②C處只滴加等量緩沖液，若C處沒有出現(xiàn)透明圈，說明緩沖液不能降解W，若A、B處形成的透明圈直徑大小相近，說明酶E與天然酶降解W的能力相近。14．[2019·全國卷Ⅲ，37]回答下列與細(xì)菌培養(yǎng)相關(guān)的問題。(1)在細(xì)菌培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中能同時提供碳源、氮源的成分是__________(填“蛋白胨”“葡萄糖”或“NaNO3”)。通常，制備培養(yǎng)基時要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH，其原因是_______________________________。硝化細(xì)菌在沒有碳源的培養(yǎng)基上_____(填“能夠”或“不能”)生長，原因是___________________________________。(2)用平板培養(yǎng)細(xì)菌時一般需要將平板______(填“倒置”或“正置”)。(3)單個細(xì)菌在平板上會形成菌落，研究人員通常可根據(jù)菌落的形狀、大小、顏色等特征來初步區(qū)分不同種的微生物，原因是_______________________________________________________。(4)有些使用后的培養(yǎng)基在丟棄前需要經(jīng)過_______處理，這種處理可以殺死丟棄物中所有的微生物。蛋白胨不同細(xì)菌生長繁殖所需的最適pH不同能夠硝化細(xì)菌可以利用空氣中的CO2作為碳源倒置在一定的培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征滅菌解析：(1)細(xì)菌培養(yǎng)時需要碳源、氮源、水和無機(jī)鹽等，蛋白胨能同時提供碳源、氮源，葡萄糖提供碳源，NaNO3不能提供碳源，可提供無機(jī)氮源。不同細(xì)菌生長繁殖所需的最適pH不同，故制備培養(yǎng)基時需要根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)菌的不同來調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH。硝化細(xì)菌是自養(yǎng)型細(xì)菌，可以利用空氣中的CO2作為碳源，故硝化細(xì)菌可在沒有碳源的培養(yǎng)基上生長。(2)為防止培養(yǎng)皿蓋的冷凝水落入培養(yǎng)基造成污染，用平板培養(yǎng)細(xì)菌時一般需將平板倒置。(3)在一定培養(yǎng)條件下，不同種微生物表現(xiàn)出各自穩(wěn)定的菌落特征，如特定的形狀、大小、顏色、隆起程度等，所以依據(jù)菌落的特征，可以初步區(qū)分不同種的微生物。(4)為防止污染環(huán)境，使用后的培養(yǎng)基丟棄前要都經(jīng)過滅菌處理，以便殺死丟棄物中所有的微生物。15．[2018·全國卷Ⅰ，37]將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到M培養(yǎng)基?；卮鹣铝袉栴}：(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制______的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于_____培養(yǎng)基。(2)M培養(yǎng)基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)類型除氮源外還有____________(答出兩點(diǎn)即可)。氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參與合成的生物大分子有____________(答出兩點(diǎn)即可)。細(xì)菌選擇碳源、無機(jī)鹽蛋白質(zhì)、核酸解析：(1)M培養(yǎng)基若用于真菌的篩選，要求M培養(yǎng)基能滿足真菌的生長，且能抑制其他微生物的生長，則培養(yǎng)基中應(yīng)加入鏈霉素以抑制細(xì)菌的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。(2)微生物生長需要多種營養(yǎng)物質(zhì)，除氮源外，還需要碳源、無機(jī)鹽、水以及特殊營養(yǎng)物質(zhì)等。氮源進(jìn)入細(xì)胞后，可參與合成的生物大分子有蛋白質(zhì)和核酸。(3)若在M培養(yǎng)基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養(yǎng)，平板上長出菌落后可通過加入顯色劑篩選出能產(chǎn)淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是______，該方法能篩選出產(chǎn)淀粉酶微生物的原理是_____________________________________________________。(4)甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數(shù)量，在同一稀釋倍數(shù)下得到以下結(jié)果：甲同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是110、140和149，取平均值133；乙同學(xué)涂布了3個平板，統(tǒng)計的菌落數(shù)分別是27、169和176，取平均值124。有人認(rèn)為這兩位同學(xué)的結(jié)果中，乙同學(xué)的結(jié)果可信度低，其原因是________________________________________________________。碘液淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈乙同學(xué)的結(jié)果中，1個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差解析：(3)篩選產(chǎn)淀粉酶的微生物，依據(jù)淀粉遇碘液顯藍(lán)色，產(chǎn)淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈，再根據(jù)透明圈，來篩選產(chǎn)淀粉酶的微生物。(4)乙同學(xué)的結(jié)果不合理，因?yàn)槠渲?個平板的計數(shù)結(jié)果與另2個相差懸殊，結(jié)果的重復(fù)性差，不能簡單的用其平均數(shù)作為最終結(jié)果。16．[2018·全國卷Ⅱ，37]在生產(chǎn)、生活和科研實(shí)踐中，經(jīng)常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染?；卮鹣铝袉栴}：(1)在實(shí)驗(yàn)室中，玻璃和金屬材質(zhì)的實(shí)驗(yàn)器具_(dá)_____(填“可以”或“不可以”)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是______________________________________。(3)密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能________________。在照射前，適量噴灑________，可強(qiáng)化消毒效果。可以在達(dá)到消毒目的的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少破壞DNA結(jié)構(gòu)消毒液解析：(1)能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等可以放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌。(2)煮沸消毒法即在100℃煮沸5～6min可以殺死微生物細(xì)胞和一部分芽孢；巴氏消毒法即在70～75℃煮30min或在80℃煮15min，可以殺死微生物，并且保證營養(yǎng)物質(zhì)不被破壞。因此，與煮沸消毒法相比，牛奶消毒常采用的巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法的優(yōu)點(diǎn)是在達(dá)到消毒的同時，營養(yǎng)物質(zhì)損失較少。(3)因紫外線能破壞DNA結(jié)構(gòu)，所以密閉空間內(nèi)的空氣可采用紫外線照射消毒。在照射前，適量噴灑消毒液，可強(qiáng)化消毒效果。(4)水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過______(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀”)消毒的。(5)某同學(xué)在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度，最可能的原因是____________________。氯氣未將鍋內(nèi)冷空氣排盡解析：(4)通常乙醇消毒是使用75%的酒精，有氣味，影響水質(zhì)，不適宜消毒自來水；高錳酸鉀本身有顏色，消毒后溶液呈紫紅色，無法使用；因此水廠供應(yīng)的自來水通常是經(jīng)過氯氣消毒的。(5)采用高壓蒸汽滅菌時，鍋內(nèi)的水加熱煮沸，將其中原有的冷空氣徹底排除后才能將鍋密閉。如果未將鍋內(nèi)冷空氣排盡，則會出現(xiàn)壓力達(dá)到設(shè)定要求，而鍋內(nèi)并沒有達(dá)到相應(yīng)溫度的現(xiàn)象。類型4整體對比歷年同類題，找共性和趨勢17．[全國卷Ⅱ，39]蘋果醋是以蘋果汁為原料經(jīng)發(fā)酵而成的，回答下列問題：(1)酵母菌的呼吸代謝途徑如圖所示。圖中過程①和②是蘋果醋生產(chǎn)的第一階段，在酵母菌細(xì)胞的__________中進(jìn)行，其產(chǎn)物乙醇與__________試劑反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色，這一反應(yīng)可用于乙醇的檢驗(yàn)；過程③在酵母菌細(xì)胞的_______中進(jìn)行。與無氧條件相比，在有氧條件下，酵母菌的增殖速度____。(2)第二階段是在醋酸桿菌的作用下將第一階段產(chǎn)生的乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬倪^程，根據(jù)醋酸桿菌的呼吸作用類型，該過程需要在______條件下才能完成。(3)在生產(chǎn)過程中，第一階段和第二階段的發(fā)酵溫度不同，第一階段的溫度_____(填“低于”或“高于”)第二階段的。(4)醋酸桿菌屬于____核生物，其細(xì)胞結(jié)構(gòu)中______(填“含有”或“不含有”)線粒體。細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)重鉻酸鉀線粒體快有氧低于原不含有解析：(1)圖示中的過程①和②分別表示無氧呼吸的第一、第二階段，其場所均為細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)；橙色的重鉻酸鉀溶液，在酸性條件下與乙醇(酒精)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，變成灰綠色。過程③表示有氧呼吸的第二、三階段，其場所分別為線粒體基質(zhì)和線粒體內(nèi)膜，即在酵母菌細(xì)胞的線粒體中進(jìn)行。與無氧條件相比，有氧條件下酵母菌的增殖速度快。(2)醋酸桿菌是一種好氧菌，在氧氣充足的條件下才能進(jìn)行旺盛的生命活動，因此將第一階段產(chǎn)生的乙醇轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬倪^程，需要在有氧條件下才能完成。(3)第一階段即果酒的制作，所控制的溫度范圍是18～25℃，第二階段即果醋的制作，所控制的溫度范圍是30～35℃，所以第一階段的溫度低于第二階段的溫度。(4)醋酸桿菌屬于原核生物，其細(xì)胞結(jié)構(gòu)中不含線粒體等復(fù)雜的細(xì)胞器。18．[全國卷Ⅲ，39]某同學(xué)用新鮮的泡菜濾液為實(shí)驗(yàn)材料分離純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣?；卮鹣铝袉栴}：(1)分離純化乳酸菌時，首先需要用_______對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋，進(jìn)行梯度稀釋的理由是_____________________________________________。(2)推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有____________和________________。分離純化時應(yīng)挑選出____________的菌落作為候選菌。(3)乳酸菌在－20℃長期保存時，菌液中常需要加入一定量的__________(填“蒸餾水”、“甘油”或“碳酸鈣”)。無菌水

泡菜濾液中菌的濃度高，直接培養(yǎng)很難分離得到單菌落鑒別乳酸菌中和產(chǎn)生的乳酸(或酸)具有透明圈甘油解析：(1)分離純化乳酸菌時，首先需要用無菌水對泡菜濾液進(jìn)行梯度稀釋；進(jìn)行梯度稀釋的理由是在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的乳酸菌將被分散成單個細(xì)胞，通過培養(yǎng)，從而能在培養(yǎng)基表面形成單菌落。若直接培養(yǎng)，由于泡菜濾液中菌的濃度高，則很難分離得到單菌落。(2)由題意可知，分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生的乳酸能溶解培養(yǎng)基中的碳酸鈣。由此可推測在分離純化所用的培養(yǎng)基中加入碳酸鈣的作用有中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生的乳酸和鑒別乳酸菌；根據(jù)產(chǎn)酸菌在含CaCO3的培養(yǎng)基上產(chǎn)生透明圈的原理，分離純化時應(yīng)挑選出具有透明圈的菌落作為候選菌，然后用平板劃線法進(jìn)一步分離純化。(3)對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。即將1mL培養(yǎng)的菌種轉(zhuǎn)移到已滅菌的盛有1mL甘油的甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。所以乳酸菌在－20℃長期保存時，菌液中需要加入一定量的甘油。答案：AC解析：甲培養(yǎng)皿的菌落均勻分布，接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，A正確；甲、丙培養(yǎng)基菌落數(shù)目多，包括野生型酵母菌菌株和某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿菌株是某種營養(yǎng)缺陷型酵母菌菌株，乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，甲和丙是加入了同種營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，B錯誤；由于基因突變具有不定向性，接種到甲培養(yǎng)皿的酵母菌可能還有其他營養(yǎng)缺陷型，且有些菌落不一定由一個酵母菌形成，所以，甲培養(yǎng)皿中菌落數(shù)有可能比接種的酵母菌數(shù)少，C正確；乙培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基是基本培養(yǎng)基，形成的菌落只可能是野生型菌落，D錯誤。成分含量蛋白胨10.0g乳糖5.0gNaCl5.0g瓊脂12.0g將上述物質(zhì)溶解后，用蒸餾水定容到1000mL(1)該培養(yǎng)基中蛋白胨為微生物生長提供了____________和維生素。(2)分離大腸桿菌時，常用的接種方法有_____________________________。(3)培養(yǎng)大腸桿菌時，通常需要檢測培養(yǎng)基是否被污染，對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_____________________________________。對已使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過________處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物污染環(huán)境。(4)為檢測水體中大腸桿菌數(shù)量，可在上表中的培養(yǎng)基中添加伊紅美藍(lán)染料，將水樣適當(dāng)稀釋后，取樣涂布在該培養(yǎng)基中，適宜條件下培養(yǎng)后選擇顏色為黑色的菌落進(jìn)行計數(shù)。該方法的原理是①_______________________________________________________；②_______________________________________________________________________________________。碳源、氮源平板劃線法和稀釋涂布平板法將未接種的培養(yǎng)基在相同條件下進(jìn)行培養(yǎng)滅菌大腸桿菌代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍(lán)反應(yīng)，使菌落呈黑色當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌解析：(1)培養(yǎng)基中的蛋白胨可以為微生物的生長繁殖提供碳源、氮源和維生素。(2)常見的微生物的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法。(3)培養(yǎng)微生物時，在接種前通常需要檢測培養(yǎng)基是否被污染，對于固體培養(yǎng)基應(yīng)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。對已使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散，造成環(huán)境污染。(4)根據(jù)題意可知，“大腸桿菌代謝產(chǎn)物能與染料伊紅美藍(lán)反應(yīng)，使菌落呈黑色”，因此為檢測嚴(yán)重污染水體中大腸桿菌數(shù)量，將水樣適當(dāng)稀釋后，取樣涂布在上述平板培養(yǎng)基中，應(yīng)選擇顏色為黑色的菌落進(jìn)行計數(shù)，該方法是通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)來推測樣品中的活菌數(shù)，其原理是當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌。3．[2021·廣東梅州市高三一模]隨著生物科學(xué)的發(fā)展，微生物的應(yīng)用范圍在生活中越來越廣泛。例如：微生物在酒類釀造、食品發(fā)酵、藥物研發(fā)和污水處理等方面都扮演著重要角色。請回答下列關(guān)于微生物的問題：(1)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分一般都有水、無機(jī)鹽、__________等。

此外，還要滿足微生物生長對pH、溫度、濕度、氧氣及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的需求。滅菌后的培養(yǎng)基在平板倒好后，需要隨機(jī)選取若干個平板先行培養(yǎng)一段時間

，這樣做的目的是_____________________________________。(2)濾膜法常用來檢測飲用水中的大腸桿菌是否超標(biāo)，這種測定方法的主要原理是大腸桿菌的代謝產(chǎn)物能與培養(yǎng)基中添加的伊紅－美藍(lán)反應(yīng)，使菌落顏色呈_____。若要長時間保藏大腸桿菌，可采用的方法是____________。(3)果醋已經(jīng)成為我們?nèi)粘Ｉ钪酗堊郎系某Ｓ蔑嬃希哂幸欢ǖ谋＝」δ?。果醋在發(fā)酵過程中利用的菌種主要是________，其能產(chǎn)生多種酶，通過________________________技術(shù)將其制作成商品重復(fù)使用。碳源、氮源檢驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌是否合格(無菌檢查)黑色甘油管藏法醋酸菌固定化酶(或固定化細(xì)胞)解析：(1)培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分一般都有水、無機(jī)鹽、碳源、氮源等。此外，還要滿足微生物生長對pH、溫度、濕度、氧氣及特殊營養(yǎng)物質(zhì)的需求。滅菌后的培養(yǎng)基在平板倒好后，為了檢驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌是否合格(無菌檢查)，通常需要隨機(jī)選取若干個平板先行培養(yǎng)一段時間，觀察是否有菌落出現(xiàn)。(2)濾膜法常用來檢測飲用水中的大腸桿菌是否超標(biāo)，該測定方法依據(jù)的原理是大腸桿菌的代謝產(chǎn)物能與培養(yǎng)基中添加的伊紅－美藍(lán)反應(yīng)，使菌落顏色呈現(xiàn)黑色，從而便于辨別計數(shù)。若要長時間保藏大腸桿菌，可采用的方法是甘油管藏法。(3)果醋已經(jīng)成為我們?nèi)粘Ｉ钪酗堊郎系某Ｓ蔑嬃希哂幸欢ǖ谋＝」δ?。果醋制作利用的菌種為醋酸菌，醋酸菌為需氧型微生物，在有氧條件下能將乙醇氧化成乙醛，再進(jìn)一步氧化成乙酸，在糖源充足的情況下，醋酸菌能將糖直接氧化為乙酸。醋酸菌產(chǎn)生的多種酶可通過固定化酶(或固定化細(xì)胞)技術(shù)將其制作成商品重復(fù)使用，固定化酶的優(yōu)點(diǎn)是既能重復(fù)使用，又能與產(chǎn)品分離，降低生產(chǎn)成本。4．[2021·重慶高三三模]隨著人們生活質(zhì)量的提高，餐飲含油脂廢水的排放量大量增加，合理處置油脂廢水也成為新的課題。已知芽孢桿菌中有多種分解油脂并產(chǎn)酸的菌種，科研人員欲采用下列流程篩選出能高效分解油脂的微生物。菌種取樣→分離培養(yǎng)→菌株的篩選→形態(tài)特征觀察和生理生化反應(yīng)鑒定，請回答下列問題：(1)選取飯店附近排污渠的含油脂廢水為樣本，采樣約0.2mL，立即裝于試管內(nèi)，此試管使用前需要經(jīng)過_______處理。(2)樣品分離培養(yǎng)前，一般需要將菌液進(jìn)行______處理，然后吸取0.2mL菌液涂布到營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h，記錄菌落總數(shù)。將分離出的菌株按照菌落__________________________(至少答3點(diǎn))等表觀特征初步分類。滅菌稀釋形狀、大小、隆起程度和顏色解析：(1)微生物培養(yǎng)過程中需要無菌操作，防止雜菌污染，所以試管使用前需要經(jīng)過滅菌處理。(2)菌液一般需要先經(jīng)過稀釋處理，再進(jìn)行涂布。不同微生物菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色不同，所以可以根據(jù)菌落的特征初步分類。(3)上述步驟篩選的菌株分別接種到含“花生油”的瓊脂培養(yǎng)基中，37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，篩選出油脂降解菌，培養(yǎng)基中“花生油”主要為菌種繁殖提供____________。在該培養(yǎng)基還需加入中性紅染料(中性紅為脂溶性染料，遇酸為紅色，遇堿為黃色)，挑選菌株要挑選顯_______降解圈的菌株，并且選顏色較____(填“深”或“淺”)的為宜。(4)實(shí)際操作中，由于油脂易聚集成液滴，常在培養(yǎng)基中加入2～3滴乳化劑使油脂分散均勻，鑒定效果更好，試分析原因__________________________________________________________________________________________________。碳源和能源紅色深

油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面，分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯，便于快速分離和鑒定解析：(3)花生油的主要成分是脂肪，所以可為菌種提供碳源和能源。培養(yǎng)基中的中性紅染料遇酸變?yōu)榧t色，而脂肪可以被分解為甘油和脂肪酸，使培養(yǎng)基呈酸性，所以可選擇紅色降解圈的菌株，并且顏色較深的脂肪酸含量越高，說明油脂降解菌的分解能力越強(qiáng)。(4)油脂乳化后均勻分散在培養(yǎng)基表面，分解油脂的微生物產(chǎn)生的降解圈更為明顯，便于快速分離和鑒定，所以常在培養(yǎng)基中加入2～3滴乳化劑使油脂分散均勻，鑒定效果更好。5．[2021·江蘇連云港市高三模擬]蚯蚓糞中富含細(xì)菌、放線菌和真菌，這些微生物不僅使復(fù)雜物質(zhì)礦化為植物易于吸收的有效物質(zhì)，而且還合成一系列有生物活性的物質(zhì)，如糖、氨基酸、維生素等，這些物質(zhì)的產(chǎn)生使蚓糞具有許多特殊性質(zhì)，成為最有效而無害土壤。某研究小組以新鮮蚯蚓糞為材料，從中篩選出除氨菌?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題：(1)蚯蚓與體內(nèi)的微生物可能有_______________關(guān)系。分離除氨菌首先進(jìn)行富集培養(yǎng)，先將10g新鮮的蚯蚓糞加入到某液體培養(yǎng)基中，振蕩30min后在________中培養(yǎng)。該培養(yǎng)基中的(NH4)2SO4為唯一氮源，該培養(yǎng)基從功能上應(yīng)屬于_____培養(yǎng)基。進(jìn)行富集培養(yǎng)的目的是____________________。(2)將得到的富集培養(yǎng)液進(jìn)行如圖所示操作，其中進(jìn)行步驟⑤和⑥時所用培養(yǎng)基的成分與富集培養(yǎng)基的差異是____________________。培養(yǎng)基在配制和滅菌時，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是________________；實(shí)驗(yàn)室中對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的方法是______________。用上述方法對培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌之前需要______________________________。寄生、互利共生恒溫箱選擇增加除氨菌的濃度(數(shù)量)添加了一定量的瓊脂先調(diào)節(jié)pH后滅菌高壓蒸汽滅菌法(用報紙、牛皮紙和棉線)捆扎解析：(1)蚯蚓與體內(nèi)的微生物可能有寄生、互利共生關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)的目的是篩選除氨菌，因此培養(yǎng)基中應(yīng)以(NH4)2SO4為唯一氮源，從功能上講該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，在恒溫箱中通過富集培養(yǎng)能增加培養(yǎng)液中除氨菌的濃度或數(shù)量。(2)圖中步驟⑤和⑥中所用的培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，需要添加一定量的瓊脂，而富集培養(yǎng)用的是液體培養(yǎng)基，不加瓊脂。培養(yǎng)基在配制和滅菌時需要先調(diào)pH再進(jìn)行滅菌。常用高壓蒸汽滅菌法對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。(3)若用A對應(yīng)的接種方法培養(yǎng)了3個培養(yǎng)皿，菌落數(shù)分別為163個、158個、159個，若與其對照的________________________________，則可以推測富集培養(yǎng)后的菌液中每毫升含除氨菌數(shù)為__________個，否則需要重新實(shí)驗(yàn)。(4)得到的菌種可以接種在___________上進(jìn)行臨時保存。還可加入甘油或石蠟，并在低溫下長期保存。后者的優(yōu)點(diǎn)是__________________