中藥化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)

中藥化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)分進(jìn)展比較全面的檢查，然后進(jìn)展綜合分析，初步推斷有或無那些成分存在。預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果一般只能作為參考，這是由于有些定性試驗(yàn)不是某類化學(xué)成分的特效、故常須對(duì)某些類型化學(xué)成分進(jìn)一步做層析法〔TLC或PC〕檢查，才能進(jìn)一步作出較恰當(dāng)?shù)耐茢?。一、試?yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)中藥化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)原理及方法。2、把握中藥化學(xué)成分的系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)程序及結(jié)果推斷。二、試驗(yàn)原理依據(jù)中藥中所含各類化學(xué)成分在不同極性的溶劑中溶解度不同。先選用不同極性的溶劑把溶解度相近的成分提取出來，分成極性不同的幾個(gè)局部，即供試液；然后再選用各類分析推斷，初步確定有無哪幾類化學(xué)成分。三、試驗(yàn)內(nèi)容〔一〕預(yù)試驗(yàn)溶液的制備1、水提取液5gl00ml50-60ml室溫浸泡過夜。過濾出約20ml濾液供檢查氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)用。60℃左右熱浸半小時(shí)，趁熱過濾，濾液供檢查糖、多糖、有機(jī)酸、皂甙、甙類、酚類、鞣質(zhì)等成分用。2、乙醇提取液另稱取樣品粗粉10g，置于250ml圓底燒瓶中，加95%乙醇100ml，于水浴上加熱回70%，冷至室溫，過濾，濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗100ml石油醚〔60-90℃〕50m140-50ml95%50ml3、酸性乙醇提取液濾液供檢查生物堿用。4、石油醚提取液1g，參與石油醚〔60-90℃〕10ml，濾液供檢查揮發(fā)油、油脂、萜類、甾體化合物等成分用。〔二〕各類成分的檢查1、檢查生物堿類取上述酸性乙醇提取液先用稀氨水調(diào)至中性，再于水浴上蒸干，殘?jiān)?%硫酸5ml溶解后，過濾，濾液供以下試驗(yàn)用。碘化鉍鉀試驗(yàn)：取濾液1ml，參與碘化鉍鉀試劑1-2滴，如有桔紅色沉淀產(chǎn)生，即表示可能有生物堿。1ml1-2滴，如有淺黃色或白色沉淀產(chǎn)生，即表示可能有生物堿。1ml1-2滴，如有淺黃色或灰白色沉淀產(chǎn)生，即表示可能有生物堿。2、檢查氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)類加熱沉淀試驗(yàn)：取冷水浸液1ml，加熱煮沸，如產(chǎn)生渾濁或沉淀，即表示可能有蛋白質(zhì)。雙縮脲試驗(yàn)：取冷水浸液1ml，參與10%氫氧化鈉水溶液2滴，搖勻，再滴加0.5%1-2滴，搖勻，如顯紅色，紅紫色或紫色，即表示可能有多肽、蛋白質(zhì)。茚三酮試驗(yàn)：取冷水浸液1m1，參與0.2%茚三酮乙醇溶液2-3滴，搖勻，于沸水浴5分鐘，冷卻后，如顯藍(lán)色或藍(lán)紫色，即表示可能有氨基酸、多肽和蛋白質(zhì)。吲哚醌試驗(yàn)：取冷水浸液滴于濾紙片上，枯燥后，噴灑吲哚醌試劑，于120℃加熱5分鐘，假設(shè)斑點(diǎn)顯各種顏色，即表示可能有氨基酸。3、檢查復(fù)原糖、多糖和甙類斐林反響：取熱水提取液1ml，參與配制的斐林(Fehling)試劑4-5滴，在沸水浴上5分鐘，如產(chǎn)生磚紅色沉淀，即表示有復(fù)原糖或其它復(fù)原性物質(zhì)。假設(shè)現(xiàn)象不明顯，可4ml10%1ml105%1ml于沸水浴上加熱5分鐘，如產(chǎn)生磚紅色洗淀，即表示可能有多糖或甙類。α-萘酚試驗(yàn)：取熱水提取液1ml5%α-2-3滴，搖勻，沿試管壁緩緩參與濃硫酸lml，在試液與硫酸的交界面產(chǎn)生紫色或紫紅色環(huán)，即表示有糖類，多糖或甙類。5ml1ml95%5ml，假設(shè)生沉淀，過濾，用少量乙醇洗滌沉淀，再將沉淀溶于3ml水中，參與10%鹽酸1ml，于水浴上加熱10分鐘使其水解，冷卻后，加5%氫氧化鈉水溶液調(diào)至中性，然后參與斐林試劑1ml，于沸水浴上加熱5分鐘，如產(chǎn)生磚紅色沉淀，即表示有多糖。4、檢查皂甙類1-2ml2分鐘，如產(chǎn)生大量持續(xù)性泡沫，且放置10分鐘以上，或加熱，或參與乙醇泡沫均無明顯地削減，即表示可能有皂甙。醋酐－濃硫酸反響：取熱水提取液2ml，置于小瓷蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，殘留物1ml溶解，再加醋酐1ml，濃硫酸1滴，如反響液顏色由黃→紅→紫→藍(lán)→污皂甙。在紅色背景中如消滅白色或淡黃色斑點(diǎn)，即表示可能有皂甙。5、檢查有機(jī)酸類pH試紙?jiān)囼?yàn)：取熱水提取液及乙醇提取液，分別用pHpH值，如呈酸性，即表示可能有游離羧酸或酚性化合物。溴酚藍(lán)試驗(yàn)：取乙醇提取液滴于濾紙片上，待枯燥后，噴灑0.1%溴酚藍(lán)的70%乙酸然后暴露在鹽酸蒸汽中，背景漸漸由藍(lán)色變黃色，而有機(jī)酸斑點(diǎn)仍顯藍(lán)色。溴酚藍(lán)變色范圍是：3.0〔黃色〕~4.6〔紫色。溴甲酚綠試驗(yàn)：取乙醇提取液滴于濾紙片上，等枯燥后，噴灑0.04%溴甲酚綠乙醇溶3.8〔黃色〕~5.4〔藍(lán)色。6、檢查酚類化合物和鞣質(zhì)類1ml〔假設(shè)提取液為酸性，可直接進(jìn)展檢1~2墨綠色、藍(lán)紫色，即表示可能有酚類化合物或鞣質(zhì)。三氯化鐵-噴灑三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑，如斑點(diǎn)呈藍(lán)色，即表示可能有酚類、鞣質(zhì)或復(fù)原性化合物。草醛-鹽酸試劑，如斑點(diǎn)呈不同程度的紅色，即表示有間苯二酚和間苯三酚類的化合物。1ml，參與氯化鈉-2-3滴，如有沉淀產(chǎn)生，即表示可能有鞣質(zhì)。7、檢查甾體及三萜類化合物醋酐-2ml，置于小瓷蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，殘留物加1ml溶解，再加醋酐1m1，然后滴加濃硫酸1滴，如反響液顏色由黃→紅→紫→藍(lán)→污綠色，即表示可能有甾體化合物；如反響液顏色僅由黃→紅→紫紅色，即表示可能有三萜類化合物。氯仿-2ml，置于小瓷蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，殘留物加1ml，如氯仿層顯紅色或青色，硫酸層于紫外光燈下觀看有綠色熒光，即表示可能有甾體化合物。8、檢查黃酮類化合物鹽酸-1ml2-3滴〔必要時(shí)水浴加熱，如反響液或產(chǎn)生的泡沫顯紅→紫紅色，即表示可能有黃酮類化合物。1%三氯化鋁乙醇溶液，氨熏試驗(yàn)：取乙醇提取液滴于濾紙片上，待枯燥后，置于濃氨水瓶上熏半分鐘，如斑紙置于紫外光燈下檢視，斑點(diǎn)呈黃色熒光，即表示可能有黃酮類化合物。9、檢查內(nèi)酯、香豆素及其甙類1%氫氧化鉀試劑后斑點(diǎn)有熒光顏色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S綠色，即表示可能有香豆素及其甙類。3%碳酸鈉水溶液1ml于沸水浴加熱3分鐘，冷卻后，參與配制的重氮化試劑1-2滴，如顯紅色，即表示可能有香豆素及其甙類。異羥肟酸鐵反響：取乙醇提取液1ml，加7%鹽酸羥胺甲醇液3-5滴和10%氫氧化鉀液10滴，于水浴上加熱至反響開頭〔有氣泡產(chǎn)生，冷卻，再參與51%5滴，如反響液有橙紅色或紫紅色消滅，即表示可能有酯類、內(nèi)酯類、香豆素及其甙類。10、檢查強(qiáng)心甙類3,5〔Kedde反響1ml3,5二硝基苯甲酸試劑3-4滴，如反響液呈紅色或紫色，即表示可能有強(qiáng)心甙。堿性苦味酸反響〔Baljet反響1ml，加堿性苦味酸試劑1-2液呈橙色或紅色，即表示可能有強(qiáng)心甙。亞硝酸鐵氰化鈉反響〔Legal反響：取乙醇提取液1ml1ml0.3%4-5滴，混勻，再參與10%1-2滴，混勻，如反響液呈紅色，且顏色又漸漸消退，即表示可能有強(qiáng)心甙。11、檢查蒽醌類30%55%鹽酸化后，如紅色消退，即表示有蒽醌及其甙類。1ml1%l-2滴，如反響液呈紅色，即表示有蒽醌及其甙類。硼酸溶液試驗(yàn)：取乙醇提取液滴于濾紙片上，待于燥后，噴灑1%硼酸水溶液，如斑點(diǎn)呈橙黃色或紅色，且于紫外燈下檢視有熒光，即表示有蒽醌及其甙類。12、檢查揮發(fā)油、油脂類可能有揮發(fā)油；如油斑不消逝，即表示有油脂類。2分鐘，如斑點(diǎn)呈藍(lán)色，背景為黃綠色或藏青色，即表示有油脂、三萜及甾醇類。呈紅、藍(lán)、紫等各種顏色，即表示可能有揮發(fā)油、萜類和甾醇類?！踩硤@型濾紙層析法1.0-1.5cm6-81、檢查有機(jī)酸類95%乙醇樣 品：a.熱水提取液b.乙醇提取液c.檸檬酸乙醇溶液〔比照品〕溴酚藍(lán)試劑，有機(jī)酸斑點(diǎn)呈黃色。2、檢查揮發(fā)油類95%乙醇樣 品：a.乙醇提取液b.石油醚提取液顯 濾紙上有無油跡斑點(diǎn)，如有油跡斑點(diǎn)，可將濾紙加溫烘烤，假設(shè)油斑消逝，則表示有揮發(fā)油存在?！菜摹掣黝惓煞值膶游鰴z查中藥化學(xué)成分的預(yù)試驗(yàn)除用上述的定性反響外，還可用層析法進(jìn)展，它不僅可以削減成分間的相互干擾，展析結(jié)果簡(jiǎn)潔推斷，還可以依據(jù)層析所用的條件加開放劑的組成，層〔Rf值甚至可以通過和標(biāo)準(zhǔn)樣品比照，初步確定樣品中含有何種化合物。生物堿類：1〔中性、堿性〕開放劑：氯仿-(9:1)苯-(8:2)顯色劑：改進(jìn)碘化鉍鉀試劑2G層析開放劑：環(huán)己烷-(9:1)氯仿-丙酮-(5:4:1)二甲苯-正丁醇-甲醇-(40:40:6:2)氨基酸類：1、紙層析-醋酸-水(4:1:5，上層)顯色劑：茚三酮試劑2G層析-醋酸-水(4:1:1)顯色劑：茚三酮試劑糖類：1、紙層析-吡啶-水(2:1:2)顯色劑：茴香胺-鄰苯二甲酸試劑2G層析-醋酸-水(6:1:3)-醋酸-水(12:3:3:2)顯色劑：茴香醛-硫酸試劑皂甙類：1G層析-乙醇-25％氨水(7:2:5)-水(65:35:10)2、氧化鋁層析-乙酸乙酯(7:3)苯-乙酸乙酯(7:3)有機(jī)酸類：1、紙層析-醋酸-水(4:1:5，上層)2G層析-甲醇-醋酸(79:14:7)酚類、鞣質(zhì)：1、紙層析-醋酸-水(4:1:5，上層)顯色劑：1％三氯化鐵乙醇溶液2、硅膠CMC-Na-丙酮(9:1)黃酮類化合物：1、聚酰胺層折-乙醇-乙酰丙酮(4:2:1)顯色劑：于紫外光燈下檢視，(1)氨熏，(2)1%三氯化鋁乙醇溶液2、紙層析-醋酸-水(4:1:5，上層)顯色劑：于紫外光燈下檢視，(l)氨熏，(2)1%三氯化鋁乙醇溶液3G層析-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)顯色劑：于紫外光燈下檢視，(1)氨熏，(2)1%三氯化鋁乙醇溶液香豆素類：1G層析-甲酸乙酯-甲酸(5:4:1)石油醚-乙酸乙酯(5:1)2、紙層析-醋酸-水(4:1:5，上層)強(qiáng)心甙類：1G層析-吡啶-水(5:1:4)甲醇-甲酰胺(80:19:1)3,5-二硝基苯甲酸試劑2、紙層析-醋酸-水(4:1:5，上層)3,5-二硝基苯甲酸試劑蒽醌類：1、硅膠CMC-Na-乙酸乙酯(8:2)甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)顯色劑：(1)氨熏 (2)5%氫氧化鉀乙醇溶液2、紙層析-醋酸-水(4:1:5，上層)-水(5:5:1)顯色劑：(1)氨熏 (2)5%氫氧化鉀乙醇溶液揮發(fā)油類：硅膠G正己烷石油醚-乙酸乙酯(95:5)(85:15)顯色劑：噴霧茴香醛-105℃加熱數(shù)