豬瘟乳前免疫相關(guān)試驗

豬瘟乳前免疫相關(guān)試驗

豬瘟疫的牛奶免疫是中國許多豬繁殖地使用的一種豬繁殖力免疫方法。1979年，臺灣的賴秀興和法國的coitiew提出“豬磺鹿前免疫不僅可以避免母性抗體的干擾，還可以獲得對豬瘟疫的終身免疫”。其實,對于豬瘟乳前免疫問題,國際學(xué)術(shù)界一直頗具爭議。在養(yǎng)豬發(fā)達(dá)國家,學(xué)者們大都對其持懷疑態(tài)度。然而,這一國際學(xué)術(shù)領(lǐng)域爭議頗大的問題,在我國卻得到高度一致的肯定。學(xué)術(shù)文獻(xiàn)庫中有關(guān)乳前免疫的論文,99%以上都是贊同豬瘟乳前免疫。以致傳統(tǒng)教科書均認(rèn)為豬瘟乳前免疫是排除母源抗體干擾、迅速提高仔豬豬瘟抗體水平和整齊度的有效方法。在豬瘟常發(fā)地區(qū),無論是集約化豬場還是個體養(yǎng)豬戶,推行乳前免疫是控制豬瘟發(fā)生和流行的有效措施。而對于臨床大量存在的乳前免疫效果不佳或免疫失敗現(xiàn)象,則大都簡單地歸因于未嚴(yán)格按照技術(shù)操作要求去落實。至今,乳前免疫在我國似有濫用之勢。有的學(xué)者已經(jīng)開始鼓吹把乳前免疫應(yīng)用到高致病性豬藍(lán)耳病和偽狂犬病等疾病的預(yù)防,似乎乳前免疫是解決豬場各種疑難雜癥的“靈丹妙藥”。這種現(xiàn)象,值得警惕!1豬鼠疫基因的研究1.1成年豬的及時分離豬的免疫系統(tǒng)雖然已在子宮內(nèi)發(fā)育,一出生便可行使其功能,但初生仔豬的免疫功能實際上遠(yuǎn)未成熟,沒有成年豬那么高效。與成年豬相比,新生仔豬吞噬細(xì)胞的吞噬活性較低。1日齡仔豬肺泡巨噬細(xì)胞的氧化殺菌能力差,至7日齡時,各項功能才可達(dá)到成年水平。新生仔豬的肺血管內(nèi)巨噬細(xì)胞數(shù)量很少,到30日齡時可增加到原來的14倍之多。1.2發(fā)病東南角下豬企檢測結(jié)果2009年3—4月,恩平市XJ豬場35頭初產(chǎn)母豬所產(chǎn)近200頭仔豬出生后相繼出現(xiàn)“抖抖病”癥狀。窩發(fā)病數(shù)為產(chǎn)活仔數(shù)的40%~100%不等。解剖發(fā)病仔豬,幾乎都有腎臟和膀胱針尖狀出血病變。吸食初乳(站立不穩(wěn)不會吸吮的仔豬人工灌服初乳)后,癥狀一般都能逐漸緩解,癥狀較輕者1周后恢復(fù)正常,嚴(yán)重者約4周后恢復(fù)正常,病死率為15%。因該場母豬產(chǎn)前4周做豬瘟免疫(每頭母豬5頭份),懷疑可能是豬瘟疫苗質(zhì)量問題,后改用另一藥廠的豬瘟疫苗,仍是產(chǎn)前4周免疫,“抖抖病”癥狀隨之消失。根據(jù)發(fā)病仔豬的解剖結(jié)果和豬瘟疫苗的使用情況,基本可以確診這種“抖抖病”癥狀完全是豬瘟疫苗使用不當(dāng)所致,因疫苗毒力過強,仔豬在胎兒期感染了疫苗毒。該場獸醫(yī)在這些發(fā)病仔豬吸食初乳前,隨機(jī)抽取8頭做豬瘟抗體檢測,結(jié)果都未檢測到豬瘟抗體(表1),說明其在吸食初乳前都沒有豬瘟抗體產(chǎn)生。這一檢測結(jié)果從臨床角度表明,仔豬最早從產(chǎn)前28d直到出生,其免疫功能仍未健全。因母豬在產(chǎn)前4周已做過豬瘟免疫,仔豬在胎盤內(nèi)接觸并感染豬瘟苗毒的時間接近28d。但在這28d,仔豬一直都未產(chǎn)生豬瘟抗體。1.3免疫抗體的免疫接種首先是乳前免疫能否產(chǎn)生有效免疫應(yīng)答的問題。豬瘟乳前免疫,一般要求仔豬一出生即接種豬瘟疫苗,2h后吃初乳。在仔豬免疫功能并不健全的情況下進(jìn)行免疫接種,仔豬能否產(chǎn)生主動免疫生成豬瘟免疫抗體以抵抗豬瘟強毒攻擊,存在很大的不確定性。其次是誘導(dǎo)仔豬產(chǎn)生免疫耐受性的風(fēng)險問題。有關(guān)乳前免疫導(dǎo)致免疫耐受性的問題,樊福好博士已于2008年做過詳細(xì)闡述,這里不再贅述。豬瘟乳前免疫,在仔豬免疫功能并不健全的情況下接種豬瘟疫苗(特別是當(dāng)前很多豬場都喜歡大劑量接種),存在誘導(dǎo)其對豬瘟疫苗產(chǎn)生免疫耐受性的巨大風(fēng)險。2免疫調(diào)度測定早在2006年初,筆者在對珠海市NZ豬場仔豬豬瘟抗體跟蹤監(jiān)測過程中就曾發(fā)現(xiàn),經(jīng)過豬瘟乳前免疫的仔豬,其母源抗體消退快,而主動免疫抗體卻無法有效上升。當(dāng)時沒有認(rèn)真保存好完整的原始檢測數(shù)據(jù)。2008—2009年,筆者與相關(guān)技術(shù)人員在珠海市NZ豬場設(shè)計并完成了豬瘟乳前免疫相關(guān)試驗,過程及結(jié)果如下。2.1試驗動物胎次、體況及預(yù)產(chǎn)日期接近的臨產(chǎn)母豬20頭,及其所產(chǎn)日齡相同或接近、健康、大小均勻的仔豬60頭。2.2細(xì)胞源和制備試驗用疫苗為廣東永順生物制藥有限公司豬瘟活疫苗(細(xì)胞源,每頭份1500RID,批號:08115)。豬瘟抗體檢測采用美國IDEXX豬瘟抗體ELISA檢測試劑盒,批號:43220-R141。2.3試驗豬和實驗豬血清素質(zhì)檢測20頭供試母豬打耳號編號,逐頭前腔靜脈采血,做豬瘟抗體ELISA檢測。從中挑選豬瘟抗體水平接近的母豬12頭,隨機(jī)分為3組。乳前免疫組每窩挑選5頭健康仔豬作試驗豬并打耳號編號,一出生即每頭肌肉注射豬瘟疫苗2頭份,2h后再吃初乳,然后分別于35日齡和70日齡每頭肌肉注射豬瘟疫苗5頭份;常規(guī)免疫組每窩挑選5頭健康仔豬作試驗豬并打耳號編號,分別于35日齡和70日齡每頭肌肉注射豬瘟疫苗5頭份;對照組每窩挑選5頭健康仔豬作試驗豬并打耳號編號,分別于35日齡和70日齡每頭肌肉注射生理鹽水3mL。3組仔豬統(tǒng)一于7日齡、21日齡、35日齡、70日齡和98日齡前腔靜脈采血(35日齡和70日齡采血均在注射豬瘟疫苗或生理鹽水之前進(jìn)行),分離血清送珠海市安富來畜牧獸醫(yī)技術(shù)服務(wù)公司做豬瘟抗體檢測。檢測值0.30以下為陰性,0.30~0.40為可疑陽性,0.40以上為陽性。2.4結(jié)果和分析2.4.1乳前和常規(guī)免疫豬檔案檢測結(jié)果由表2可得,乳前免疫組仔豬(不包括2頭死亡豬)70日齡豬瘟抗體均值為0.5458,常規(guī)免疫組(不包括2頭死亡豬)為0.5400,兩者差異不大。乳前免疫組豬瘟抗體合格率77.78%(14/18),常規(guī)免疫組為94.44%(17/18),差異不顯著。乳前免疫組豬瘟抗體值方差為0.0266,常規(guī)免疫組為0.0090,差異顯著。由表3可得,乳前免疫組仔豬(不包括2頭死亡豬)98日齡豬瘟抗體均值為0.5893,常規(guī)免疫組(不包括3頭死亡豬)為0.5513,差異不顯著。乳前免疫組豬瘟抗體合格率77.78%(14/18),常規(guī)免疫組為76.47%(13/17),兩者非常接近,均達(dá)到群體合格率要求。乳前免疫組豬瘟抗體值方差為0.0674,常規(guī)免疫組為0.0293,差異不顯著。從70日齡的檢測結(jié)果來看,免疫耐受性問題似確實存在。在35日齡免疫過豬瘟疫苗35d后,乳前免疫組仔豬不但抗體合格率比常規(guī)免疫組低,而且離散度(方差)也比常規(guī)免疫組大。兩組仔豬抗體合格率差異不顯著,并不表示完全沒有差異,極其可能的原因是試驗樣本數(shù)量不夠大。但從98日齡的檢測結(jié)果來看,兩組仔豬在70日齡免疫豬瘟疫苗28d后,其抗體均值、合格率和離散度都非常接近。這種結(jié)果又似乎說明仔豬存在免疫耐受性的可能性不大。2.4.2豬合成母源抗體的相關(guān)性分析進(jìn)一步對常規(guī)免疫組和對照組母豬產(chǎn)前豬瘟抗體值和所產(chǎn)仔豬7日齡豬瘟母源抗體值做相關(guān)性分析,r=0.4101,0.4≤|r|<0.7,仔豬7日齡豬瘟母源抗體值與其母產(chǎn)前豬瘟抗體值呈顯著性相關(guān)。2.4.3豬訓(xùn)母源抗體檢測由表4可得,乳前免疫組20頭仔豬7日齡豬瘟母源抗體均值為0.7641,常規(guī)免疫組和對照組39頭仔豬為0.7772,兩者僅相差0.0131或1.69%(0.0131/0.7772),且差異不顯著,說明乳前免疫對豬瘟母源抗體的中和作用非常有限。2.4.4豬不同日齡豬檢驗抗體檢測結(jié)果對照組仔豬自出生直到98日齡一直未進(jìn)行過豬瘟免疫,其抗體變化規(guī)律實際上就是母源抗體的衰退規(guī)律。該組仔豬不同日齡豬瘟抗體情況如表5。本次試驗沒有檢測42日齡仔豬母源抗體,故42日齡仔豬母源抗體值及合格率用該場后續(xù)的另一次試驗檢測結(jié)果代替。表5數(shù)據(jù)顯示,仔豬母源抗體均值和合格率在35日齡前衰退非常緩慢,35日齡后才開始加快。42日齡左右,群體合格率衰退到74.36%,仔豬開始逐漸喪失對豬瘟強毒的抵抗力。2.5結(jié)論和討論2.5.1豬模型中母源抗體的動態(tài)這種超強保護(hù)力,首先體現(xiàn)在仔豬豬瘟母源抗體滴度方面。本次試驗顯示,仔豬出生后及時吸食初乳,能獲得與其母幾乎相同的抗體滴度。也即是說,仔豬出生后通過吸食初乳,能獲得與其母幾乎完全相同的對豬瘟強毒的抵抗力。對大部分仔豬而言,僅僅經(jīng)過2~3次免疫,其獲得的主動免疫抗體滴度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到通過吸吮初乳獲得的母源抗體滴度。本次試驗中,常規(guī)免疫組仔豬7日齡母源抗體均值為0.7675,經(jīng)過兩次豬瘟免疫后,98日齡主動免疫抗體均值為0.5513。母源抗體均值是主動免疫抗體均值的1.39倍,且差異極顯著。生產(chǎn)實踐中也有同樣的結(jié)果。表6是珠海市NZ豬場2006年對一批20頭仔豬豬瘟抗體的跟蹤情況。該批仔豬相繼于21日齡和60日齡免疫豬瘟疫苗5頭份。對比21日齡(初免前)和95日齡的檢測結(jié)果,只有2頭仔豬95日齡主動免疫抗體滴度高于21日齡的母源抗體滴度,6頭仔豬持平,其余11頭仔豬主動免疫抗體滴度都低于母源抗體滴度。對大部分豬場而言,母源抗體對仔豬的保護(hù)一般都能維持到仔豬出生后35~42d。本次試驗中,母源抗體一直到仔豬35日齡,合格率仍高達(dá)100%。表7是珠海市NZ豬場2007年對另一批仔豬豬瘟母源抗體的跟蹤結(jié)果,從中我們也可以看到,直到35日齡,該批仔豬母源抗體不但合格率100%,而且滴度還相當(dāng)高,1∶160及以上占68.42%。2008年,張新成等對北京地區(qū)3個豬場仔豬豬瘟母源抗體進(jìn)行跟蹤。3個豬場中,一個豬場42日齡仔豬母源抗體合格率高達(dá)100%,另一個豬場也高達(dá)88.6%,詳見表8。2.5.2豬檔案和抗體檢測乳前免疫是一項要求非常嚴(yán)格、并且費時費力的工作,不是管理非常到位的豬場,根本無法真正做好。撇開免疫耐受性問題不談,豬瘟乳前免疫,最起碼完全沒有必要。由于仔豬母源抗體值與母豬抗體值顯著性相關(guān),完全可以通過加強對母豬的免疫來提高仔豬對豬瘟的免疫力。同時,由于母源抗體對仔豬的保護(hù)可以維持到35~42日齡,此時仔豬的免疫系統(tǒng)已經(jīng)非常健全,我們完全有充足的時間來對仔豬免疫,使仔豬及時建立起堅強的主動免疫力。理論上,仔豬最佳的初免時間是群體母源抗體合格率衰退到75%。如果豬場擔(dān)心這時才初免,仔豬可能會因母源抗體繼續(xù)衰退、主動免疫抗體又未能有效上升從而失去對豬瘟強毒的免疫力,那么把初免時間適當(dāng)提前,在母源抗體較高時進(jìn)行初免,似未嘗不可。母源抗體雖然會中和疫苗中部分苗毒,但并不影響巨噬細(xì)胞對抗原的遞呈及抗體生成,只要適當(dāng)加大初免劑量(如廣東永順生物制藥有限公司豬瘟零免細(xì)胞苗說明書推薦的4頭份),同樣能令仔豬產(chǎn)生較好的主動免疫。以珠海市NZ豬場為例,該場仔豬35日齡母源抗體值都非常高,幾乎每次檢測合格率都是100%,近3年來一直執(zhí)行“35-70”豬瘟免疫程序,效果都非