![硫酸銨溶液飽和度_第1頁](http://file4.renrendoc.com/view/1203decb0de8c9d587cf574957da2c95/1203decb0de8c9d587cf574957da2c951.gif)
![硫酸銨溶液飽和度_第2頁](http://file4.renrendoc.com/view/1203decb0de8c9d587cf574957da2c95/1203decb0de8c9d587cf574957da2c952.gif)
![硫酸銨溶液飽和度_第3頁](http://file4.renrendoc.com/view/1203decb0de8c9d587cf574957da2c95/1203decb0de8c9d587cf574957da2c953.gif)
![硫酸銨溶液飽和度_第4頁](http://file4.renrendoc.com/view/1203decb0de8c9d587cf574957da2c95/1203decb0de8c9d587cf574957da2c954.gif)
![硫酸銨溶液飽和度_第5頁](http://file4.renrendoc.com/view/1203decb0de8c9d587cf574957da2c95/1203decb0de8c9d587cf574957da2c955.gif)
版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)技術(shù)原理及應(yīng)用第二章沉淀法沉淀法是純化生物大分子常用的一種經(jīng)典方法。該法操作簡單,成本低廉,一般包括鹽析沉淀、有機(jī)溶劑沉淀和選擇性沉淀等類型。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院22023/9/11生命科學(xué)學(xué)院生物科學(xué)51班3第二章沉淀法基本原理蛋白沉淀法123核酸沉淀法第一節(jié)沉淀的基本原理沉淀法也稱溶解度法。其純化生物大分子的基本原理是:根據(jù)各種物質(zhì)結(jié)構(gòu)的差異(如蛋白分子表面的疏水基團(tuán)和親水基團(tuán)之間比例的差異)來改變?nèi)芤旱哪承┬再|(zhì)(如pH、極性、離子強(qiáng)度、金屬離子等),就能致使抽提液中有效成分溶解度的變化。則可通過選擇適當(dāng)?shù)某樘崛軇┦褂蛛x的有效成分最大溶解,而雜質(zhì)最小溶解;或者相反。從而達(dá)到分離的目的。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院42023/9/114南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院第一節(jié)沉淀的基本原理蛋白沉淀法:
鹽析法有機(jī)溶劑沉淀法蛋白質(zhì)沉淀法核酸沉淀:有機(jī)溶劑沉淀法等電點沉淀法其它沉淀劑沉淀法:聚乙二醇(PEG),十六烷基三甲基溴化銨(CTAB),LiCl,精胺,鈣鹽。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院55南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院聚乙二醇沉淀法選擇性沉淀法結(jié)晶沉淀法第二節(jié)蛋白沉淀法1.鹽析法原理:根基蛋白質(zhì)在稀鹽溶液中溶解度會隨著鹽濃度的增高而上升(鹽溶)但當(dāng)鹽濃度增高到一定數(shù)值時,其溶解度又逐漸下降,直至蛋白質(zhì)析出(鹽析)。鹽析的發(fā)生在于鹽濃度增高到一定數(shù)值時,使水活度降低,進(jìn)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子表面電荷逐漸被中和,水化膜逐漸被破壞,最終引起蛋白質(zhì)分子之間相互聚集并從溶液中析出。
2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院66南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院72023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院8第二節(jié)蛋白沉淀法1.鹽析法鹽的選擇一般蛋白沉淀時選用硫酸銨,原因:溶解度大,對溫度不敏感分級效果好有穩(wěn)定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的作用價格低廉,廢液可以肥田鹽析的缺點:樣品繼續(xù)純化時須脫鹽。硫酸銨的缺點是銨離子干擾雙縮脲反應(yīng),為蛋白質(zhì)的定性分析造成一定困難。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院99南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院第二節(jié)蛋白沉淀法1.鹽析法硫酸銨鹽析固體法。在大體積粗制品溶液中逐步加入固體硫酸銨,當(dāng)達(dá)到一定飽和度時,蛋白質(zhì)便可沉淀下來。飽和溶液法。較固體法溫和,但不適用于大體積樣品,會導(dǎo)致樣品體積大量增加。透析法。將盛蛋白質(zhì)溶液的透析袋放入一定濃度的大體積鹽溶液中,通過透析作用改變蛋白質(zhì)溶液中的鹽濃度。該法鹽濃度以連續(xù)狀態(tài)變化,避免局部鹽濃度過高的不良影響,分級效果好。但受透析袋容積、鹽析速度、及硫酸銨耗費大的制約,僅用于精確、樣品體積小的試驗中。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院1010南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院硫酸銨鹽析固體法g=533(S2-S1)/(100-0.3S2)(20℃)g=541(S2-S1)/(100-0.3S2)(20℃)g:1升溶液中需加入固體硫酸銨的克數(shù)S1:表示需要達(dá)到的百分飽和度S2:表示原溶液中的百分飽和度飽和溶液法V=V0(S2-S1)/(S3-S1)V:表示需要加入的硫酸銨溶液體積(ml)V0:表示原來溶劑的體積(ml)S1與S2同上S3:表示需要加入的硫酸溶液的飽和度2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院1111南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院硫酸銨分級沉淀示例:各溶解度區(qū)段的沉淀效果(尿素酶):2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院12名稱沉淀效果硫酸銨飽和度/%(25℃)0~2525~3535~4545~5555~65沉淀物酶活力單位/U011268503020272023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院13調(diào)整硫酸溶液飽和度計算表第二節(jié)蛋白沉淀法1.鹽析法鹽析的影響因子:蛋白質(zhì)濃度對鹽析的影響:蛋白質(zhì)濃度過大,鹽析時發(fā)生共沉現(xiàn)象,分離效果不好;蛋白質(zhì)濃度太稀,耗鹽量過大,蛋白質(zhì)回收率也低。一般控制樣品液蛋白濃度在0.2%-2%為宜。離子強(qiáng)度和離子類型對鹽析的影響:離子強(qiáng)度越大,蛋白質(zhì)的溶解度越低,越容易產(chǎn)生鹽析現(xiàn)象;離子半徑小而價數(shù)高的離子在鹽析方面影響較強(qiáng),離子半徑大而價數(shù)低的離子對鹽析影響弱。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院1414南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院鹽析的影響因子:PH對鹽析的影響:蛋白質(zhì)所帶凈電荷越多,溶解度越大;在凈電荷為零時,溶解度最低。一般將PH值調(diào)到蛋白質(zhì)等電點附近,這樣有利于鹽析。溫度對鹽析的影響:在低離子強(qiáng)度或水中在一定范圍內(nèi)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增加;但在高鹽溶液中,溫度的升高有時反而下降。一般情況下在0~4℃操作。其他:在進(jìn)行鹽析沉淀時,有時需在溶液中加入一定量EDTA,以除去沉淀劑中帶入的金屬離子。再者是加硫酸銨的時間要控制好,一般2h左右。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院1515南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院第二節(jié)蛋白沉淀法2.有機(jī)溶劑沉淀法原理:有機(jī)溶劑對許多溶于水的小分子生化物質(zhì)以及核酸、多糖、蛋白質(zhì)等生物大分子都能發(fā)生沉淀作用。有機(jī)溶劑的沉淀作用主要是降低溶液的介電常數(shù)從而增強(qiáng)分子之間的相互作用,使其溶解度降低。對于具有表面水層的生物大分子來說,有機(jī)溶劑可破壞溶質(zhì)分子表面的水膜,使這些大分子脫水而相互聚集析出。不同溶質(zhì)要求不同濃度的有機(jī)溶劑,因此可用有機(jī)溶劑進(jìn)行分步沉淀。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院1616南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院17第二節(jié)蛋白沉淀法2.有機(jī)溶劑沉淀法常用溶劑:甲醇、乙醇、丙酮。優(yōu)點:有機(jī)溶劑沉淀法分辨能力比鹽析法高,沉淀不用脫鹽,過濾比較容易。缺點:對某些具有生物活性的大分子,容易引起變性失活,操作常在低溫下進(jìn)行;分離效果差,共沉作用大;離子強(qiáng)度及離子種類對其也有影響。2023/9/11南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院1818南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院第二節(jié)蛋白沉淀法3.蛋白質(zhì)沉淀法針對某一類或某一種蛋白的沉淀法,常見沉淀劑有:堿性蛋白質(zhì):多價陽離子的堿性蛋白質(zhì),如魚精蛋白,除能有效沉淀核酸外,還能沉淀某些蛋白質(zhì)。凝集素:凝集
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 專利代理居間合同樣本
- 物業(yè)管理委托合同
- 家庭室內(nèi)外裝修合同書
- 多模式跨境電子商務(wù)解決方案策劃與設(shè)計全案指南
- 研發(fā)項目管理作業(yè)指導(dǎo)書
- 生物技術(shù)與實驗室技能作業(yè)指導(dǎo)書
- 電線電纜購銷合同
- 2025年天津年貨運從業(yè)資格證考試從業(yè)從業(yè)資格資格題庫及答案
- 2025年烏魯木齊貨運從業(yè)資格考試題目大全
- 小學(xué)青島版一年級數(shù)學(xué)上冊口算練習(xí)題總匯
- 《配電網(wǎng)設(shè)施可靠性評價指標(biāo)導(dǎo)則》
- 2024年國家電網(wǎng)招聘之通信類題庫附參考答案(考試直接用)
- ## 外事領(lǐng)域意識形態(tài)工作預(yù)案
- CJJ 169-2012城鎮(zhèn)道路路面設(shè)計規(guī)范
- 第八單元金屬和金屬材料單元復(fù)習(xí)題-2023-2024學(xué)年九年級化學(xué)人教版下冊
- 鋼鐵是怎樣煉成的保爾成長史
- 精神科護(hù)理技能5.3出走行為的防范與護(hù)理
- 煤礦機(jī)電運輸培訓(xùn)課件
- 采購管理學(xué)教學(xué)課件
- 《供應(yīng)商質(zhì)量會議》課件
- 江蘇省科技企業(yè)孵化器孵化能力評價研究的中期報告
評論
0/150
提交評論