第二章-基因工程制藥課件

第二章基因工程制藥

謝謝你的閱讀2019年10月14第二章基因工程制藥

謝謝你的閱讀2019年10月14第一節(jié)概述

第二節(jié)目的基因的獲得

第三節(jié)基因表達(dá)

第四節(jié)基因工程菌的不穩(wěn)定性

第五節(jié)基因工程菌中試

第六節(jié)重組工程菌的培養(yǎng)

第七節(jié)基因工程藥物的分離純化

第八節(jié)變性蛋白的復(fù)性

第九節(jié)基因工程藥物的質(zhì)量控制

第二章基因工程制藥

謝謝你的閱讀2019年10月14第一節(jié)概述

第二節(jié)目的基因的獲得

第三

一、基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥品的優(yōu)點(diǎn)二、基因工程藥物生產(chǎn)的基本過(guò)程三、國(guó)內(nèi)外基因工程藥物研究進(jìn)展

第一節(jié)概述謝謝你的閱讀2019年10月14第一節(jié)概述謝謝你的閱讀2019年10月14第一節(jié)概述基因工程技術(shù)誕生：20世紀(jì)70年代現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展

基因工程：

應(yīng)用DNA重組技術(shù)，按照人們的意愿，在基因水平上改變生物遺傳性，創(chuàng)造新的生物物種，通過(guò)工程化手段為人類(lèi)提供有用產(chǎn)品和服務(wù)的技術(shù)。謝謝你的閱讀2019年10月14第一節(jié)概述基因工程技術(shù)誕生：20世紀(jì)70年代現(xiàn)一、基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥品的優(yōu)點(diǎn)

1.大量生產(chǎn)過(guò)去通過(guò)常規(guī)生化分離提取技術(shù)難以獲得（富集）的生理活性蛋白和多肽。

2.提供足夠數(shù)量的生理活性物質(zhì)。3.開(kāi)發(fā)更多的內(nèi)源性生理活性物質(zhì)。4.通過(guò)基因工程和蛋白質(zhì)工程對(duì)天然生理活性物質(zhì)進(jìn)行改造，優(yōu)化天然的生理活性物質(zhì)。5.利用基因工程技術(shù)可獲得新型化合物，擴(kuò)大藥物篩選來(lái)源。

6.降低成本，提高產(chǎn)品質(zhì)量。謝謝你的閱讀2019年10月14一、基因工程技術(shù)生產(chǎn)藥品的優(yōu)點(diǎn)謝謝你的閱讀2019年10月1二、基因工程藥物生產(chǎn)的基本過(guò)程1.目的基因的獲得2.構(gòu)建DNA重組體上游技術(shù)3.構(gòu)建工程菌4.工程菌的發(fā)酵5.外源基因表達(dá)產(chǎn)物的分離純化6.產(chǎn)品的檢驗(yàn)謝謝你的閱讀2019年10月14二、基因工程藥物生產(chǎn)的基本過(guò)程謝謝你的閱讀2019年10月1謝謝你的閱讀2019年10月14謝謝你的閱讀2019年10月14三、國(guó)內(nèi)外基因工程藥物研究進(jìn)展

目前研制的基因工程藥物主要包括:

1.免疫性蛋白，如各種抗原和單克隆抗體;

2.細(xì)胞因子，如各種干擾素、白細(xì)胞介素、集落刺激生長(zhǎng)因子表皮生長(zhǎng)因子、凝血因子；

3.激素，如胰島素、生長(zhǎng)激素、心鈉素；

4.酶類(lèi)，如尿激酶、鏈激酶、葡激酶、組織型纖維蛋白溶酶激活劑、超氧化物歧化酶等。謝謝你的閱讀2019年10月14三、國(guó)內(nèi)外基因工程藥物研究進(jìn)展謝謝你的閱讀2019年VitaminA謝謝你的閱讀2019年10月14VitaminA謝謝你的閱讀2019年10月14

第二節(jié)目的基因的獲得

一、反轉(zhuǎn)錄法二、化學(xué)合成法

謝謝你的閱讀2019年10月14第二節(jié)目的基因的獲得謝謝你的閱讀2019年10月1一、反轉(zhuǎn)錄法

1．mRNA的純化

（1）選擇表達(dá)目的蛋白質(zhì)豐度高的mRNA的生物材料。（2）分離總RNA。（3）分離mRNA（多聚T纖維素）謝謝你的閱讀2019年10月14一、反轉(zhuǎn)錄法謝謝你的閱讀2019年10月142．cDNA第一鏈的合成（RT-PCR，隨機(jī)引物）3．cDNA第二鏈的合成4．cDNA克隆5．將重組體導(dǎo)入宿主細(xì)胞一、反轉(zhuǎn)錄法謝謝你的閱讀2019年10月142．cDNA第一鏈的合成（RT-PCR，隨機(jī)引物）一、反轉(zhuǎn)錄6．cDNA文庫(kù)的鑒定一、反轉(zhuǎn)錄法謝謝你的閱讀2019年10月146．cDNA文庫(kù)的鑒定一、反轉(zhuǎn)錄法謝謝你的閱讀2019年107．目的cDNA克隆的分離和鑒定

一、反轉(zhuǎn)錄法謝謝你的閱讀2019年10月147．目的cDNA克隆的分離和鑒定一、反轉(zhuǎn)錄法謝謝你的閱讀2優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確性高、人工接頭、改進(jìn)、利用局限性：1．小分子量的蛋白或多肽2．已知核苷酸順序或氨基酸順序3．費(fèi)用較高

二、化學(xué)合成法謝謝你的閱讀2019年10月14二、化學(xué)合成法謝謝你的閱讀2019年10月14VitaminB2

基因表達(dá)的成敗，直接影響藥品的質(zhì)量、成本?；虮磉_(dá)是外源基因在生物體轉(zhuǎn)錄、翻譯以及所有加工過(guò)程，是外源基因異源轉(zhuǎn)錄翻譯利用宿主功能的過(guò)程，也是外源DNA、RNA、Pr克服宿主細(xì)胞

進(jìn)攻，保護(hù)自身的過(guò)程。第三節(jié)基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月14VitaminB2第三節(jié)基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年

1.原核細(xì)胞（大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、鏈霉菌等）

2.真核細(xì)胞（酵母、絲狀真菌、動(dòng)物細(xì)胞等）一、宿主菌的選擇謝謝你的閱讀2019年10月14一、宿主菌的選擇謝謝你的閱讀2019年10月14

1．原核細(xì)胞（1）大腸桿菌

優(yōu)點(diǎn)：遺傳背景清晰，生長(zhǎng)迅速。缺點(diǎn)：①胞內(nèi)表達(dá)，提取困難。②包含體形式，需復(fù)性。③表達(dá)后不存在修飾作用，應(yīng)用受限。④翻譯產(chǎn)物的N末端常多余一個(gè)甲硫氨酸殘基（AUG啟始密碼子編碼）容易引起免疫反應(yīng)。⑤大腸桿菌產(chǎn)生內(nèi)毒素給純化帶來(lái)不便。⑥蛋白酶水解作用破壞產(chǎn)物。一、宿主菌的選擇謝謝你的閱讀2019年10月14一、宿主菌的選擇謝謝你的閱讀2019年10月14

1．原核細(xì)胞（2）枯草芽孢桿菌

優(yōu)點(diǎn)：分泌能力強(qiáng)，產(chǎn)物可直接到培養(yǎng)液中。缺點(diǎn)：蛋白酶水解活性更強(qiáng)。

（3）鏈霉菌優(yōu)點(diǎn)：①不致病②分泌能力強(qiáng)③具有糖基化能力缺點(diǎn)：培養(yǎng)條件要求高、遺傳穩(wěn)定性差一、宿主菌的選擇謝謝你的閱讀2019年10月141．原核細(xì)胞一、宿主菌的選擇謝謝你的閱讀2019年10月2．真核細(xì)胞（1）酵母：無(wú)毒、倍增時(shí)間短、分泌功能、糖基化作用、使之成為理想的宿主。（2）絲狀真菌：肽剪切、糖基化。（3）哺乳動(dòng)物細(xì)胞：產(chǎn)品保真性高，生產(chǎn)效率低。一、宿主菌的選擇謝謝你的閱讀2019年10月14一、宿主菌的選擇謝謝你的閱讀2019年10月141．載體

表達(dá)載體必須具備下列條件：①載體能獨(dú)立復(fù)制②具有多克?。∕CS）位點(diǎn)和標(biāo)記基因③具有很強(qiáng)的啟動(dòng)子④具有調(diào)節(jié)基因⑤具有很強(qiáng)的終止子⑥具有產(chǎn)生帶有SD序列和AUG的mRNA的能力二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月141．載體二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月基因工程藥物研究中常用的表達(dá)載體（1）PBV220系統(tǒng)①

PL、PR串聯(lián)啟動(dòng)子，增強(qiáng)啟動(dòng)信號(hào)。

②

rrnB基因的終止信號(hào)。③

PL、PR與rrnB之間有MCS及SD序列。

④

CITS857抑制子基因（溫控誘導(dǎo)）⑤質(zhì)粒較小（366kb），便于插入大的外源基因二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月14基因工程藥物研究中常用的表達(dá)載體二、大腸桿菌中的PBG-2:

由PBV220衍生,可以表達(dá)與IgG結(jié)合的融合蛋白，并且是有蛋白剪切位點(diǎn)，便于表達(dá)后純化及純化后剪切。二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月14PBG-2:二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年1（2）PET系統(tǒng)①

IPTG誘導(dǎo)（異丙基-硫代-D-半乳糖苷）

②多克隆位點(diǎn)上有NdeI或NCOI單一切點(diǎn)，切開(kāi)后粘性末端為ATG，便于外源基因插入表達(dá)。

③在外源基因的N末端可融合6個(gè)His，便于純化。二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月14（2）PET系統(tǒng)二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀20192．影響目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素（1）外源基因的拷貝數(shù)（2）啟動(dòng)子的強(qiáng)弱（3）SD序列的有效性（4）SD與ATG的間距（5）密碼子的組成（偏愛(ài)性）（6）產(chǎn)物的穩(wěn)定性（7）產(chǎn)物對(duì)宿主的影響二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月142．影響目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的因素二、大腸桿菌中的基因表3．表達(dá)形式（1）融合蛋白，增強(qiáng)穩(wěn)定性。（2）非融合表達(dá)。二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月143．表達(dá)形式二、大腸桿菌中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年1

1．載體

①YEP類(lèi)（酵母附加體質(zhì)粒）由大腸桿菌質(zhì)粒，2μm質(zhì)粒和Trp或URA3組成，ARS來(lái)自2μm質(zhì)粒。②YRP（酵母復(fù)制型質(zhì)粒）

ARS來(lái)自染色體DNA、TrP1、URA3雙標(biāo)及大腸桿菌質(zhì)粒。

③YCP（酵母著絲粒型質(zhì)粒）除具有YRP元件外，還具有著粒成份。

三、酵母中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月14三、酵母中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月14

④YIP（酵母整合型質(zhì)粒）含有可與染色體進(jìn)行同源重組的序列⑤酵母表達(dá)型質(zhì)粒⑥分泌型表達(dá)質(zhì)粒帶有控制蛋白質(zhì)分泌的信號(hào)序列三、酵母中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月14

④YIP（酵母整合型質(zhì)粒）三、酵母中的基因表達(dá)謝2．影響目的基因在酵母中表達(dá)的因素（1）外源基因的拷貝數(shù)（2）TATA盒啟動(dòng)子成分（3）分泌信號(hào)序列（4）終止序列（5）翻譯后修飾（6）對(duì)宿主影響三、酵母中的基因表達(dá)謝謝你的閱讀2019年10月142．影響目的基因在酵母中表達(dá)的因素三、酵母中的基因表達(dá)謝謝你基因工程菌在傳代過(guò)程中經(jīng)常出現(xiàn)質(zhì)粒不穩(wěn)定的現(xiàn)象，質(zhì)粒不穩(wěn)定分為分裂不穩(wěn)定和結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定。第四節(jié)基因工程菌的不穩(wěn)定性謝謝你的閱讀2019年10月14第四節(jié)基因工程菌的不穩(wěn)定性謝謝你的閱讀2019年10月1

1.質(zhì)粒的分裂不穩(wěn)定性：指工程菌分裂時(shí)出現(xiàn)一定比列不含質(zhì)粒的子代菌的現(xiàn)象。主要與兩個(gè)因素有關(guān)：（1）含質(zhì)粒菌產(chǎn)生不含質(zhì)粒子代的頻率，質(zhì)粒丟失率與宿主菌、質(zhì)粒特性和培養(yǎng)條件有關(guān)。（2）含質(zhì)粒菌與不含質(zhì)粒菌比生長(zhǎng)速率的差異的大小。

2.質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性：指DNA從質(zhì)粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。一、質(zhì)粒不穩(wěn)定產(chǎn)生的原因：謝謝你的閱讀2019年10月14一、質(zhì)粒不穩(wěn)定產(chǎn)生的原因：謝謝你的閱讀2019年10月14

1.選擇合適的宿主菌

2.選擇合適的載體

3.選擇壓力

4.分階段控制培養(yǎng)

5.控制培養(yǎng)條件

6.固定化二、提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法謝謝你的閱讀2019年10月14二、提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法謝謝你的閱讀2019年10月

一、工程菌選擇二、反應(yīng)器（發(fā)酵罐）設(shè)計(jì)三、發(fā)酵培養(yǎng)基組成四、工藝最佳化與參數(shù)監(jiān)測(cè)控制第五節(jié)基因工程菌中試謝謝你的閱讀2019年10月14第五節(jié)基因工程菌中試謝謝你的閱讀2019年1一、基因工程菌的培養(yǎng)方式二、基因工程菌的培養(yǎng)工藝三、基因工程菌的培養(yǎng)設(shè)備第六節(jié)重組工程菌的培養(yǎng)謝謝你的閱讀2019年10月14一、基因工程菌的培養(yǎng)方式第六節(jié)重組工程菌的培養(yǎng)謝謝你的基因工程產(chǎn)品純化前的性質(zhì)：①目的產(chǎn)物在體系中含量較低②體系中組份復(fù)雜（細(xì)胞、代謝物、殘留培養(yǎng)基及無(wú)機(jī)鹽等）③目的產(chǎn)物穩(wěn)定性差：對(duì)pH、溫度、金屬離子、有機(jī)溶劑、剪切力、表面活性劑等十分敏感，容易失活、變性。

第七節(jié)基因工程藥物的分離純化謝謝你的閱讀2019年10月14第七節(jié)基因工程藥物的分離純化謝謝你的閱讀2019年10一、建立分離純化工藝需了解的各種因素

1.含目的產(chǎn)物的初始物料的特點(diǎn)利用基因工程菌進(jìn)行發(fā)酵生產(chǎn)的產(chǎn)物，其上游過(guò)程中的各種因素均對(duì)分離純化技術(shù)和工藝有直接影響。這些因素包括：（1）菌種類(lèi)型、形式，各種生物學(xué)性質(zhì)，產(chǎn)物和副產(chǎn)物種類(lèi)、產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)所處的位置，表達(dá)方式（胞內(nèi)、胞外、包含體），代謝物種類(lèi)，產(chǎn)物類(lèi)似物、毒素和能降解產(chǎn)物的酶類(lèi)等；（2）原材料和培養(yǎng)基的來(lái)源及質(zhì)量是否穩(wěn)定；（3）生產(chǎn)工藝和條件。包括滅菌方法和條件，生產(chǎn)方式(連續(xù)、批式、半連續(xù))，生產(chǎn)周期，生產(chǎn)能力，工藝控制條件及方式等；（4）初始物料的物理、化學(xué)和生物學(xué)特性。包括產(chǎn)物濃度、主要雜質(zhì)種類(lèi)和濃度、鹽的種類(lèi)和濃度、溶解度、pH、粘度、流體力學(xué)性質(zhì)和熱力學(xué)性質(zhì)等。

謝謝你的閱讀2019年10月14一、建立分離純化工藝需了解的各種因素1.含目的產(chǎn)物的一、建立分離純化工藝需了解的各種因素2.物料中雜質(zhì)種類(lèi)和性質(zhì)物料中雜質(zhì)種類(lèi)和性質(zhì)包括相關(guān)性和非相關(guān)性雜質(zhì)的含量、化學(xué)性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、相對(duì)分子質(zhì)量、電荷性質(zhì)及數(shù)量、生物學(xué)特性、穩(wěn)定性(對(duì)熱、pH、鹽、有機(jī)溶劑等)、溶解度、分配系數(shù)、揮發(fā)性及吸附性能等。

謝謝你的閱讀2019年10月14一、建立分離純化工藝需了解的各種因素2.物料中雜質(zhì)種類(lèi)和性二、建立分離純化工藝需了解的各種因素3.目的產(chǎn)物的特性目的產(chǎn)物特性主要有產(chǎn)物的化學(xué)、物理和生物學(xué)特性。包括化學(xué)組成、相對(duì)分子質(zhì)量、等電點(diǎn)、電荷分布及密度、溶解度、穩(wěn)定性(對(duì)熱、冷凍、pH、鹽、有機(jī)溶劑和金屬離子等)、疏水性、擴(kuò)散性、擴(kuò)散系數(shù)、分配系數(shù)、吸附性能、生物活性、親和性、配基種類(lèi)、表面活性等。謝謝你的閱讀2019年10月14二、建立分離純化工藝需了解的各種因素3.目的產(chǎn)物的特性二、建立分離純化工藝需了解的各種因素

4.產(chǎn)品質(zhì)量要求

產(chǎn)品質(zhì)量要求主要包括產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)，產(chǎn)品用途，對(duì)純度、生物活性、比活的要求。允許的雜質(zhì)種類(lèi)和最大允許含量，特殊雜質(zhì)的種類(lèi)和最大允許量，以及對(duì)使用的影響，產(chǎn)品劑型、貯存穩(wěn)定性等。謝謝你的閱讀2019年10月14二、建立分離純化工藝需了解的各種因素謝謝你的閱讀20二、分離純化的基本過(guò)程

基因工程藥物的分離純化一般包括細(xì)胞破碎、固液分離、濃縮與初步純化、高度純化直至得到純品、成品加工等步驟。

謝謝你的閱讀2019年10月14二、分離純化的基本過(guò)程謝謝你的閱讀2019年10月1二、分離純化的基本過(guò)程謝謝你的閱讀2019年10月14二、分離純化的基本過(guò)程謝謝你的閱讀2019年10月14分離純化的技術(shù)特點(diǎn)：①條件溫和②選擇性好③收率要高④純化過(guò)程快速謝謝你的閱讀2019年10月14分離純化的技術(shù)特點(diǎn)：謝謝你的閱讀2019年10月14三、細(xì)胞的破碎方法1.細(xì)胞收集

2.細(xì)胞破碎

物理破碎法：高壓勻漿法、高速珠磨法、超聲破碎法、高壓擠壓法化學(xué)破碎法：滲透沖擊、增溶法、脂溶法生物破碎法：酶溶法（溶菌酶、甘露糖酶、殼多糖酶等）謝謝你的閱讀2019年10月14三、細(xì)胞的破碎方法物理破碎法：高壓勻漿法、高速珠磨法超聲破碎法謝謝你的閱讀2019年10月14超聲破碎法謝謝你的閱讀2019年10月14四、固液分離分離細(xì)胞碎片常用的方法有：離心沉淀：高速離心、超速離心膜過(guò)濾：微濾、超濾和反滲透雙水相萃?。壕垡叶?葡聚糖聚乙二醇-無(wú)機(jī)鹽謝謝你的閱讀2019年10月14四、固液分離分離細(xì)胞碎片常用的方法有：謝謝你的閱讀2019年五、重組蛋白質(zhì)的分離純化

分離純化主要依賴(lài)色譜分離方法。色譜技術(shù)包括：離子交換色譜、疏水色譜、反相色譜、親和色譜、凝膠過(guò)濾色譜、高效液相色譜等。謝謝你的閱讀2019年10月14五、重組蛋白質(zhì)的分離純化分離純化主要依賴(lài)色譜分五、重組蛋白質(zhì)的分離純化

1.離子交換層析：是以離子交換劑為固定相，依據(jù)流動(dòng)相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進(jìn)行可逆交換時(shí)的結(jié)合力大小的差別而進(jìn)行分離的一種層析方法。

pH、兩性分子、側(cè)鏈、謝謝你的閱讀2019年10月14五、重組蛋白質(zhì)的分離純化謝謝你的閱讀2019年五、重組蛋白質(zhì)的分離純化

2.疏水層析：是利用蛋白質(zhì)表面的疏水區(qū)域與固定相上疏水性基團(tuán)相互作用力的差異，對(duì)蛋白質(zhì)組分進(jìn)行分離的層析方法。

疏水層析最常用填料是多聚糖（如瓊脂糖）及硅膠。

利用氨基酸側(cè)鏈的疏水鍵。

謝謝你的閱讀2019年10月14五、重組蛋白質(zhì)的分離純化謝謝你的閱讀2019年五、重組蛋白質(zhì)的分離純化3.親和層析：是利用固定化配體與目的蛋白質(zhì)之間非常特異的生物親和力進(jìn)行吸附，這種結(jié)合既是特異的，又是可逆的，改變條件可以使這種結(jié)合解除。

謝謝你的閱讀2019年10月14五、重組蛋白質(zhì)的分離純化3.親和層析：謝謝你的閱讀20五、重組蛋白質(zhì)的分離純化4.凝膠過(guò)濾層析：又稱(chēng)為凝膠排阻層析、分子篩層析，是以多孔性凝膠填料為固定相，按分子大小對(duì)溶液中各組分進(jìn)行分離的液相層析方法。

大分子先從色譜柱中流出謝謝你的閱讀2019年10月14五、重組蛋白質(zhì)的分離純化4.凝膠過(guò)濾層析：謝謝你的閱讀六、非蛋白質(zhì)類(lèi)雜質(zhì)的去除1.DNA的去除（1）DNA在pH4.0以上呈陰離子，可用陰離子交換劑吸附除去，但目的蛋白質(zhì)PI應(yīng)在6.0以上。（2）如蛋白質(zhì)為強(qiáng)酸性，則可選擇條件使其吸附在陽(yáng)離子交換劑上，而不讓DNA吸附上去。（3）利用親和層析吸附蛋白質(zhì)，而DNA不被吸附，也可分離。（4）疏水層析對(duì)分離也有效，在上柱時(shí)需要高鹽濃度，使DNA-蛋白質(zhì)結(jié)合物離解，蛋白質(zhì)吸附在柱上，而DNA不被吸附。謝謝你的閱讀2019年10月14六、非蛋白質(zhì)類(lèi)雜質(zhì)的去除1.DNA的去除謝謝你的閱讀2六、非蛋白質(zhì)類(lèi)雜質(zhì)的去除2.熱原質(zhì)的去除（1）整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程在無(wú)菌條件下進(jìn)行，防止產(chǎn)生熱原質(zhì)。（2）所有層析介質(zhì)在使用前先除去熱原質(zhì)，在2~8℃下進(jìn)行操作，洗脫液需先經(jīng)無(wú)菌處理，流出的蛋白質(zhì)溶液也應(yīng)無(wú)菌處理，即通過(guò)0.2μm微濾膜，并在2~8℃下保存。謝謝你的閱讀2019年10月14六、非蛋白質(zhì)類(lèi)雜質(zhì)的去除2.熱原質(zhì)的去除謝謝你的閱讀2六、非蛋白質(zhì)類(lèi)雜質(zhì)的去除3.病毒的去除

成品中必須檢查是否含有病毒。病毒主要來(lái)源于宿主細(xì)胞。經(jīng)過(guò)色譜分離，一般能除去病毒，必要時(shí)可以用紫外線照射使病毒失活，或過(guò)濾將病毒除去。謝謝你的閱讀2019年10月14六、非蛋白質(zhì)類(lèi)雜質(zhì)的去除3.病毒的去除謝謝你的閱讀20七、選擇分離純化方法的依據(jù)根據(jù)產(chǎn)物表達(dá)形式來(lái)選擇根據(jù)分離單元之間的銜接選擇根據(jù)分離純化工藝的要求來(lái)選擇（1）要具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。（2）要盡可能減少組成工藝的步驟。（3）組成工藝的各技術(shù)或步驟之間要能相互適應(yīng)和協(xié)調(diào)，工藝與設(shè)備也能相互適應(yīng)。（4）在工藝過(guò)程中要盡可能少用試劑，以免增加分離純化步驟，或干擾產(chǎn)品質(zhì)量。（5）工藝時(shí)間要盡可能短。（6）工藝和技術(shù)必須高效，收率高，易操作，對(duì)設(shè)備要求低，能耗低。（7）具有較高的安全性。謝謝你的閱讀2019年10月14七、選擇分離純化方法的依據(jù)根據(jù)產(chǎn)物表達(dá)形式來(lái)選擇謝謝你的閱讀第八節(jié)變性蛋白的復(fù)性一、包含體形成的原因二、包含體的分離和溶解三、包含體蛋白復(fù)性方法謝謝你的閱讀2019年10月14第八節(jié)變性蛋白的復(fù)性一、包含體形成的原因謝謝你的閱讀20一、包含體形成的原因包含體形成的原因主要是高水平表達(dá)的結(jié)果。在高水平表達(dá)時(shí)，新生肽鏈的聚集速率一旦超過(guò)蛋白正確折疊的速率就會(huì)導(dǎo)致包含體的形成。重組蛋白在大腸桿菌中表達(dá)時(shí)，缺乏一些蛋白折疊過(guò)程中需要的酶和輔助因子，如折疊酶和分子伴侶等，也導(dǎo)致包含體的形成。電鏡下包含體顆粒謝謝你的閱讀2019年10月14一、包含體形成的原因包含體形成的原因主要是高水平表達(dá)的結(jié)果。一、包含體形成的原因包含體雖然由無(wú)活性的蛋白組成，但包含體形成對(duì)重組蛋白的生產(chǎn)提供了幾個(gè)優(yōu)勢(shì)：包含體具有高密度，易于分離純化；重組蛋白以包含體的形式存在有效地抵御了大腸桿菌中的蛋白酶對(duì)目的蛋白的降解；用于生產(chǎn)處于天然構(gòu)象對(duì)宿主細(xì)胞有毒害的蛋白。謝謝你的閱讀2019年10月14一、包含體形成的原因包含體雖然由無(wú)活性的蛋白組成，但包含二、包含體的分離和溶解1.包含體的分離（1）對(duì)培養(yǎng)收集的重組菌進(jìn)行破碎（高壓勻漿、超聲波破碎等），為了提高破碎率，可以加入一定量的溶菌酶。（2）離心除去破碎上清液，沉淀部分用含有低濃度的變性劑（如脲和鹽酸胍）、去垢劑（如TritonX-100）、脫氧膽酸鈉等化合物的緩沖液進(jìn)行洗滌，如果需要對(duì)包含體進(jìn)行純化，一般多采用蔗糖密度梯度離心法。謝謝你的閱讀2019年10月14二、包含體的分離和溶解1.包含體的分離謝謝你的閱讀2019年二、包含體的分離和溶解2.包含體的溶解包含體的溶解一般都用強(qiáng)的變性劑如脲、鹽酸胍或硫氰酸鹽，或去垢劑如SDS、正十六烷基三甲基銨氯化物等；對(duì)于含有半胱氨酸的蛋白質(zhì)，還需加入還原劑如巰基乙醇、二硫蘇糖醇、二硫赤蘚糖醇及半胱氨酸。溫度一般選擇在30℃以促進(jìn)溶解。此外，由于金屬離子具有氧化催化作用，還常常需要加入金屬螯合劑如EDTA以除去金屬離子。謝謝你的閱讀2019年10月14二、包含體的分離和溶解2.包含體的溶解謝謝你的閱讀2019年三、包含體蛋白復(fù)性方法有效的、理想的折疊復(fù)性方法應(yīng)具備以下幾個(gè)特點(diǎn)：

①活性蛋白質(zhì)的回收率高。②正確復(fù)性的產(chǎn)物易于與錯(cuò)誤折疊蛋白質(zhì)分離。③折疊復(fù)性后應(yīng)得到濃度較高的蛋白質(zhì)產(chǎn)品。④折疊復(fù)性方法易于放大。⑤復(fù)性過(guò)程耗時(shí)較少。

謝謝你的閱讀2019年10月14三、包含體蛋白復(fù)性方法有效的、理想的折疊復(fù)性方法應(yīng)具備以下幾第九節(jié)基因工程藥物的質(zhì)量控制一、醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量保證的一般性要點(diǎn)二、生物材料的質(zhì)量控制三、培養(yǎng)過(guò)程的質(zhì)量控制四、純化過(guò)程的質(zhì)量控制五、目標(biāo)產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14第九節(jié)基因工程藥物的質(zhì)量控制一、醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量保證一、醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量保證的一般性要點(diǎn)產(chǎn)品安全性評(píng)價(jià)根據(jù)各個(gè)具體品種的情況，提出各不相同的安全性評(píng)價(jià)要求，這類(lèi)制品安全性臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案與試驗(yàn)范圍須根據(jù)不同情況作不同規(guī)定。謝謝你的閱讀2019年10月14一、醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量保證的一般性要點(diǎn)謝謝你的閱讀2019一、醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量保證的一般性要點(diǎn)2.產(chǎn)品本身的結(jié)構(gòu)

基因工程產(chǎn)品或人的多肽和蛋白質(zhì)相同，或其氨基酸序列或翻譯后修飾上存在差異，或是非人源性或外源多肽和蛋白質(zhì)，如病毒、細(xì)菌抗原。對(duì)上述后兩類(lèi)產(chǎn)品，視其特點(diǎn)作藥動(dòng)學(xué)、毒理學(xué)研究。對(duì)基因修飾產(chǎn)品，要作一般毒性、長(zhǎng)期毒性以及致突變、致癌變和致畸變等遺傳毒理研究。謝謝你的閱讀2019年10月14一、醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量保證的一般性要點(diǎn)謝謝你的閱讀2019一、醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量保證的一般性要點(diǎn)3.嚴(yán)格控制條件宿主細(xì)胞中表達(dá)的天然基因，轉(zhuǎn)錄或翻譯后，或精制、工藝放大過(guò)程中，都有可能發(fā)生變化，故從原料到制成品制備全過(guò)程的每一步都須嚴(yán)格控制條件與鑒定質(zhì)量，確保符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格、安全有效。謝謝你的閱讀2019年10月14一、醫(yī)藥生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量保證的一般性要點(diǎn)謝謝你的閱讀2019二、生物材料的質(zhì)量控制

原材料的質(zhì)量控制是要確保編碼藥品的DNA序列的正確性，重組微生物來(lái)自單一克隆，所用質(zhì)粒純而穩(wěn)定，以保證產(chǎn)品質(zhì)量的安全性和一致性，所以原材料的質(zhì)量控制主要是對(duì)目的基因、表達(dá)載體以及宿主細(xì)胞的檢查。謝謝你的閱讀2019年10月14二、生物材料的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月141.目的基因根據(jù)指控要求，需明確目的基因的來(lái)源、克隆經(jīng)過(guò)；對(duì)于改造過(guò)的基因應(yīng)說(shuō)明被修改的密碼子、被切除的肽段及拼接的方法；使用PCR技術(shù)擴(kuò)增得到的基因，應(yīng)說(shuō)明擴(kuò)增的模板、引物及酶反應(yīng)條件等情況，并以限制性?xún)?nèi)切酶酶切圖譜和核苷酸序列等分析方法確證基因結(jié)構(gòu)的正確無(wú)誤。二、生物材料的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14二、生物材料的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月142.表達(dá)載體應(yīng)提供表達(dá)載體的名稱(chēng)、結(jié)構(gòu)、遺傳特性及其各組成部分(如復(fù)制子、啟動(dòng)子)的來(lái)源與功能，構(gòu)建中所用位點(diǎn)的酶切圖譜，抗生素抗性標(biāo)記物等。二、生物材料的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14二、生物材料的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月143.宿主細(xì)胞應(yīng)提供宿主細(xì)胞的名稱(chēng)、來(lái)源、傳代歷史、檢定結(jié)果及其生物學(xué)特性等；需闡明載體引入宿主細(xì)胞的方法及載體在宿主細(xì)胞內(nèi)的狀態(tài)，是否整合到染色體內(nèi)及拷貝數(shù)，并證明宿主細(xì)胞與載體結(jié)合后的遺傳穩(wěn)定性；提供插入基因與表達(dá)載體兩側(cè)端控制區(qū)內(nèi)的核苷酸序列，詳細(xì)敘述在生產(chǎn)過(guò)程中，啟動(dòng)與控制克隆基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)的方法及水平。二、生物材料的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14二、生物材料的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

在貯存中，要求種子克隆純而穩(wěn)定；在培養(yǎng)過(guò)積中，要求質(zhì)粒穩(wěn)定，始終無(wú)突變；重復(fù)生產(chǎn)發(fā)酵中，工程菌表達(dá)穩(wěn)定；始終能排除外源微生物污染。三、培養(yǎng)過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14三、培養(yǎng)過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

1.生產(chǎn)用細(xì)胞庫(kù)需證明種子批不含致癌因子，無(wú)細(xì)菌、病毒、霉菌和支原體等污染，由原始種子批建生產(chǎn)用工作細(xì)胞庫(kù)。在同一實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)，不得同時(shí)操作兩種不同的細(xì)胞或菌種，一個(gè)工作人員也不得同時(shí)操作兩種不同的細(xì)胞或菌種。建原始種子批須確證克隆基因DNA序列，詳細(xì)敘述種子批來(lái)源、方式、保存及預(yù)計(jì)使用期，保存與復(fù)蘇時(shí)宿主載體表達(dá)系統(tǒng)的穩(wěn)定性。

對(duì)生產(chǎn)種子，應(yīng)詳細(xì)敘述細(xì)胞生長(zhǎng)與產(chǎn)品生成的方法和材料，并控制微生物污染；提供培養(yǎng)生產(chǎn)濃度與產(chǎn)量恒定性數(shù)據(jù)，依據(jù)宿主細(xì)胞/載體系統(tǒng)穩(wěn)定性確定最高允許傳種代數(shù)。三、培養(yǎng)過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14三、培養(yǎng)過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

2.培養(yǎng)過(guò)程培養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)測(cè)定被表達(dá)基因分子的完整性及宿主細(xì)胞長(zhǎng)期培養(yǎng)后的基因型特征；依宿主細(xì)胞/載體穩(wěn)定性與產(chǎn)品恒定性，規(guī)定持續(xù)培養(yǎng)時(shí)間，并定期評(píng)價(jià)細(xì)胞系統(tǒng)和產(chǎn)品。培養(yǎng)周期結(jié)束時(shí)，應(yīng)監(jiān)測(cè)宿主細(xì)胞/載體系統(tǒng)的特性。三、培養(yǎng)過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14三、培養(yǎng)過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

分離純化過(guò)程中，常用分級(jí)沉淀、超濾、電泳和色譜等技術(shù)，其質(zhì)量控制要求能保證去除微量DNA、糖類(lèi)、殘余宿主蛋白質(zhì)、純化過(guò)程帶入的有害化學(xué)物質(zhì)及熱原質(zhì)，或者將這類(lèi)雜質(zhì)都控制在規(guī)定限度以下。四、純化過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14四、純化過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

純化工藝的每一步完成后均應(yīng)測(cè)定收獲物純度，計(jì)算提純倍數(shù)、收獲率等，要對(duì)每一步的純化效率、活性回收率和蛋白回收率進(jìn)行檢測(cè)。要明確使用的純化方法的原理、目的以及預(yù)期的去除雜質(zhì)的效果，在不同純化步驟中能去除不同性質(zhì)的雜質(zhì)，并進(jìn)行相應(yīng)的工藝驗(yàn)證。純化方法的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮到盡量去除污染病毒、核酸、宿主細(xì)胞雜蛋白、糖以及純化過(guò)程帶入的其他有害物質(zhì)。純化工藝過(guò)程中應(yīng)盡量不加入對(duì)人體有害的物質(zhì)。四、純化過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14四、純化過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

如用柱層析技術(shù)應(yīng)提供所用填料的質(zhì)量認(rèn)證證明，并證實(shí)從柱上不會(huì)掉下有害物質(zhì)。

上樣前應(yīng)清洗除去熱原質(zhì)等。若用親和層析技術(shù)，不應(yīng)含有可測(cè)出的異種免疫球蛋白。如在反相純化步驟中用到乙腈或甲醇等有機(jī)溶劑，用ProteinA親和層析純化抗體，有機(jī)溶劑和ProteinA等這些對(duì)人體有害的物質(zhì)應(yīng)加以去除和控制。四、純化過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14四、純化過(guò)程的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

基因工程藥物質(zhì)量控制主要包括以下幾項(xiàng)要求：產(chǎn)品的鑒別、純度、活性、安全性、穩(wěn)定性和一致性。需要綜合利用生物化學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等多門(mén)學(xué)科的理論與技術(shù)，保證基因工程藥品的安全有效。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

1．生物活性測(cè)定多肽和蛋白質(zhì)藥物的生物學(xué)活性是蛋白質(zhì)藥物的重要質(zhì)量控制指標(biāo)。效價(jià)測(cè)定必須采用國(guó)際上通用的方法，測(cè)定結(jié)果必須用國(guó)際或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行校正，以國(guó)際單位表示或折算成國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)單位。生物學(xué)效價(jià)的測(cè)定往往需要進(jìn)行動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)或通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行體外效價(jià)測(cè)定。體內(nèi)生物活性的測(cè)定要根據(jù)目的產(chǎn)物的生物學(xué)特性建立適合的生物學(xué)模型。體外生物活性測(cè)定的方法有細(xì)胞培養(yǎng)計(jì)數(shù)法、3H-TdR摻入法和酶法細(xì)胞計(jì)數(shù)等。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

蛋白質(zhì)的比活性是每毫克蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性。它不僅是含量指標(biāo)，也是純度指標(biāo)。由于蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)不能常規(guī)測(cè)定，而蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的改變，特別是二硫鍵的錯(cuò)配，可影響蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性，從而影響蛋白質(zhì)藥物的藥效，比活性可以間接地反應(yīng)這一情況。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

2．理化性質(zhì)鑒別（1）非特異性鑒別根據(jù)還原型電泳的遷移率和高效液相色譜的保留時(shí)間和峰型來(lái)

進(jìn)行分析。（2）特異性鑒別利用免疫印跡、免疫電泳、免疫擴(kuò)散等免疫學(xué)方法，確定蛋白

質(zhì)的抗原性。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

（3）相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量測(cè)定最常用的方法有凝膠過(guò)濾法和SDS法，凝膠過(guò)濾法測(cè)定完整的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量，而SDS法測(cè)定蛋白質(zhì)亞基的相對(duì)分子質(zhì)量。（4）等電點(diǎn)測(cè)定樣品用等點(diǎn)聚焦法測(cè)定等電點(diǎn)。在生產(chǎn)過(guò)程中，批與批之間的電泳結(jié)果應(yīng)該一致，以此控制生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

（5）肽圖分析肽圖分析是用酶法或化學(xué)法降解目的蛋白質(zhì)，對(duì)生成的肽段進(jìn)行分離分析。是一種檢測(cè)蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)中細(xì)微變化的最有效方法。肽圖分析可作為制品與標(biāo)準(zhǔn)品作精密比較的手段，與氨基酸成分和序列分析結(jié)果合并，作為蛋白質(zhì)的精確鑒別。該技術(shù)靈敏高效，是對(duì)基因工程藥物的分子結(jié)構(gòu)和遺傳穩(wěn)定性進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證的首選方法。同種產(chǎn)品不同批次的肽圖的一致性是工藝穩(wěn)定性的驗(yàn)證指標(biāo)。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

蛋白質(zhì)降解形成的肽段的鑒定可以用SDS電泳法、高效液相色譜（highperformanceliquidchromatography,HPLC）、毛細(xì)管電泳法及質(zhì)譜法來(lái)測(cè)定。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

（6）氨基酸組成分析一般對(duì)含50個(gè)左右的氨基酸殘基的蛋白質(zhì)的定量分析接近理論值。完整的氨基酸成分分析結(jié)果，應(yīng)包括甲硫氨酸、胱氨酸和色氨酸的準(zhǔn)確值。氨基酸成分分析結(jié)果應(yīng)為三次分別水解樣品測(cè)定后的平均值。測(cè)定的重組蛋白質(zhì)的氨基酸組成應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品一致。氨基酸組成分析采用氨基酸自動(dòng)分析儀測(cè)定，包括蛋白質(zhì)水解、自動(dòng)進(jìn)樣，氨基酸分析、定量分析報(bào)告等內(nèi)容。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

（7）部分氨基酸序列分析此項(xiàng)是重組蛋白質(zhì)的重要鑒別指標(biāo)，一般要求對(duì)中試前

三批產(chǎn)品至少應(yīng)該測(cè)定N端15個(gè)氨基酸，C端應(yīng)根據(jù)情況測(cè)定1~3個(gè)氨基酸。（8）蛋白質(zhì)二硫鍵分析測(cè)定巰基的方法有別PMCB法、DTNB法、NEMI法等。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

3.蛋白質(zhì)含量測(cè)定主要用于原液比活性計(jì)算和成品規(guī)格的控制。蛋白質(zhì)含量可根據(jù)其物化性質(zhì)采用Folin-酚試劑法、染色法（Bradford）、雙縮脲法、紫外吸收法，HPLC法和凱氏定氮法等方法，其中Folin-酚試劑法、染色法是在質(zhì)量檢定中常使用的方法。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

4.蛋白質(zhì)純度分析純度分析是基因工程藥物質(zhì)量控制的關(guān)鍵項(xiàng)目。測(cè)定蛋白質(zhì)含量可根據(jù)其本身理化性質(zhì)和生物學(xué)特性設(shè)計(jì)。通常采用的方法有還原性及非還原性SDS、等電點(diǎn)聚焦、各種HPLC及毛細(xì)管電泳等。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

5.雜質(zhì)的檢測(cè)基因工程產(chǎn)物的雜質(zhì)包括蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)兩類(lèi)。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

（1）蛋白類(lèi)雜質(zhì)

在蛋白類(lèi)雜質(zhì)中，最主要的是純化過(guò)程中殘余的宿主細(xì)胞蛋白。測(cè)定采用免疫分析的方法。同時(shí)需輔以電泳等其他檢測(cè)手段補(bǔ)充和驗(yàn)證。除宿主細(xì)胞蛋白外，目的蛋白本身也可能發(fā)生某些變化，形成在理化性質(zhì)上與原蛋白質(zhì)極為相似的蛋白雜質(zhì)，在體內(nèi)往往會(huì)導(dǎo)致抗體的產(chǎn)生，在質(zhì)量控制中也要加以嚴(yán)格控制。五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14五、目的產(chǎn)品的質(zhì)量控制謝謝你的閱讀2019年10月14

（2）非蛋白類(lèi)雜質(zhì)具有生物學(xué)作用的非蛋白類(lèi)雜質(zhì)主要有病毒和細(xì)菌等微生