乙肝病毒表面抗原測定的影響因素及解決方法

乙肝病毒表面抗原測定的影響因素及解決方法

用酶聯(lián)免疫吸附試驗（elisa）檢測肝腎患者的病毒，具有操作簡單、特異性強、敏感性高、試劑成本低、快速等優(yōu)點?，F(xiàn)在它在中國廣泛使用，但也有許多影響手術(shù)結(jié)果的因素。為提高乙肝病毒的檢測質(zhì)量,本文通過對乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的測定探討其重要影響因素及解決方法,現(xiàn)報道如下。1后hbsag檢測1.1標(biāo)本應(yīng)按常規(guī)方法采集,不可溶血(因紅細胞溶解釋放出過氧化酶活性物質(zhì)可引起非特異性顯色),對嚴重脂血、黃疸及藥物治療等會影響檢測結(jié)果,其標(biāo)本應(yīng)叮囑受檢者重新采集。1.2在檢測HBsAg同時又有其他檢測項目的,要采集雙管血。對只有單管血的標(biāo)本,應(yīng)先檢測HBsAg,后送其他檢測室進行檢測,以避免相互交叉污染,出現(xiàn)錯誤結(jié)果。1.3嚴格執(zhí)行標(biāo)本的查對制度,接收標(biāo)本應(yīng)將標(biāo)本上的標(biāo)簽與申請單逐一核對,確定姓名、性別、年齡,有差錯應(yīng)及時和臨床溝通,避免標(biāo)本采集錯誤。1.4HBsAg檢測使用血清,標(biāo)本一定要充分離心,徹底去除纖維蛋白。否則加進反應(yīng)孔的血漿凝固可阻止HBsAg的游動,不利于與吸附在反應(yīng)杯上的乙肝病毒表面抗體(抗-HBs)結(jié)合,從而產(chǎn)生錯誤的假陰性結(jié)果。1.5標(biāo)本應(yīng)及時檢驗,一次性塑料管標(biāo)本放置時間不宜過久。需第2天檢測的標(biāo)本要冰箱冷藏保存。2試劑的原因2.1試劑的選用試劑的選擇是保證血液檢測質(zhì)量的關(guān)鍵要素。要選購知名度相對高、具有廠商證照齊全的試劑,不要用無批號的試劑,最好選用與儀器配套的試劑。勿混用不同廠家不同批號的試劑和過期失效的試劑,即使是同一廠家生產(chǎn)的洗滌液和顯色劑也不要通用,以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。2.2試劑盒的使用前與溫室的平衡有些實驗室工作量很大,不太注意試劑的準(zhǔn)備,將試劑從冰箱中拿出來即用,而忽略了這種做法有可能影響一些弱陽性標(biāo)本的檢測。正確的做法是實驗開始前將試劑在室溫下放置20~30min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達到所要求的高度,以滿足測定要求。3操作因素3.1滴加試劑的使用3.1.1微量加樣器要定期校正,以保證加樣量的準(zhǔn)確。3.1.2標(biāo)本應(yīng)加入反應(yīng)孔的底部,避免加在孔壁上,不得濺出或有氣泡,不得加入纖維蛋白原。加樣力度和速度應(yīng)均勻。3.1.3滴加試劑(包括酶結(jié)合物及顯色劑)時,應(yīng)搖勻試劑,使液體混勻,瓶身保持垂直,并棄去1~2滴,避免滴加在孔壁上,并注意不可濺出,不可產(chǎn)生氣泡,要注意滴加的角度、速度。角度要一致,滴加速度適中,否則太快容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,引起非特異顯色造成1份標(biāo)本用相同的試劑盒測定結(jié)果重復(fù)性差。3.1.4要做到一份樣本一個移液頭,防止交叉污染。3.1.5標(biāo)本較多時,應(yīng)分批操作,防止加樣后放入溫箱前等待時間過長,以減少實驗時間延長造成的誤差。3.2反應(yīng)時間的確定3.2.1加樣完成后,應(yīng)充分振蕩混勻。3.2.2微孔板應(yīng)貼上封板膠放入溫箱中,以減少孔內(nèi)液體的蒸發(fā)。反應(yīng)溫度應(yīng)準(zhǔn)確(37℃),而且還應(yīng)考慮反應(yīng)板放置水浴達到37℃后所需的時間。尤其在室溫較低的時候或在非水浴的狀態(tài)下。因此,為保證37℃條件下足夠的溫育時間,臨床實驗室應(yīng)確定本實驗室在不同季節(jié)不同溫度下將微孔板從室溫下拿至溫箱后需要多長時間,孔內(nèi)溫度才能達到37℃,從而適當(dāng)延長板條在溫箱中放置的時間。3.2.3反應(yīng)時間要準(zhǔn)確,時間過短特異性結(jié)合不夠,易產(chǎn)生假陰性;時間過長,非特異性結(jié)合物緊附于反應(yīng)孔難以洗脫,測定值偏高。3.3電子商務(wù)面為硬的患者,加液清洗并過硬在ELISA操作過程中,洗滌是決定試驗成敗的關(guān)鍵步驟之一。ELISA測定的洗板一般有兩種方式,即手工和洗板機洗板。洗板機要保證洗板針暢通,洗滌時設(shè)定每遍30~60s浸泡時間,使洗滌徹底,加液的速度、力度適宜。手工洗板加入的洗液量以剛滿反應(yīng)孔為限,防止孔口內(nèi)有游離酶未能洗凈,同時防止孔與孔之間液體交叉。并且洗滌結(jié)束后扣干亦非常重要,否則易造成假陽性。每次洗完板后,在吸水紙上輕輕拍干,拍板時要垂直,避免交叉污染,用力不能過猛,防止抗原抗體復(fù)合物脫離;吸水紙要一次性使用,應(yīng)使用不易脫落碎屑的吸水紙為宜。3.4elisa測定顯色液及時間的確定顯色是ELISA的最后一步溫浴反應(yīng),此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。加顯色液順序不可顛倒。溫度和時間是影響顯色的因素。兩者在ELISA定量中尤其重要。因此,在一定時間內(nèi),適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進行。3.5elisa法測定結(jié)果讀取結(jié)果要在15~30min內(nèi)完成,定性測定用肉眼判讀試驗結(jié)果時,反應(yīng)板應(yīng)水平距離白色背景10~15cm;定量測定時用酶標(biāo)儀讀取結(jié)果,酶標(biāo)儀不應(yīng)置于陽光或強光照射下,需先預(yù)熱15~30min再進行測試。定性測定報陰性或陽性即可,定量測定則報出具體的數(shù)值。結(jié)果解釋比較復(fù)雜,它要求實驗技術(shù)人員對所測定的項目有較為全面的知識基礎(chǔ)。綜上所述