紫外可見吸光光度法及分子熒光分析法課件

第10章吸光光度法（AbsorptionPhotometry）

基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收建立起來的一種分析方法。包括比色法、紫外-可見吸光光度法和紅外光譜法等。1第10章吸光光度法基于物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收建立起來的一10.1物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收和光吸收定律1、光的基本性質(zhì)

光是一種電磁波，具有波粒二象性，用普郎克公式可以把波性和粒性聯(lián)系在一起。10.1.1物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收210.1物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收和光吸收定律1、光的基本性質(zhì)光的波粒二象性波動(dòng)性粒子性

E光的折射光的衍射光的偏振光的干涉光電效應(yīng)E：光子的能量（J,焦耳）

：光子的頻率（Hz,赫茲）

：光子的波長(zhǎng)（cm）c：光速（2.99791010cm.s-1）h：Plank常數(shù)（6.625610-34J.s焦耳.秒）3光的波粒二象性波動(dòng)性粒子性E光的折射光的衍射光的偏光學(xué)光譜區(qū)遠(yuǎn)紫外近紫外可見近紅外中紅外遠(yuǎn)紅外（真空紫外）10nm~200nm200nm

~380nm380nm

~780nm780nm~2.5

m2.5

m

~50

m50

m

~300

m紫外光度法比色及可見光度法躍遷類型：分子中價(jià)電子的躍遷4光學(xué)光譜區(qū)遠(yuǎn)紫外近紫外可見近紅外中紅外遠(yuǎn)紅外（真空紫2、吸收光譜產(chǎn)生的原理1.電子相對(duì)于原子核的運(yùn)動(dòng)--電子能級(jí);2.原子核在其平衡位置附近的相對(duì)振動(dòng)--振動(dòng)能級(jí);3.分子本身繞其重心的轉(zhuǎn)動(dòng)--轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí).物質(zhì)分子內(nèi)部3種運(yùn)動(dòng)形式及其對(duì)應(yīng)能級(jí)：分子吸收光譜，是由于分子中價(jià)電子選擇性地吸收了某些范圍內(nèi)的光52、吸收光譜產(chǎn)生的原理1.電子相對(duì)于原子核的運(yùn)動(dòng)--電子能基態(tài)激發(fā)態(tài)分子總能量：E分子＝E電子＋E振動(dòng)＋E轉(zhuǎn)動(dòng)分子吸收光，從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，能量發(fā)生變化△E分子＝△E電子＋△E振動(dòng)＋△E轉(zhuǎn)動(dòng)

1~20ev0.05~1ev<0.05ev若吸收光，則必須：即：只有光的能量與分子中基態(tài)與激發(fā)態(tài)能量差相等時(shí)，物質(zhì)才會(huì)吸收光。由于物質(zhì)基態(tài)與激發(fā)態(tài)能量差是固定的，所以物質(zhì)對(duì)光的吸收是選擇性的6基態(tài)激發(fā)態(tài)分子總能量：E分子＝E電子＋E振動(dòng)＋E轉(zhuǎn)動(dòng)若吸收光吸收光譜AbsorptionSpectrum純電子能態(tài)

間躍遷S2S1S0S3h

E2E0E1E3S2S1S0h

A

h

h

h

分子內(nèi)電子躍遷帶狀光譜銳線光譜

A7吸收光譜AbsorptionSpectrum純電子能*單色光（monochromaticlight）：具有同一波長(zhǎng)的光。*復(fù)合光（multiplexlight）：由不同波長(zhǎng)組成的光。*紫外光（ultravioletlight）：波長(zhǎng)200~400nm。*可見光（visiblelight）：人眼能感覺到的光，波長(zhǎng)在400~750nm。它是由紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等各種色光按一定比例混合而成的*波段（waveband）：各種色光的波長(zhǎng)范圍不同。*互補(bǔ)色光（complementarycolorlight）：按一定比例混合，得到白光（whitelight）。*物質(zhì)的顏色是因物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光具有選擇性吸收作用而產(chǎn)生的。8*單色光（monochromaticlight）：具有同藍(lán)黃紫綠青藍(lán)橙紅青白光9藍(lán)黃紫綠青藍(lán)橙紅青白光9物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表觀現(xiàn)象示意復(fù)合光10物質(zhì)的顏色與吸收光的關(guān)系完全吸收完全透過吸收黃色光光譜示意表吸收光/nm吸收光顏色物質(zhì)顏色400～450紫黃綠450～480藍(lán)黃480～490綠藍(lán)橙490～500藍(lán)綠紅500～560綠紅紫560～580黃綠紫580～610黃藍(lán)610～650橙綠藍(lán)650～760紅

表6-2物質(zhì)顏色與吸收光顏色的關(guān)系藍(lán)綠11吸收光/nm吸收光顏色物質(zhì)顏色400～450紫黃綠I’0ItIa濃度Cb吸收光Ir反射光10.1.2光吸收的基本定律----朗伯-比爾定律把I0當(dāng)作入射光，I0＝Ia＋I(xiàn)t吸光溶液：I’0＝Ia＋I(xiàn)t＋I(xiàn)r定義：透光度：通常用I表示透光度越大，溶液對(duì)光的吸收越小1、朗伯-比爾定律I’0I0bIr反射光空白溶液：I’0＝I0＋I(xiàn)r12I’0ItIa濃度Cb吸收光Ir10.1.2光吸收的基本定朗伯定律:(1760)A=lg(I0/It)=k1b當(dāng)入射光的

,吸光物質(zhì)的c一定時(shí),溶液的吸光度A與液層厚度b成正比.比爾定律(1852)A=lg(I0/It)=k2c 當(dāng)入射光的

,液層厚度b

一定時(shí),溶液的吸光度A與吸光物質(zhì)的c成正比.吸光度：13朗伯定律:(1760)A=lg(I0/It)=k1b比朗伯-比爾定律意義: 當(dāng)一束平行單色光通過均勻、透明的吸光介質(zhì)時(shí)，其吸光度與吸光質(zhì)點(diǎn)的濃度和吸收層厚度的乘積成正比.A=lg(I0/It)=KbcK：常數(shù)，與吸光物質(zhì)性質(zhì)、入射光波長(zhǎng)和溫度等因素有關(guān)光吸收具有加和性.A=A1+A2+

14朗伯-比爾定律意義:A=lg(I0/It)=KbcK：常數(shù)，K吸光系數(shù)Absorptivity

a的單位:L·g-1·cm-1當(dāng)c的單位用g·L-1表示時(shí)，用a表示，

A＝abc

的單位:L·mol-1·cm-1當(dāng)c的單位用mol·L-1表示時(shí)，用

表示.

－摩爾吸光系數(shù)MolarAbsorptivity

A＝

bc

2、摩爾吸光系數(shù)和桑德爾靈敏度

a：表示每升1g物質(zhì)，液層厚度為1cm時(shí)溶液的吸光度：表示物質(zhì)的量濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時(shí)溶液的吸光度越大，物質(zhì)對(duì)光的吸收程度越大，

最大時(shí)的吸收波長(zhǎng)即λmax，此時(shí)測(cè)定靈敏度最高。問：如何測(cè)

？15K吸光系數(shù)Absorptivitya一般情況<104

~104~105

>105低靈敏度中等靈敏度高靈敏度實(shí)際測(cè)得的是條件摩爾吸收系數(shù)，′實(shí)際測(cè)定332+桔紅色

508鄰二氮菲=1.110416一般情況<104~104~105>

Sandell(桑德爾)靈敏度

(S)定義：當(dāng)儀器的檢測(cè)限A=0.001時(shí),截面積為1cm2的液層內(nèi)所能檢出的物質(zhì)的最低含量。用S表示，單位：

g·cm-2S與

關(guān)系S小，靈敏度高;

相同的物質(zhì)，M小，則靈敏度高.17Sandell(桑德爾)靈敏度(S)S小，靈敏度單光束、單波長(zhǎng)可見：72、721、722、723、724紫外-可見：751G、754雙光束、雙波長(zhǎng)10.2分光光度計(jì)及吸收光譜10.2.1分光光度計(jì)18單光束、單波長(zhǎng)可見：72、721、722、723、724紫外單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示19單波長(zhǎng)單光束分光光度計(jì)0.575光源單色器吸收池檢測(cè)器顯示1主要部件光源：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠的光強(qiáng)度,穩(wěn)定可見光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500nm)紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)20主要部件光源：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠的光強(qiáng)度,單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。

棱鏡：依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過棱鏡時(shí)折射率不同.玻璃350～3200nm,石英185～4000nm問：玻璃能用于紫外區(qū)嗎？光柵：在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。利用光通過光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光。波長(zhǎng)范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便.21單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。棱鏡：依吸收池(比色皿)：用于盛待測(cè)及參比溶液。 可見光區(qū)：光學(xué)玻璃池 紫外區(qū)：石英池問：紫外區(qū)能用玻璃嗎？顯示裝置（指示器）：記錄A或T 低檔儀器：刻度顯示中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動(dòng)掃描記錄檢測(cè)器：利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成電流訊號(hào)。光電管，光電倍增管22吸收池(比色皿)：用于盛待測(cè)及參比溶液。顯示裝置（指示器）：

任何一種溶液．對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收程度是不相等的。如果將不同波長(zhǎng)的單色光依次通過一定濃度的某一溶液，測(cè)量該溶液對(duì)各種單色光的吸收程度，以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)可以得到一條曲線，叫做吸收光譜或吸收曲線。它清楚地描述了溶液對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收情況。

10.2.2吸收光譜23任何一種溶液．對(duì)不同波長(zhǎng)的光的吸收程度是不相等的。如Cr2O72-、MnO4-的吸收光譜300400500600700

/nm350525545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2Absorbance350光吸收曲線24Cr2O72-、MnO4-的吸收光譜30040050060不同物質(zhì)吸收光譜的形狀以及

max不同——定性分析的基礎(chǔ)例如：KMnO4溶液的光吸收曲線，λmax＝525nm，如果濃度改變，吸光度改變，但吸收曲線形狀不變，如下頁同一物質(zhì)，濃度不同時(shí)，吸收光譜的形狀相同，Amax不同——定量分析的基礎(chǔ)25不同物質(zhì)吸收光譜的形狀以及max不同252626選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤涸瓌t：扣除非待測(cè)組分的吸收以顯色反應(yīng)為例進(jìn)行討論M+R=M-R

max試液 顯色劑溶劑吸光物質(zhì)參比液組成無吸收無吸收光學(xué)透明溶劑基質(zhì)吸收無吸收吸收不加顯色劑的試液無吸收吸收吸收顯色劑基質(zhì)吸收吸收吸收吸收顯色劑+試液+待測(cè)組分的掩蔽劑若欲測(cè)M-R的吸收

maxA（樣）=A（待測(cè)吸光物質(zhì)）

+A（干擾）+A（池）A（參比）

=A（干擾）+A（池）27選擇適當(dāng)?shù)膮⒈热芤涸瓌t：扣除非待測(cè)組分的吸收以顯色反應(yīng)為例進(jìn)10.3顯色反應(yīng)及其影響因素10.3.1顯色反應(yīng)和顯色劑顯色反應(yīng)：將待測(cè)組分轉(zhuǎn)變成可測(cè)量的有色化合物的反應(yīng)，叫顯色反應(yīng)。顯色劑：與待測(cè)組分形成有色化合物的試劑稱顯色劑。2810.3顯色反應(yīng)及其影響因素10.3.1顯色反應(yīng)和顯色劑顯（1）顯色反應(yīng)的選擇A選擇性好，干擾少，或干擾容易消除;靈敏度高，有色物質(zhì)的ε應(yīng)大于104。B有色化合物的組成恒定，符合一定的化學(xué)式。C有色化合物的化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，至少保證在測(cè)量過程中溶液的吸光度基本恒定。這就要求有色化合物不容易受外界環(huán)境條件的影響。D有色化合物與顯色劑之間的顏色差別要大，即顯色劑對(duì)光的吸收與絡(luò)合物的吸收有明顯區(qū)別，要求兩者的吸收峰波長(zhǎng)之差Δλ(稱為對(duì)比度)大于60nm。29（1）顯色反應(yīng)的選擇29（2）顯色劑

無機(jī)顯色劑不多，因?yàn)樯傻慕j(luò)合物不穩(wěn)定，靈敏度和選擇性也不高。如用KSCN顯色測(cè)鐵、鉬、鎢和鈮；用鉬酸銨顯色測(cè)硅、磷和釩;用H2O2顯色測(cè)鈦等。

有機(jī)顯色劑分子中含有生色團(tuán)（chromophoricgroup）和助色團(tuán)（auxochromegroup）。生色團(tuán)是某些含不飽和鍵的基團(tuán)，如偶氮基、對(duì)醌基和羰基等。這些基團(tuán)中的π電子被激發(fā)時(shí)需能量較小，可吸收波長(zhǎng)200nm以上的可見光而顯色。助色團(tuán)是含孤對(duì)電子的基團(tuán)，如氨基、羥基和鹵代基等。這些基團(tuán)與生色團(tuán)上的不飽和鍵作用，使顏色加深。30（2）顯色劑30

有機(jī)顯色劑A磺基水楊酸OO型螯合劑，可與很多高價(jià)金屬離子生成穩(wěn)定的螯合物，主要用于測(cè)Fe3+。B丁二酮肟NN型螯合顯色劑，用于測(cè)定Ni2+。C1，10-鄰二氮菲NN型螯合顯色劑，測(cè)微量Fe2+。D二苯硫腙含S顯色劑，萃取光度測(cè)定Cu2+，Pb2+，Zn2+，Cd2+，Hg2+等。E偶氮胂Ⅲ(鈾試劑Ⅲ)偶氮類螯合劑，強(qiáng)酸性溶液中測(cè)Th(Ⅳ),Zr(Ⅳ)，U(Ⅳ)等；在弱酸性溶液中測(cè)稀土金屬離子。F鉻天青S三苯甲烷類顯色劑，測(cè)定Al3+。G結(jié)晶紫三苯甲烷類堿性染料，測(cè)定Tl3+。31有機(jī)顯色劑31

（3）多元絡(luò)合物

多元絡(luò)合物是由三種或三種以上的組分所形成的絡(luò)合物。目前應(yīng)用較多的是由一種金屬離子與兩種配位體所組成的三元絡(luò)合物。三元絡(luò)合物在吸光光度分析中應(yīng)用較普遍。重要的三元絡(luò)合物類型。*三元混配絡(luò)合物金屬離子與一種絡(luò)合劑形成未飽和絡(luò)合物，然后與另一種絡(luò)合劑結(jié)合，形成三元混合配位絡(luò)合物，簡(jiǎn)稱三元混配絡(luò)合物。例如，V(V)，H2O2和吡啶偶氮間苯二酚(PAR)形成1:1:1的有色絡(luò)合物，可用于釩的測(cè)定，其靈敏度高，選擇性好。32（3）多元絡(luò)合物32*

離子締合物金屬離子先與絡(luò)合劑生成絡(luò)陰離子或絡(luò)陽離子，再與帶反電荷的離子生成離子締合物。主要用于萃取光度法。如，Ag+與1，10-鄰二氮菲形成陽離子，再與溴鄰苯三酚紅的陰離子形成深藍(lán)色的離子締合物。用F-、H2O2、EDTA作掩蔽劑，可測(cè)定微量Ag+。作為離子締合物的陽離子，有堿性染料、1，10-鄰二氮菲及其衍生物、安替比林及其衍生物、氯化四苯砷(或磷、銻)等;作為陰離子，有X-，SCN-，ClO4-，無機(jī)雜多酸和某些酸性染料等。33*離子締合物金屬離子先與絡(luò)合劑生成絡(luò)陰離子或絡(luò)陽離子，

*金屬離子-絡(luò)合劑-表面活性劑體系

金屬離子與顯色劑反應(yīng)時(shí)，加入某些表面活性劑，可以形成膠束化合物，它們的吸收峰向長(zhǎng)波方向移動(dòng)(紅移)，而測(cè)定的靈敏度顯著提高。目前，常用于這類反應(yīng)的表面活性劑有溴化十六烷基吡啶、氯化十四烷基二甲基芐胺、氯化十六烷基三甲基銨、溴化十六烷基三甲基銨、溴化羥基十二烷基三甲基銨、OP乳化劑。例如，稀土元素、二甲酚橙及溴化十六烷基吡啶反應(yīng)，生成三元絡(luò)合物，在pH8~9時(shí)呈藍(lán)紫色，用于痕量稀土元素總量的測(cè)定。34*金屬離子-絡(luò)合劑-表面活性劑體系金屬離子與顯色*雜多酸

溶液在酸性的條件下，過量的鉬酸鹽與磷酸鹽、硅酸鹽、砷酸鹽等含氧的陰離子作用生成雜多酸，作為吸光光度法測(cè)定相應(yīng)的磷、硅、砷等元素的基礎(chǔ)。雜多酸法需要還原反應(yīng)的酸度范圍較窄，必須嚴(yán)格控制反應(yīng)條件。很多還原劑都可應(yīng)用于雜多酸法中。氯化亞錫及某些有機(jī)還原劑，例1-氨基-2-萘酚-4-磺酸加亞硫酸鹽和氫醌常用于磷的測(cè)定。硫酸肼在煮沸溶液中作砷鉬酸鹽和磷鉬酸鹽的還原劑。抗壞血酸也是較好的還原劑。35*雜多酸溶液在酸性的條件下，過量的鉬酸鹽與磷酸鹽、硅酸10.3.2影響顯色反應(yīng)的因素1.溶液的酸度(1)酸度低，金屬離子水解

(2)酸度影響顯色劑的濃度和顏色(3)酸度影響絡(luò)合物的組成和顏色2、顯色劑用量3.顯色時(shí)間和溫度4.溶劑（1）溶劑影響絡(luò)合物的離解度（2）溶劑影響顯色反應(yīng)的速度3610.3.2影響顯色反應(yīng)的因素1.溶液的酸度(1)酸度低10.4.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制1、測(cè)定波長(zhǎng)的選擇

515655415500釷-偶氮砷III

鈷-亞硝基紅鹽

AA絡(luò)合物絡(luò)合物試劑試劑

/nm

/nm最大吸收原則：選λmax的光作入射光。此時(shí)，靈敏度較高，測(cè)定時(shí)偏離朗伯-比耳定律的程度減小，其準(zhǔn)確度也較好?！拔兆畲?、干擾最小”的原則：當(dāng)有干擾物質(zhì)存在時(shí)，應(yīng)據(jù)此來選擇入射光的波長(zhǎng)。10.4吸光光度分析及誤差控制3710.4.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇和標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制1、測(cè)定波長(zhǎng)的選根據(jù)A＝εbc作A～C曲線從工作曲線上查濃度AAxC2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作1231、3不通過原點(diǎn)，主要原因有：A、參比溶液選擇不當(dāng)B、吸收池厚度不等C、吸收池表面不清潔38根據(jù)A＝εbcAAxC2.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作1231、3不通過10.4.2對(duì)朗伯-比耳定律的偏離A＝εbc3910.4.2對(duì)朗伯-比耳定律的偏離A＝εbc391.單色光不純所引起的偏離避免方法：選最大吸收波長(zhǎng)處，使用分光效能高的單色器ACAλλ1λ2λ1λ2λ1處無偏差401.單色光不純所引起的偏離ACAλλ1λ2λ1λ2λ1處無偏2．介質(zhì)不均勻性引起的偏離

朗伯-比耳定律是建立在均勻、非散射基礎(chǔ)上的一般規(guī)律,如果介質(zhì)不均勻，呈膠體、乳濁、懸浮狀態(tài)存在，則入射光除了被吸收之外、還會(huì)有反射、散射作用。在這種情況下，物質(zhì)的吸光度比實(shí)際的吸光度大得多，必然要導(dǎo)致對(duì)朗伯-比耳定律的偏離。412．介質(zhì)不均勻性引起的偏離413.

由于溶液本身的化學(xué)反應(yīng)引起的偏離溶液中吸光物質(zhì)常因解離、締合、形成新的化合物或在光照射下發(fā)生互變異構(gòu)等，從而破壞了平衡濃度與分析濃度之間的比例關(guān)系，也就破壞了吸光度A與分析濃度之間的線性關(guān)系。產(chǎn)生對(duì)朗伯-比耳定律的偏離。例：K2Cr2O7

λmax=450nm稀釋，離解度增大，吸光度降低實(shí)際測(cè)定時(shí)：可控制強(qiáng)酸性測(cè)Cr2O72-

或控制強(qiáng)堿性測(cè)CrO42-423.由于溶液本身的化學(xué)反應(yīng)引起的偏離例：K2Cr2O74.顯色反應(yīng)的干擾及其消除

試樣中存在干擾物質(zhì)會(huì)影響被測(cè)組分的測(cè)定,使得標(biāo)準(zhǔn)曲線嚴(yán)重偏離朗伯-比爾定律,這是造成光度分析誤差的重要原因.例干擾物質(zhì)本身有顏色或與顯色劑反應(yīng),在測(cè)量條件下也有吸收,造成干擾.干擾物質(zhì)與待測(cè)組分反應(yīng)或與顯色劑反應(yīng),使顯色反應(yīng)不完全,也會(huì)造成干擾.干擾物質(zhì)在測(cè)量條件下從溶液中析出,使溶液變混濁,無法準(zhǔn)確測(cè)定溶液的吸光度.434.顯色反應(yīng)的干擾及其消除43

消除干擾的方法主要有以下幾種：（1）控制酸度許多顯色劑是有機(jī)弱酸，控制溶液的酸度，就可以控制顯色劑R的濃度，這樣就可以使某種金屬離子顯色，使另外一些金屬離子不能生成有色絡(luò)合物。（2）加入掩蔽劑在顯色溶液里加一種能與干擾離子反應(yīng)生成無色絡(luò)合物的試劑，也是消除干擾的有效而常用的方法。(3)改變干擾離子的價(jià)態(tài)以消除于擾。（4）選擇合適的參比溶液.（5）增加顯色劑的用量（6）分離干擾離子44消除干擾的方法主要有以下幾種：4410.4.3吸光度測(cè)量的誤差

由于儀器精度不夠，光源不穩(wěn)、檢測(cè)器、讀數(shù)不準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)條件偶然變動(dòng)等引起的誤差，這些誤差，都反映到讀數(shù)誤差ΔT

ΔT（絕對(duì)誤差）：與T本身的大小無關(guān)，對(duì)于一臺(tái)給定儀器它基本上是常數(shù)，一般在0.002-0.01之間，僅與儀器自身的精度有關(guān)。010T%90100A01.0∞讀數(shù)標(biāo)尺T：分布均勻，A=εbc，當(dāng)T不同時(shí)，ΔA非常數(shù)，∴ΔC非常數(shù)4510.4.3吸光度測(cè)量的誤差由于儀器精度不夠，光源不穩(wěn)A=-lgT=-0.434lnT測(cè)量誤差公式推導(dǎo):dA=

-0.434dT/T若：dT=ΔT=±0.01，則：由于T與濃度c不是線性關(guān)系，故不同濃度時(shí)的儀器讀數(shù)誤差ΔT

引起的測(cè)量誤差Δc/c不同。46A=-lgT=-0.434lnT測(cè)量誤差公式可繪制∣Er∣～T曲線TlgT最大時(shí)，即(TlgT)′=0時(shí)誤差最小,算得lgT=-0.434,T=36.8%,A=0.434適宜測(cè)量范圍：T：0.15～0.65A：0.80～0.20工作中可控制A：0.90～0.10通過使用不同厚度的比色皿1086420204060800.70.40.20.1AT/%Er(36.8)0.43447可繪制∣Er∣～T曲線1086420204060800.70484810.5.1目視比色法標(biāo)準(zhǔn)系列未知樣品特點(diǎn)利用自然光比較吸收光的互補(bǔ)色光準(zhǔn)確度低（半定量）不可分辨多組分方法簡(jiǎn)便，靈敏度高10.5其它吸光光度法4910.5.1目視比色法標(biāo)準(zhǔn)系列未知樣品特點(diǎn)利用自然光比較吸10.5.2示差吸光光度法分光光度法可用于測(cè)量微量組分，控制A在0.1～1.0之間，若濃度過大，即使不偏離比爾定律，但會(huì)使A>1.0，無法測(cè)定。所以可采用示差法。示差法可分三種：

高濃度示差法（常用）低濃度示差法極限精密法5010.5.2示差吸光光度法501、示差法原理

被測(cè)物濃度設(shè)：空白液0標(biāo)液C0待測(cè)液Cx（Cx>C0,但與C0接近）以空白液作參比：A0＝

bc0Ax＝

bcx△A=Ax-A0=

b(cx-c0)=

b△c以標(biāo)液作參比，調(diào)A0＝0，（相當(dāng)于把C0的濃度當(dāng)作0）A相對(duì)＝△A=

bc相對(duì)若已知

b，示差法測(cè)A，求濃度：Cx＝Cs＋△C511、示差法原理被測(cè)物濃度以空白液作參比：A0＝示差法提高準(zhǔn)確度的實(shí)質(zhì)：擴(kuò)展了讀數(shù)標(biāo)尺。常規(guī)法TxT051050100

落在測(cè)量誤差較大的范圍示差法T051050100TxTsTs

落在測(cè)量誤差較小的范圍結(jié)論：示差法通過提高測(cè)量的準(zhǔn)確度提高了方法的準(zhǔn)確度52示差法提高準(zhǔn)確度的實(shí)質(zhì)：擴(kuò)展了讀數(shù)標(biāo)尺。常規(guī)法TxT051010.5.3雙波長(zhǎng)光度分析法1、雙波長(zhǎng)原理切光器使兩個(gè)波長(zhǎng)的光交替照射到吸收池上設(shè)λ1、λ2處兩束光強(qiáng)度相等，Aλ1＝

λ1

bcAλ2＝

λ2

bc△A=Aλ1

-Aλ2

=（

λ1-λ2）bc△A∝C光源單色器單色器檢測(cè)器吸收池λ1λ2切光器5310.5.3雙波長(zhǎng)光度分析法1、雙波長(zhǎng)原理切光器使兩個(gè)2、應(yīng)用A、可測(cè)混濁液只一個(gè)吸收池，當(dāng)λ1與λ2相差不大時(shí)，混濁液對(duì)兩束光散射相同B、單組分測(cè)定，用一個(gè)吸收池，消除了比色皿不一致產(chǎn)生的誤差C、可測(cè)吸收光譜重迭組分542、應(yīng)用A、可測(cè)混濁液54測(cè)P：選λ2作參比，在λ1處測(cè)A，Q在兩處吸光度相等，相互抵消A＝（

λ1-λ2）bc55測(cè)P：選λ2作參比，在λ1處測(cè)A，Q在兩處吸光度相等，相互抵

測(cè)定苯酚(X)與2，4，6-三氯苯酚(Y)混合物中的苯酚時(shí)就可用