補腎健脾活血中藥對溶血性貧血大鼠造血及紅細胞生成素、粒-巨噬細胞集落刺激因子、白介素-2的影響

補腎健脾活血中藥對溶血性貧血大鼠造血及紅細胞生成素、粒-巨噬細胞集落刺激因子、白介素-2的影響

采用補腎健脾活血、活血通絡(luò)的活骨髓片，以及具有補腎益腎精、經(jīng)絡(luò)骨髓通經(jīng)的活髓膏。為此,設(shè)計了補腎、健脾、活血化瘀中藥以及活髓片、活髓膏對乙酰苯肼造成大鼠溶血性貧血和環(huán)磷酰胺造成小鼠骨髓抑制性貧血影響的實驗,以探討補腎、健脾、活血化瘀中藥對生血作用的不同機制,以及活髓片、活髄膏的療效機理。方法及檢測總參數(shù)4白介素-2(interleukin-2IL-2)、紅細胞生成素(granulocyte-macrophggecolonystimulatingfactor,GM-CSF)試劑盒,由北京東亞免疫技術(shù)研究所提供;粒-巨噬細胞集落刺激因子(erythropoietin,EPO)試劑盒,由美國INCSTAR公司生產(chǎn);于實驗第13天灌胃2h后,眶靜脈采血,進行血常規(guī)檢測,并采用放射免疫分析法,用BECKMANDP5500型γ計數(shù)器檢測IL-2、GM-CSF、EPO。5統(tǒng)計學(xué)方法兩均數(shù)差別的顯著性檢驗用t檢驗,兩樣本率的比較用χ檢驗。結(jié)果1各組大鼠的生存率2各組大鼠的rbc和hb的比較3兩組il-2、epo及差異GM-CSF水平:補腎組、健脾組及合治組均高于正常組、對照組和活血組(P<0.05)。實驗各組IL-2均高于正常組(P<0.05),然各實驗組之間差異無顯著性(P>0.05)。實驗各組EPO高于正常組(P<0.05或P<0.01);各用藥組均高于對照組(P<0.05或P<0.01);健脾組最高,與補腎組、活血組、活髓組比較,差異有顯著性(P<0.05)。中藥在促進造血作用機制上的差異APH曾在40年代作為紅細胞增多癥的治療藥物應(yīng)用于臨床,后來因其過度溶血造成的不良反應(yīng)較大而被淘汰。APH是強氧化劑,較專一地對紅細胞有緩慢的進行性氧化性損傷作用,尤其是干擾了紅細胞內(nèi)葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD),促進血紅蛋白變性而形成海氏小體,使紅細胞易于崩解,最終造成機體的溶血性貧血,故出現(xiàn)紅細胞數(shù)明顯減少,血紅蛋白、血容量隨之低下。賁長恩等的實驗表明,APH造成的大鼠溶血性貧血,屬于中醫(yī)血虛或氣血兩虛模型。有實驗進一步表明,APH造成的溶血性貧血大鼠更多地表現(xiàn)出脾虛癥狀,而無腎虛改變。本實驗中以健脾組大鼠生存率最高為上述觀點提供實驗證據(jù)。同時提示中醫(yī)辨證施治是有內(nèi)在的客觀物質(zhì)基礎(chǔ)。實驗結(jié)果表明,各組的生存率和Hb反映出了各組用藥的不同效果。APH造成的大鼠溶血性貧血,采用健脾中藥組無論是存活率,還是Hb均為最佳,其原因可能在于APH造成的大鼠貧血,主要是表現(xiàn)脾虛、氣血不足,從中醫(yī)辨證的角度來講最為對證,內(nèi)外合治組較健脾組稍差,但較補腎組及活髓組似乎更佳,提示采用多途徑治療以提高臨床療效,具有廣泛的應(yīng)用前景。補腎組和活髓組大致相近,活血組的治療效果最差,初步表明健脾藥、補腎藥、活血化瘀中藥在促進造血的機制上存在著差異。GM-CSF由T細胞、內(nèi)皮細胞、成纖維細胞、巨噬細胞產(chǎn)生,是廣譜效能的髓系造血因子,其靶細胞是多能干細胞、粒單祖細胞、中性粒細胞、單核細胞、嗜酸粒細胞、巨噬細胞。實驗表明補腎組、健脾組及合治組的GM-CSF水平高于正常組、對照組、活血組(P<0.05),說明前三組中藥具有促生GM-CSF的作用。IL-2是促使T細胞從G1轉(zhuǎn)至S期的關(guān)鍵性因子,主要由被抗原或絲裂原激活的細胞產(chǎn)生,細胞產(chǎn)生量較少。IL-2是現(xiàn)已被公認的造血抑制因子,可能通過增強Ts活性引起造血抑制,同時,IL-2又可能刺激IFN增強其對造血的抑制。本實驗表明APH造成的溶血性貧血大鼠其各組的IL-2水平均高于正常組(P<0.05),表明實驗各組大鼠均有不同程度的造血抑制,然實驗各組相互間比較未見差異性(P>0.05)。EPO是調(diào)控紅細胞生成的主要激素,可與紅系祖細胞受體結(jié)合而促使CFU-E和BFU-E的增殖和分化,每個CFU-E細胞約有1000個EPO受體。實驗各組EPO水平均較正常組高,而各實驗組EPO水平亦均高于對照組,說明實驗各組因APH溶血的刺激和/或藥物的作用而使EPO水平提高。其中健脾組EPO水平最高,與補腎組、活血組、活髓組比較差異顯著(P<0.05),這亦可能是健脾組療效最佳的原因之一,也可能是健脾藥與補腎藥、活血化瘀藥作用機制不同的地方之一。補腎組、活血組、活髓組及合治組EPO水平亦均較對照組高,表明上述各組中藥都具有不同程度的促EPO生成作用。合治組再次顯示出了較好的作用勢頭,均高于補腎組,活髓組及活血組(盡管統(tǒng)計學(xué)無意義),但與對照組相比差異極顯著(P<0.01)。補腎、健脾、活血化瘀中藥均能促進造血,然其作用環(huán)節(jié)及作用靶點有所不同,這與中藥的治療機制在于多環(huán)節(jié)與多層次整體上調(diào)節(jié)機體有關(guān),本實驗表明補腎、健脾、活血化瘀中藥促進造血有著不同的機制,其不同機制的揭示對解析中醫(yī)理論的客觀物質(zhì)基礎(chǔ)具有重要意義。1實驗動物及分組Wistar雄性大鼠,體重180～220g,由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物中心提供。將大鼠隨機分為7組:正常組、模型對照組(對照組)、六味地黃湯組(補腎組)、四君子湯組(健脾組)、丹參飲組(活血組)、活髓片組(活髓組)、活髓片加活髓膏組(內(nèi)外合治組,簡稱合治組)。正常組10只,其余6組各25只。2造模方法乙酰苯肼(acetylphenylhydrazine,APH)由上海化學(xué)試劑總廠所屬上海試劑三廠生產(chǎn),批號:910516。將APH加入生理鹽水中,制備成2%APH生理鹽水溶液。于實驗的第1、4、7天經(jīng)皮下注射給藥造模,首次劑量20mg/100g體重,后兩次注射劑量減半(10mg/100mg)。3藥物制備及給藥方法補腎藥選六味地黃湯,由熟地黃、山萸肉、山藥、澤瀉、茯苓、丹皮組成;健脾藥選四君子湯,由人參、茯苓、白術(shù)、甘草組成;活血藥選丹參飲去檀香加紅花,即丹參、紅花、砂仁組成;活髓片藥由黃芪、人參、枸杞子、川芎等藥組成;活髓膏中含有鹿茸、補骨脂、川斷等生藥。除活髓膏外,將上述中藥制成濃縮煎劑,每毫升含20mg生藥,按大鼠與人之劑量互算后,以每次4ml劑量給大鼠灌胃,對照組灌服等量蒸溜水。灌胃由實驗第1天起至第13天結(jié)束,每日2次。見表2。各治療組與正常組及對