CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體瘤的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略

CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體瘤的挑戰(zhàn)與應(yīng)對(duì)策略

黨可純，王金偉江蘇省藥品監(jiān)督管理局審核查驗(yàn)中心，南京210019嵌合抗原受體T細(xì)胞（chimericantigenreceptorT-cell，CAR-T）作為腫瘤免疫治療的新療法，能克服宿主免疫耐受狀態(tài)，以主要組織相容性復(fù)合物（mainhistocompatibilitycomplex，MHC）限制性方式識(shí)別并靶向殺傷腫瘤細(xì)胞，具有靶向性強(qiáng)、殺瘤范圍廣以及效果持久等優(yōu)點(diǎn)，已成功應(yīng)用于多種血液腫瘤的臨床治療[1，2]。截止2022年8月，美國(guó)食品藥品管理局（FoodandDrugAdministration，F(xiàn)DA）已經(jīng)批準(zhǔn)了6款CAR-T產(chǎn)品上市，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（NationalMedicalProductsAdministration，NMPA）也于2021年先后批準(zhǔn)了兩款CAR-T產(chǎn)品上市，預(yù)示CAR-T治療時(shí)代的到來(lái)。雖然CAR-T細(xì)胞治療針對(duì)血液腫瘤療效明顯，然而其在實(shí)體腫瘤上的應(yīng)用仍面臨著諸多挑戰(zhàn)。2019年一項(xiàng)納入42項(xiàng)血液瘤及18項(xiàng)實(shí)體瘤臨床試驗(yàn)的META綜合分析（913位受試者）結(jié)果表明，54.4%的血液瘤患者接受CD19CAR-T治療后癥狀完全緩解，而實(shí)體瘤患者的完全緩解率僅為4.1%[3]。鑒于實(shí)體瘤治療需求亟待滿足，現(xiàn)對(duì)CAR-T治療實(shí)體瘤面臨的挑戰(zhàn)及其可行的解決策略進(jìn)行總結(jié)與探討，以期為后續(xù)CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體腫瘤研究提供思路。1CAR-T治療實(shí)體瘤面臨多重挑戰(zhàn)1.1缺乏腫瘤特異性靶抗原CAR-T細(xì)胞上的嵌合抗原受體（CAR）由識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原（tumorassociatedantigen，TAA）的胞外抗原結(jié)合區(qū)、跨膜區(qū)、鉸鏈區(qū)和胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)組成。而CAR-T細(xì)胞療法的有效性主要依賴于對(duì)TAA的識(shí)別。不同于血液腫瘤常見(jiàn)的CD19、CD22、BCMA等靶點(diǎn)，在實(shí)體瘤中很難發(fā)現(xiàn)特異性的TAA，大多數(shù)TAA不僅在癌細(xì)胞表面高度表達(dá)，也在正常細(xì)胞上表達(dá)，因而大部分CAR-T細(xì)胞治療均面臨攻擊正常細(xì)胞的“脫靶效應(yīng)”（on-target，offtumor）困境[4]。例如，HER2靶點(diǎn)在乳腺癌細(xì)胞表面過(guò)表達(dá)，但在正常心肺組織中也有少量表達(dá)，曾有一名結(jié)腸癌患者接受較高劑量的HER2CAR-T細(xì)胞治療，僅在輸注后15分鐘內(nèi)該患者便出現(xiàn)了急性呼吸窘迫，并于治療后5天死亡[5]。1.2T細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)及腫瘤浸潤(rùn)障礙消除實(shí)體瘤的關(guān)鍵是將CAR-T細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)至腫瘤細(xì)胞表面，以便與靶抗原結(jié)合并發(fā)揮殺傷作用。CAR-T細(xì)胞雖然易與血液及淋巴系統(tǒng)中分散循環(huán)的血液腫瘤細(xì)胞接觸，然而其轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)體瘤病灶仍然具有重重障礙。一方面，以腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（cancerassociatedfibroblasts，CAFs）為主要組成部分的細(xì)胞外基質(zhì)（extracellularmatrix，ECM）和結(jié)構(gòu)不規(guī)則的腫瘤血管，對(duì)CAR-T細(xì)胞形成一層天然的物理屏障，使其難以有效歸巢和浸潤(rùn)到腫瘤[6]。另一方面，實(shí)體瘤的基質(zhì)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞會(huì)分泌一種特殊的細(xì)胞因子——趨化因子，可與其對(duì)應(yīng)的趨化因子受體結(jié)合，將免疫細(xì)胞招募到腫瘤微環(huán)境（tumormicroenvironment，TME）中，從而促進(jìn)或抑制腫瘤生長(zhǎng)。CAR-T細(xì)胞表面缺乏與實(shí)體瘤分泌的趨化因子相匹配的趨化因子受體，造成CAR-T對(duì)腫瘤部位的歸巢能力差[7]。上述兩方面因素共同作用使得CAR-T細(xì)胞很難精準(zhǔn)到達(dá)實(shí)體瘤部位發(fā)揮免疫效應(yīng)。1.3腫瘤微環(huán)境的免疫抑制然而即使有一部分CAR-T細(xì)胞可成功浸潤(rùn)到實(shí)體瘤內(nèi)部，其功效也會(huì)因TME的免疫抑制作用而大幅降低。首先，TME中存在著前列腺素E2（prostaglandinE2，PGE2）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transforminggrowthfactor-β，TGF-β）、白細(xì)胞介素6（IL-6）和IL-10等可溶性抑制因子，其可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，并抑制進(jìn)入腫瘤內(nèi)部的CAR-T細(xì)胞活性。同時(shí)，TME中的抑制性免疫細(xì)胞、即髓源性抑制細(xì)胞（myeloid-derivedsuppressorcells，MDSCs）、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatorycells，Tregs）等，亦可通過(guò)生成精氨酸酶-1（arginase-1，Arg-1）、活性氧（reactiveoxygenspecies，ROS）等分子，形成免疫抑制性微環(huán)境。此外，腫瘤細(xì)胞還能夠通過(guò)上調(diào)表面抑制受體，如程序性死亡配體-1（programmeddeath-ligand1，PD-L1）等，利用內(nèi)在的負(fù)調(diào)控機(jī)制來(lái)降低CAR-T細(xì)胞活性，導(dǎo)致TME中的免疫耐受。最后，腫瘤細(xì)胞糖酵解使腫瘤微環(huán)境呈現(xiàn)缺氧、酸性和營(yíng)養(yǎng)缺乏的狀態(tài)，使得CAR-T細(xì)胞更加難以存活[8，9]。2CAR-T攻克實(shí)體瘤的可行策略2.1提高腫瘤細(xì)胞特異性2.1.1靶抗原選擇靶抗原的選擇是CAR-T治療腫瘤成功的基礎(chǔ)，此類(lèi)抗原需在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，而在正常細(xì)胞表面不表達(dá)或極低表達(dá)。目前臨床在研CAR-T項(xiàng)目較理想的實(shí)體瘤靶抗原主要集中在Claudin18.2、間皮素（mesothelin，MSLN）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（glypican3，GPC3）等熱門(mén)靶點(diǎn)。（1）Claudin18.2（CLDN18.2）CLDN18.2是膜上皮緊密連接蛋白Claudin18（CLDN18）的剪接變體，正常情況下僅低表達(dá)于胃黏膜分化上皮細(xì)胞，而在胃腸道、胰腺癌、卵巢癌等多種腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)顯著上調(diào)，故此可作為CAR-T治療的理想靶點(diǎn)。2022年5月，我國(guó)首個(gè)針對(duì)CLDN18.2的CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品（科濟(jì)生物的CT041）的臨床研究結(jié)果發(fā)表[10]，研究納入了37例CLDN18.2陽(yáng)性的晚期消化道腫瘤患者，在消化道腫瘤患者中的客觀緩解率（objectiveresponserate，ORR）達(dá)48.6%，疾病控制率（diseasecontrolrate，DCR）達(dá)73%；在胃癌患者中的ORR達(dá)57.1%，DCR達(dá)75.0%；在既往接受二線以上治療失敗的胃癌患者中，ORR達(dá)61.1%，DCR達(dá)83.3%。CT041整體耐受性良好且安全性風(fēng)險(xiǎn)可控，未發(fā)生≥3級(jí)細(xì)胞因子釋放綜合征（cytokinereleasesyndrome，CRS），未發(fā)生免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)神經(jīng)毒性綜合征（immuneeffectorcell-associatedneurotoxicitysyndrome，ICANS），無(wú)治療相關(guān)死亡事件。（2）間皮素（MSLN）MSLN是由MSLN基因編碼的一種細(xì)胞表面糖蛋白，在惡性間皮瘤、胰腺癌、卵巢癌和肺癌等腫瘤中廣泛表達(dá)，而在正常的胸膜、腹膜以及心包膜表面低表達(dá)，因此MSLN也被認(rèn)為是CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體瘤的一個(gè)潛力靶點(diǎn)。2021年11月，來(lái)自紀(jì)念斯隆-凱特琳癌癥中心（MemorialSloanKetteringCancerCenter，MSKCC）公布了一項(xiàng)靶向MSLN的CAR-T治療惡性胸膜間皮瘤的臨床療效數(shù)據(jù)[11]，臨床效果同樣顯著，在23例接受CAR-T治療的患者中位生存期達(dá)17.7個(gè)月，一年存活率為74%。未觀察到2級(jí)以上CRS或ICANS，未出現(xiàn)“脫靶效應(yīng)事件”。（3）磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC3）GPC3在絕大多數(shù)肝癌細(xì)胞表面異常表達(dá)，與肝癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，而在正常肝組織內(nèi)幾乎不表達(dá)，是肝癌CAR-T治療的理想靶點(diǎn)。此外，GPC3還在卵巢透明細(xì)胞癌、卵黃囊癌等生殖系統(tǒng)腫瘤中廣泛表達(dá)。2021年在美國(guó)臨床腫瘤學(xué)會(huì)（AmericanSocietyofClinicalOncology，ASCO）年會(huì)上，我國(guó)研究者首次公布了GPC3CAR-T細(xì)胞藥物（Ori-CAR-001）治療復(fù)發(fā)/難治性肝細(xì)胞癌的最新臨床研究數(shù)據(jù)，在9例可評(píng)估的受試者中，ORR達(dá)44%，DCR達(dá)78%。同時(shí)在已回輸?shù)?1例患者中，Ori-CAR-001顯示出良好的安全性和耐受性，9例患者觀察到了CRS，其中僅有2例出現(xiàn)4級(jí)CRS，給予類(lèi)固醇激素和托珠單抗治療后恢復(fù)正常；未觀察到ICANS。此外，以人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體2（humanepidermalgrowthfactorreceptor2，HER2）、表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）、前列腺特異性膜抗原（prostate-specificmembraneantigen，PSMA）、雙唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂（disialoganglioside2，GD2）、CD133、癌胚抗原（carcinoembryonicantigen，CEA）等為靶點(diǎn)的CAR-T治療實(shí)體瘤的臨床試驗(yàn)也在火熱進(jìn)行中，期待滿足更大的實(shí)體瘤臨床治療需求，見(jiàn)表1。表1CAR-T治療實(shí)體瘤臨床試驗(yàn)概況2.1.2針對(duì)實(shí)體瘤的特異性CAR分子改造除了繼續(xù)尋找和開(kāi)發(fā)針對(duì)特異性靶抗原的CAR-T細(xì)胞療法，還可以通過(guò)改造CAR-T細(xì)胞，提高對(duì)腫瘤抗原的特異性識(shí)別能力，減少對(duì)正常組織的殺傷。有研究者開(kāi)發(fā)出一種串聯(lián)CAR分子，其胞外結(jié)合區(qū)由兩個(gè)靶向不同TAA的單鏈抗體片段（singlechainantibodyfragment，scFv）組成，并與CD3ζ鏈和CD28或4-1BB共刺激信號(hào)域連接。改造后的串聯(lián)CART細(xì)胞僅在同時(shí)識(shí)別兩種不同TAA時(shí)才能被激活，增加了CAR-T的特異性和安全性。類(lèi)似的CAR設(shè)計(jì)也能達(dá)到相同目的，一個(gè)CAR結(jié)構(gòu)包含兩個(gè)scFv，一個(gè)與胞內(nèi)CD3ζ鏈連接，提供第一信號(hào)，另一個(gè)與共刺激信號(hào)域連接，提供第二信號(hào)。只有兩種抗原同時(shí)在靶細(xì)胞上表達(dá)且被識(shí)別，才能激活兩個(gè)信號(hào)，從而活化CAR-T細(xì)胞，并誘導(dǎo)抗腫瘤效應(yīng)（見(jiàn)圖1）[8]。圖1串聯(lián)CAR-T細(xì)胞設(shè)計(jì)[8]此外，美國(guó)加州大學(xué)團(tuán)隊(duì)還將之前開(kāi)發(fā)的“prime-and-kill”回路中的synNotch受體（一種在識(shí)別同源抗原時(shí)可激活轉(zhuǎn)錄輸出的工程化受體）應(yīng)用到CAR-T細(xì)胞中[23]，SynNotch-CART細(xì)胞需要同時(shí)識(shí)別啟動(dòng)抗原（synNotch抗原）和殺傷性抗原（CAR抗原），而且只有先被synNotch配體啟動(dòng)時(shí)才能執(zhí)行CAR誘導(dǎo)殺傷，因此健康細(xì)胞不會(huì)受到這些CAR-T細(xì)胞的攻擊，從而減少了“脫靶效應(yīng)”的發(fā)生。最近也有研究者發(fā)現(xiàn)，通過(guò)改造CAR的scFv結(jié)構(gòu)域，調(diào)節(jié)scFv對(duì)抗原的敏感性，可使CAR-T能有效區(qū)分腫瘤及正常組織，從而減少脫靶風(fēng)險(xiǎn)，獲得更好的治療效果[24]。除此之外，埃秀馬生物科技有限公司另辟蹊徑，利用BIOATLA公司的條件性激活生物制劑（conditionallyactivebiologic，CAB）抗體篩選平臺(tái)[25]，基于scFv對(duì)靶抗原親和力會(huì)根據(jù)環(huán)境pH發(fā)生可逆改變的原理，篩選僅在酸性腫瘤微環(huán)境（pH6.7）中與靶抗原有高親和力，而在正常組織（pH7.4）中不與靶抗原結(jié)合的抗體序列，從而在保證腫瘤殺傷效果的同時(shí)，避免脫靶效應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)。該公司針對(duì)腎細(xì)胞癌開(kāi)發(fā)的前沿CAR-T產(chǎn)品在治療劑量1×107細(xì)胞/kg也顯示了良好的安全性。2.2解除免疫抑制2.2.1阻斷免疫檢查點(diǎn)通路腫瘤細(xì)胞上過(guò)度表達(dá)的PD-L1可特異性識(shí)別并結(jié)合T細(xì)胞上的程序性死亡蛋白-1（programmeddeath-1，PD-1），導(dǎo)致T細(xì)胞失去殺傷能力，如同啟動(dòng)“剎車(chē)”系統(tǒng)，嚴(yán)重影響CAR-T細(xì)胞的療效[26]。因此，在CAR-T細(xì)胞治療實(shí)體瘤時(shí)，同時(shí)給予免疫檢查點(diǎn)通路抑制劑，阻斷“剎車(chē)”系統(tǒng)的啟動(dòng)，可增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的抗腫瘤活性。貝勒醫(yī)學(xué)院研究團(tuán)隊(duì)在神經(jīng)母細(xì)胞瘤的臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，相比于單獨(dú)使用CAR-T細(xì)胞藥物或僅與化藥聯(lián)用，靶向GD2的CAR-T細(xì)胞藥物與化療藥物及抗PD-1藥物三者聯(lián)用表現(xiàn)出更好的T細(xì)胞持久性及抗腫瘤功效[27]。一項(xiàng)靶向MSLN的CAR-T細(xì)胞療法聯(lián)合PD-1拮抗劑帕博利珠單抗治療惡性胸膜間皮瘤的臨床研究也證實(shí)，接受聯(lián)合治療的患者相較于單獨(dú)CAR-T細(xì)胞治療的患者中位生存期延長(zhǎng)了6.2個(gè)月，一年存活期也由74%提高至83%[11]。除了與免疫檢查點(diǎn)PD-1阻斷劑聯(lián)用，亦可將PD-1抗體的基因引入CAR-T細(xì)胞，不僅能夠阻止PD-1與PD-L1結(jié)合，亦能助力PD-1抗體在局部形成高濃度環(huán)境解除免疫抑制，改善TME，從而更好地調(diào)動(dòng)免疫細(xì)胞。近期，錢(qián)其軍團(tuán)隊(duì)首次采用自分泌PD-1抗體靶向MSLN的CAR-T細(xì)胞聯(lián)合阿帕替尼治療一名晚期難治性卵巢癌患者，效果顯著，該患者接受聯(lián)合治療后病灶縮小，且無(wú)進(jìn)展生存期和總生存期分別達(dá)到了5個(gè)月和17個(gè)月[28]。除此之外，通過(guò)CRISPR等基因編輯手段敲除CAR-T細(xì)胞的PD-1基因[29]或在CAR-T細(xì)胞表面表達(dá)PD-1顯性負(fù)性受體（dominantnegativereceptor，DNR），以克服PDL1對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用（PD-1DNR可與腫瘤細(xì)胞上的PD-L1結(jié)合，并不會(huì)激活PD-1/PD-L1通路），同樣可以有效抑制PD-1/PD-L1通路，提高CAR-T細(xì)胞的細(xì)胞毒性和腫瘤清除率[30]。2.2.2共表達(dá)細(xì)胞因子大量研究表明，IL-12可有效動(dòng)員免疫系統(tǒng)，具有明顯的抗腫瘤活性。AgliardiG等[31]通過(guò)CAR-T細(xì)胞聯(lián)合局部注射IL-12治療多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastomamultiforme，GBM）的臨床前研究表明，聯(lián)合治療比單獨(dú)CAR-T細(xì)胞治療能產(chǎn)生更持久的抗腫瘤反應(yīng)，IL-12不僅增強(qiáng)了CAR-T細(xì)胞的細(xì)胞毒性，而且重塑了TME，促進(jìn)了促炎性CD4+T細(xì)胞的浸潤(rùn)，并減少了Tregs的數(shù)量。然而，全身性使用IL-12會(huì)引起嚴(yán)重的副作用，這大大限制了其臨床應(yīng)用。面對(duì)這一挑戰(zhàn)，研究人員嘗試通過(guò)改造CAR-T細(xì)胞，使其過(guò)表達(dá)IL-12，從而調(diào)節(jié)局部微環(huán)境。LiuY等[32]研究發(fā)現(xiàn)，相較于常規(guī)靶向GPC3CAR-T細(xì)胞，過(guò)表達(dá)IL-12的CAR-T細(xì)胞對(duì)GPC3陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞具有更加顯著的裂解效果，且分泌更多的細(xì)胞因子，在荷瘤小鼠中顯示出更強(qiáng)的抗腫瘤作用，證實(shí)IL-12增加了T細(xì)胞的浸潤(rùn)和持久性。ChmielewskiM等[33]研究同樣表明，CAR-T細(xì)胞中IL-18的表達(dá)亦可顯著增強(qiáng)其體內(nèi)外抗腫瘤活性。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，分泌IL-18的CAR-T細(xì)胞抗腫瘤過(guò)程伴隨著腫瘤免疫微環(huán)境的整體變化：M1型巨噬細(xì)胞和自然殺傷（naturalkillers，NKs）細(xì)胞的數(shù)量增加，而Tregs、抑制性樹(shù)突狀細(xì)胞（dendriticcells，DCs）和M2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量減少。此外，CAR-T細(xì)胞表達(dá)IL-7、IL-15、IL-21或IL-23等細(xì)胞因子，同樣也能有效改善TME的免疫抑制，增強(qiáng)CAR-T及其他免疫細(xì)胞的抗腫瘤活性，同時(shí)也可增加CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的持久性[34]。2.2.3CAR-T聯(lián)合溶瘤病毒療法研究表明，溶瘤病毒可通過(guò)多種途徑助力CAR-T細(xì)胞克服免疫抑制障礙，提高治療效果[35]。除了直接的溶瘤作用外，溶瘤病毒裂解腫瘤細(xì)胞還釋放TAAs、新抗原（neoantigens，TANs）以及損傷相關(guān)分子模式（damage-associatedmolecularpatterns，DAMPs），進(jìn)而招募更多的免疫細(xì)胞到達(dá)腫瘤組織，有效激活抗腫瘤免疫應(yīng)答。近日，日本研究團(tuán)隊(duì)首次揭露CAR-T細(xì)胞與溶瘤病毒聯(lián)用可以有效阻止GBM的生長(zhǎng)并顯著提升荷瘤小鼠的存活率[36]，相比于單獨(dú)CAR-T治療或單獨(dú)溶瘤病毒治療組，聯(lián)合組小鼠的腫瘤體積縮小了50%，且存活時(shí)間延長(zhǎng)至60天以上。2.3提高對(duì)實(shí)體瘤的轉(zhuǎn)運(yùn)及浸潤(rùn)2.3.1共表達(dá)趨化因子趨化因子是影響T細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)和浸潤(rùn)的重要分子，近年來(lái)針對(duì)趨化因子的研究給CAR-T攻克實(shí)體瘤帶來(lái)了新希望。日本研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)使CAR-T細(xì)胞共表達(dá)IL-7及趨化因子CCL19，制備出對(duì)實(shí)體瘤具有顯著殺傷效果的“超級(jí)CAR-T細(xì)胞”[37]。在小鼠肥大細(xì)胞癌模型中，相較于常規(guī)CAR-T細(xì)胞療法只能略微改善荷瘤小鼠的生存時(shí)間，該“超級(jí)CAR-T細(xì)胞”可以使小鼠的腫瘤完全消除，生存率達(dá)到100%。同時(shí)對(duì)于那些常規(guī)CAR-T細(xì)胞療法幾乎無(wú)效的肺腺癌和胰腺癌，小鼠模型實(shí)驗(yàn)也證實(shí)“超級(jí)CAR-T細(xì)胞”同樣實(shí)現(xiàn)了腫瘤組織的完全消除。腫瘤組織切片熒光染色結(jié)果表明，經(jīng)過(guò)“超級(jí)CAR-T細(xì)胞”治療后，腫瘤組織中的T細(xì)胞及DCs明顯增多，證實(shí)該新型改造設(shè)計(jì)能夠幫助CAR-T細(xì)胞有效浸潤(rùn)到腫瘤組織內(nèi)部，進(jìn)而對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行殺傷。我國(guó)研究團(tuán)隊(duì)也在近期將該CAR-T改造設(shè)計(jì)應(yīng)用于實(shí)體瘤的治療[38]，在針對(duì)GPC3和MSLN靶點(diǎn)的CAR-T細(xì)胞上共表達(dá)IL-7和CCL19，用于GPC3或MSLN陽(yáng)性的晚期肝細(xì)胞癌、胰腺癌和卵巢癌的治療，其中1例晚期肝癌接受了瘤內(nèi)注射CAR-T治療后，肝臟病灶基本消失。近日，廣州百暨基因首次將趨化因子受體CXCR5加裝到靶向EGFR的CAR-T細(xì)胞表面，用于治療非小細(xì)胞肺癌。體內(nèi)CAR-T細(xì)胞示蹤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，共表達(dá)CXCR5使得CAR-T細(xì)胞可以定向轉(zhuǎn)運(yùn)和浸潤(rùn)至腫瘤病灶處，對(duì)于腫瘤具有顯著的清除效果[39]。此外，上海復(fù)旦大學(xué)研究團(tuán)隊(duì)也揭露在CAR-T細(xì)胞上表達(dá)CCR2b、CCR4等趨化因子受體基因，亦可增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞向?qū)嶓w腫瘤組織轉(zhuǎn)移和浸潤(rùn)[40]。2.3.2靶向腫瘤細(xì)胞外基質(zhì)CAF是ECM的主要組成部分，在掩蔽腫瘤細(xì)胞免受免疫攻擊和將T細(xì)胞排除于腫瘤微環(huán)境中具有重要作用。一些研究團(tuán)隊(duì)通過(guò)靶向CAF上高度表達(dá)的成纖維細(xì)胞活化蛋白（fibroblastactivationprotein，F(xiàn)AP），以此重塑ECM來(lái)調(diào)節(jié)TME，從而增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞對(duì)實(shí)體瘤的浸潤(rùn)效果[41]。乙酰肝素酶亦可降解ECM成分硫酸乙酰肝素蛋白多糖。CaruanaI等[42]報(bào)道，表達(dá)乙酰肝素酶的工程化CAR-T細(xì)胞獲得了更好的降解ECM的能力，從而促進(jìn)了腫瘤T細(xì)胞浸潤(rùn)和抗腫瘤活性。2.4提高CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的持久性即使對(duì)于療效顯著的血液瘤，腫瘤的高復(fù)發(fā)率仍是限制CAR-T細(xì)胞治療發(fā)展的主要障礙，提高CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的持久性是其治療實(shí)體瘤的另一關(guān)鍵策略。BioNTech公司開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)了一款BNT211產(chǎn)品，由靶向CLDN6抗原的自體CAR-T細(xì)胞和一種編碼CLDN6抗原的mRNA疫苗（CARVac）組成。CARVac經(jīng)靜脈注射后會(huì)被DCs吸收并翻譯成抗原肽，繼而呈遞在DCs表面以持續(xù)激活CAR-T細(xì)胞，大大提高CAR-T細(xì)胞在體內(nèi)的存活和擴(kuò)增效率。小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CARVac策略確實(shí)