梅毒檢測PPT全面版課件

1梅毒檢測第1頁/共74頁1梅毒檢測第1頁/共74頁背景介紹梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略探討梅毒檢測技術(shù)規(guī)范簡介主要內(nèi)容第2頁/共74頁背景介紹主要內(nèi)容第2頁/共74頁背景介紹第3頁/共74頁背景介紹第3頁/共74頁（一期和二期梅毒更加真實(shí)反映梅毒疫情趨勢）全國梅毒流行狀況第4頁/共74頁（一期和二期梅毒更加真實(shí)反映梅毒疫情趨勢）全國梅毒流行狀況第衛(wèi)生部于年6月3日下發(fā)了關(guān)于《中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（-年）》中國CDC于年8月起草了《全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范（試行討論稿）》衛(wèi)生部下發(fā)相關(guān)/規(guī)劃文件第5頁/共74頁衛(wèi)生部于年6月3日下發(fā)了關(guān)于《中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（主要措施：廣泛開展宣傳教育，普及梅毒防治知識開展綜合防治，阻斷梅毒傳播提高監(jiān)測檢測質(zhì)量，開展主動(dòng)檢測，促進(jìn)梅毒早期發(fā)現(xiàn)提供規(guī)范化梅毒醫(yī)療服務(wù)預(yù)防和控制先天梅毒加強(qiáng)國際合作和應(yīng)用性研究

《中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（-年）》第6頁/共74頁主要措施：《中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（-年）》第6頁/梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)第7頁/共74頁梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)第7頁/共74頁梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測的意義臨床服務(wù)篩查、確定現(xiàn)癥梅毒患者；判斷療效。梅毒篩查 篩查梅毒感染者，盡早發(fā)現(xiàn)梅毒患者（保證安全用血預(yù)防經(jīng)血傳播病原體和抗體）流行病學(xué)監(jiān)測 掌握梅毒流行趨勢；了解不同高危人群的梅毒感染率、發(fā)病率。（MSM、FSW…）第8頁/共74頁梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測的意義臨床服務(wù)第8頁/共74頁概述-梅毒病原體小而纖細(xì)的螺旋狀微生物長5～20μm，粗細(xì)有6～12個(gè)規(guī)則的螺旋基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體，為兩層膜所圍繞行動(dòng)緩慢而有規(guī)律

-圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)中前后移動(dòng)

-伸縮其圈間之距離而移動(dòng)

-全身彎曲如蛇行第9頁/共74頁概述-梅毒病原體小而纖細(xì)的螺旋狀微生物第9頁/共74頁概述-傳播途徑性接觸是主要的傳染途徑未經(jīng)治療的患者在感染后的1年內(nèi)最具有傳染性隨著病期的延長，傳染性越來越小到感染后2年，通過性接觸一般無傳染性母嬰傳播在妊娠7周時(shí)，梅毒螺旋體即可通過胎盤傳染未經(jīng)治療者，雖已無性傳播（病期>2年），但妊娠時(shí)仍可傳染給胎兒,病期越長，傳染性越小;

第10頁/共74頁概述-傳播途徑性接觸是主要的傳染途徑第10頁/共74頁概述-梅毒的診斷梅毒的診斷必須依靠病史、癥狀及實(shí)驗(yàn)檢查進(jìn)行綜合分析。梅毒的實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果對診斷有決定性意義。第11頁/共74頁概述-梅毒的診斷梅毒的診斷必須依靠病史、癥狀及實(shí)驗(yàn)檢查進(jìn)行綜常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測方法病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測第12頁/共74頁常用梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測方法第12頁/共74頁病原學(xué)檢查原理：一期、二期梅毒時(shí)，取硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮損部位組織液或淋巴結(jié)穿刺術(shù)得到的組織液，在暗視野顯微鏡下，光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出亮光，從而可根據(jù)其特殊形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式進(jìn)行檢測。方法：暗視顯微鏡檢查鍍銀染色法：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色直接熒光法第13頁/共74頁病原學(xué)檢查第13頁/共74頁病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可確診梅毒，且具有快速、方便、易操作的特點(diǎn)。螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最佳方法，對于患者的早期診斷、及時(shí)治療、預(yù)后和盡早切斷傳染源都有十分重要的意義。如未見到梅毒螺旋體，并不能排除患梅毒的可能性，第14頁/共74頁病原學(xué)檢查的臨床意義病原學(xué)方法直接鏡檢到梅毒螺旋體，在臨床可15梅毒血清學(xué)檢測方法第15頁/共74頁15梅毒血清學(xué)檢測方法第15頁/共74頁梅毒血清學(xué)檢測分類(1)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（非特異性梅毒抗體）(2)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（特異性梅毒抗體）兩類方法。問題1：為什么梅毒實(shí)驗(yàn)室診斷需要兩類血清學(xué)檢測方法？第16頁/共74頁梅毒血清學(xué)檢測分類第16頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅速對螺旋體表面的脂質(zhì)作出免疫應(yīng)答，在3周-4周產(chǎn)生抗類脂抗原的抗體（反應(yīng)素）?？贵w主要是IgM和IgG混合抗體。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。經(jīng)正規(guī)治療后，反應(yīng)素可以逐漸減少至轉(zhuǎn)為陰性。問題2：臨床上非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)為什么有定性和定量兩種檢測方法

第17頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體一旦感染人體，宿主迅非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的抗原基本成分都是一樣方法包括：（1）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)

（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）（3）性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)等?；境煞质切牧字蚜字湍懝檀伎乖贵w結(jié)合形成復(fù)合物，凝集成網(wǎng)狀沉淀顆粒被肉眼所見上述方法的敏感性和特異性都基本相似第18頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理所有非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的抗原非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理VDRL試驗(yàn)→USR→RPR/TRUSTVDRL試驗(yàn)抗原組成：0.03%心磷脂0.21%卵磷脂0.90%膽固醇抗原需新鮮配制不能保存待檢血清需滅活目前主要用于腦脊液檢查顯微鏡觀測結(jié)果USR試驗(yàn)是VDRL試驗(yàn)的改良抗原組成：同VDRL，另含（1）乙二胺四醋酸(EDTA)使抗原可長期保存，能維持一年；（2）含有氯化膽堿對血清能起到化學(xué)滅活的作用不必加熱滅活（3）制成試劑盒使用方便第19頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理VDRL試驗(yàn)→USR→RPR/TRRPR試驗(yàn)在USR試劑成分的基礎(chǔ)上加入黑色碳顆粒作為沉淀的指示物用白色的硬紙片替代玻片血清不需要滅活不需要顯微鏡觀測結(jié)果可作定量試驗(yàn)有現(xiàn)成的試劑盒攜帶方便操作簡單價(jià)格便宜非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理TRUST其原理和成分與RPR試驗(yàn)相同用紅色的甲苯胺紅替代了碳顆粒其余的特點(diǎn)均與RPR相同第20頁/共74頁RPR試驗(yàn)非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)原理TRUST第20頁/共7非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理示意圖第21頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理示意圖第21頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀。2、定性試驗(yàn)加樣：吸取血清(漿)放在卡片圈中，并均勻地涂布在整個(gè)圈內(nèi)加抗原：將抗原輕輕搖勻，用9號針頭加1滴抗原反應(yīng)：將卡片置水平旋轉(zhuǎn)儀100±2r/min旋轉(zhuǎn)8分鐘，立即在亮光下觀察結(jié)果3、定量試驗(yàn)稀釋夜準(zhǔn)備：在圈內(nèi)加入50uL生理鹽水（根據(jù)需要確定稀釋度），勿將鹽水涂開。加樣：吸取50uL血清（漿）與各圈中鹽水作系列稀釋，并涂布整個(gè)圈內(nèi)。下同定性試驗(yàn)。第22頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)操作要點(diǎn)1、儀器：水平旋轉(zhuǎn)儀。2、RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷滴度：出現(xiàn)凝集反應(yīng)的血清最高稀釋倍數(shù)。第23頁/共74頁RPRTRUSTVDRL非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷滴非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后3個(gè)月，VDRL試驗(yàn)抗體滴度下降2個(gè)稀釋度，6個(gè)月下降4個(gè)稀釋度。一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為陰性。晚期梅毒治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。第24頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法簡單、快速、敏感性和特異性較好。適用于大量人群的篩查。早期梅毒硬下疳出現(xiàn)1周-2周后，血清可呈陽性。經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。第25頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)方法非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)非梅毒患者的梅毒血清反應(yīng)呈陽性，此現(xiàn)象稱為梅毒血清反應(yīng)假陽性。①技術(shù)性假陽性反應(yīng)由于標(biāo)本的保存不當(dāng)（如細(xì)胞污染或溶血）、試劑質(zhì)量差或過期、或?qū)嶒?yàn)室操作錯(cuò)誤所造成。②生物學(xué)假陽性反應(yīng)是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性

第26頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)非梅毒患者的梅毒血清反應(yīng)呈陽性非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)梅毒假陽性反應(yīng)的處理技術(shù)性假陽性反應(yīng)一般是由于操作錯(cuò)誤引起的假陽性反應(yīng)，經(jīng)過重復(fù)試驗(yàn)即可除外。對生物學(xué)假陽性反應(yīng)，應(yīng)做TPHA（TPPA）等試驗(yàn)進(jìn)行排除。第27頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)梅毒假陽性反應(yīng)的處理第27頁/非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)前帶現(xiàn)象指非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)中，有時(shí)血清中存在高濃度的抗體時(shí)出現(xiàn)的弱陽性、不典型或陰性反應(yīng)的結(jié)果，而臨床上又象二期梅毒，此時(shí)將血清稀釋后再進(jìn)行試驗(yàn)，出現(xiàn)了陽性的結(jié)果，該現(xiàn)象稱為前帶現(xiàn)象。第28頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)前帶現(xiàn)象第28頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)耐血清性（血清固定）指經(jīng)抗梅毒治療后，非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)在一定時(shí)期內(nèi)不陰轉(zhuǎn)。早期的耐血清性常與治療量不足或不規(guī)則治療、復(fù)發(fā)、再感染或有神經(jīng)系統(tǒng)梅毒等因素有關(guān)。第29頁/共74頁非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)特點(diǎn)耐血清性（血清固定）第29頁/梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)第30頁/共74頁梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)第30頁/共74頁梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體特異蛋為抗原，檢測梅毒患者血中特異性抗梅毒螺旋體抗原的抗體。感染梅毒螺旋體后，一旦梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)呈陽性，則患者終身陽性。第31頁/共74頁梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)原理梅毒螺旋體特異蛋為抗原，檢測梅毒梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)

熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）

化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）第32頁/共74頁梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)方法梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TTPPA/TPHA

TPPA試驗(yàn)原理與TPHA試驗(yàn)基本相同。TPPA試驗(yàn)用梅毒螺旋體致敏明膠顆粒替代TPHA試驗(yàn)中致敏羊紅細(xì)胞，此致敏顆粒與人血清中的抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，產(chǎn)生可見的凝集反應(yīng)，具有較高的敏感性。明膠粒子為洋紅色，在操作上也較為方便，出結(jié)果較快。第33頁/共74頁TPPA/TPHATPPA試驗(yàn)原理與TPHA試驗(yàn)基+Sheepredcell+SensitisedcellSensitisedcellSpecificAntibodyHemagglutinationTPPA(TPHA)試驗(yàn)原理示意圖第34頁/共74頁+Sheepredcell+SensitisedcelTPPA試驗(yàn)檢測流程使用前將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘。在96孔U型板上編上相應(yīng)的待檢樣本的編號。按標(biāo)簽標(biāo)明量在凍干的致敏粒子和未致敏粒子分別加入復(fù)溶液復(fù)溶，充分溶解后使用。第35頁/共74頁TPPA試驗(yàn)檢測流程第35頁/共74頁TPPA試驗(yàn)檢測流程定性實(shí)驗(yàn)每份標(biāo)本做4孔，加標(biāo)本稀釋液至U型反應(yīng)板，第1孔100μl，第2～4孔各25μl。用移液器取血清25μl至第1孔，反復(fù)混勻后取25μl至第2孔，連續(xù)倍比稀釋至第4孔，最后1孔混勻后棄去25μl。第3孔加未致敏粒子25μl，第4孔加致敏粒子25μl將微量反應(yīng)板置震蕩器震蕩30秒。置微量反應(yīng)板于有蓋濕盒內(nèi)，室溫（15℃-30℃）靜置2小時(shí)后，觀察結(jié)果。第36頁/共74頁TPPA試驗(yàn)檢測流程定性實(shí)驗(yàn)每份標(biāo)本做4孔，加標(biāo)本稀釋液至UTPPA試驗(yàn)檢測流程結(jié)果報(bào)告:觀察第3孔，不出現(xiàn)凝集為有效試驗(yàn)。陽性：第3孔不出現(xiàn)凝集，第4孔出現(xiàn)1+～4+凝集反應(yīng)。陰性：第3、4孔均不產(chǎn)生凝集反應(yīng)。第37頁/共74頁TPPA試驗(yàn)檢測流程第37頁/共74頁第38頁/共74頁第38頁/共74頁FTA-ABS試驗(yàn)

FTA-ABS試驗(yàn)是檢測梅毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗(yàn)。其原理是將有完整形態(tài)的梅毒螺旋體作為抗原，加上用吸收劑1:5稀釋過的梅毒患者血清形成抗原抗體復(fù)合物，再加入熒光素（FTIC）標(biāo)記的抗人免疫球蛋白，與抗梅毒螺旋體抗體結(jié)合，形成熒光的抗原抗體復(fù)合物。在熒光顯微鏡下，螺旋體顯出蘋果綠色的熒光，即為陽性反應(yīng)。第39頁/共74頁FTA-ABS試驗(yàn)第39頁/共74頁FTA-ABS試驗(yàn)示意圖及結(jié)果第40頁/共74頁FTA-ABS試驗(yàn)示意圖及結(jié)果第40頁/共74頁TP—ELISA試驗(yàn)原理

TP—ELISA試驗(yàn)是用重組梅毒螺旋體抗原包被固相板條，加上梅毒血清和單克隆抗體酶標(biāo)記物，形成抗原抗體復(fù)合物與酶標(biāo)記物結(jié)合，用酶聯(lián)檢測儀判定試驗(yàn)陽性反應(yīng)。本法可用于大規(guī)模血清檢測。第41頁/共74頁TP—ELISA試驗(yàn)原理第41頁/共74頁梅毒免疫層析快速檢測方法第42頁/共74頁梅毒免疫層析快速檢測方法第42頁/共74頁根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略?？蓱?yīng)用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病學(xué)分型。-伸縮其圈間之距離而移動(dòng)篩查、確定現(xiàn)癥梅毒患者；梅毒螺旋體屬第三類病原微生物，一般情況下對人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，是有有效治療和預(yù)防方法的致病微生物衛(wèi)生部于年6月3日下發(fā)了關(guān)于《中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（-年）》策略一：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)（2）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）②生物學(xué)假陽性反應(yīng)是由于患者有其他疾病或生理狀態(tài)發(fā)生變化，使梅毒血清試驗(yàn)出現(xiàn)陽性梅毒螺旋體耐藥基因檢測：目前已知阿奇霉素耐藥基因采用23SribosomalRNA(rRNA)gene等基因序列的引物。未經(jīng)治療的病人，其血清內(nèi)的反應(yīng)素可長期存在。明膠粒子為洋紅色，在操作上也較為方便，出結(jié)果較快。第六章實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床意義經(jīng)治療后血清滴度可下降并陰性，故可作為療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)或再感染的指征。SensitisedcellTP—ELISA試驗(yàn)原理梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床意義

梅毒螺旋體試驗(yàn)的作用是作為證實(shí)試驗(yàn)，它們可以幫助確定非梅毒螺旋體試驗(yàn)陽性反應(yīng)是真陽性還是假陽性。一旦這些試驗(yàn)呈陽性，則患者終身陽性。第43頁/共74頁根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床意義試驗(yàn)特異性強(qiáng)，很少出現(xiàn)假陽性。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在普通人群中，有1%的生物學(xué)假陽性發(fā)生。如系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清可使FTA—ABS試驗(yàn)呈假陽性反應(yīng)。傳染性單核細(xì)胞增多癥，可能由于嗜異性抗體所致，可使TPHA呈假陽性。麻風(fēng)患者也可使特異試驗(yàn)呈陽性。第44頁/共74頁梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)的臨床意義試驗(yàn)特異性強(qiáng)，很少出現(xiàn)假陽性梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗(yàn)。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)試驗(yàn)仍可陽性，故TPPA等試驗(yàn)陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。第45頁/共74頁梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯RPRTPPA

TRUSTTP-ELISA臨床意義VDRLTP-RT

_

_

排除梅毒

（一期梅毒的早期）

+

+

現(xiàn)癥梅毒

(梅毒孕婦所生的嬰兒除外)

+ -生物學(xué)假陽性

-+

早期梅毒經(jīng)治療后

（早早期梅毒）第46頁/共74頁梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯RPR先天梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷方法依據(jù)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)診斷查到螺旋體其抗心磷脂抗體滴度持續(xù)上升其抗心磷脂抗體滴度高于其母親四倍檢測抗梅毒的IgM特異性抗體陽性隨訪18個(gè)月觀察抗體的變化第47頁/共74頁先天梅毒的實(shí)驗(yàn)室診斷方法依據(jù)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)診斷第47頁/共74頁

梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略思考48非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)排除試驗(yàn)生物學(xué)假陽性確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染排除治愈的既往感染者確證梅毒螺旋體現(xiàn)癥感染RPR：初篩試驗(yàn)TPPA：確證試驗(yàn)OrTP-ELISA/CLIA:初篩試驗(yàn)RPR：滴度測定第48頁/共74頁

梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略思考48非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)梅毒螺

梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略思考方法選擇依據(jù)敏感性、特異性（試劑評估）操作流程（可及性）試劑的價(jià)格、結(jié)果時(shí)間（可接受性）49第49頁/共74頁

梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略思考方法選擇依據(jù)49第49頁/共74頁梅毒檢測技術(shù)規(guī)范簡介第50頁/共74頁梅毒檢測技術(shù)規(guī)范簡介第50頁/共74頁全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范51第一章

梅毒檢測樣品的采集和處理第二章

梅毒血清學(xué)檢測

第三章

梅毒病原體顯微鏡檢測

第四章

梅毒病原體核酸檢測

第五章

實(shí)驗(yàn)室生物安全

第六章

梅毒檢測實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理第51頁/共74頁全國梅毒檢測技術(shù)規(guī)范51第一章梅毒檢測樣品的采集和處理第第一章樣品的采集和處理血清、血漿、全血及腦脊液:

梅毒血清學(xué)檢測或核酸檢測皮損部位組織液、淋巴穿刺液:梅毒病原體檢測或核酸檢測。第52頁/共74頁第一章樣品的采集和處理血清、血漿、全血及腦脊液:第52頁第二章梅毒血清學(xué)檢測檢測目的:臨床診斷、血液篩查、流行病學(xué)監(jiān)測以臨床診斷為目的的檢測是為了確定梅毒感染的狀況。以血液篩查為目的的檢測是為了防止梅毒的經(jīng)血傳播。以流行病學(xué)監(jiān)測為目的的檢測是為了調(diào)查梅毒血清學(xué)感染率和發(fā)病率。第53頁/共74頁第二章梅毒血清學(xué)檢測檢測目的:第53頁/共74頁梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略選擇根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略?？刹捎萌魏我活惷范狙鍖W(xué)檢測方法作為篩查試驗(yàn)。第54頁/共74頁梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略選擇第54頁/共74頁55非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)(RPR)

甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）

性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)(VDRL)梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)

梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)

梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)(TPHA)

梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）

梅毒免疫層析法-梅毒快速檢測(RT)

熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS）

化學(xué)發(fā)光免疫分析法（CLIA）

梅毒IgM抗體檢測（IgM）

梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）梅毒血清學(xué)檢測方法策略一采用任何一種非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)對樣品進(jìn)行初篩策略二采用任何一種梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)對樣品進(jìn)行初篩第55頁/共74頁55非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)以臨床診斷為目的的檢測策略一非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（以RPR為例）陰性報(bào)告RPR陰性陽性梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（以TPPA為例）陰性報(bào)告RPR陽性TPPA陰性陽性報(bào)告RPR陽性TPPA陽性RPR定量試驗(yàn)報(bào)告RPR滴度第56頁/共74頁以臨床診斷為目的的檢測策略一非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)陰性以臨床診斷為目的的檢測策略二梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)（以ELISA為例）陰性報(bào)告ELISA陰性陽性報(bào)告ELISA陽性非梅毒螺旋體抗原血清定性/定量試驗(yàn)（以RPR為例）陰性報(bào)告ELISA陽性RPR陰性陽性報(bào)告ELISA陽性RPR滴度第57頁/共74頁以臨床診斷為目的的檢測策略二梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)陰性報(bào)告

策略一和策略二比較58策略一：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)策略二：梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)簡便、經(jīng)濟(jì)簡便、快速、大樣本、經(jīng)濟(jì)早期發(fā)現(xiàn)第58頁/共74頁

策略一和策略二比較58策略一：非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)簡便第三章梅毒體病原學(xué)檢測檢測方法暗視野顯微鏡檢查鍍銀染色檢查第59頁/共74頁第三章梅毒體病原學(xué)檢測檢測方法第59頁/共74頁第四章梅毒核酸檢測可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊液等標(biāo)本的梅毒螺旋體核酸檢測在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷，以及螺旋體現(xiàn)癥感染和既往感染鑒別診斷中具有一定的價(jià)值可應(yīng)用于梅毒螺旋體的耐藥性監(jiān)測、菌株流行病學(xué)分型。第60頁/共74頁第四章梅毒核酸檢測可對血漿、血清、皮損部位組織液、淋巴穿刺第四章梅毒核酸檢測引物的選擇：梅毒螺旋體常規(guī)檢測：一般使用擴(kuò)增bmp、tpp47、polA等基因序列的引物。梅毒螺旋體耐藥基因檢測：目前已知阿奇霉素耐藥基因采用23SribosomalRNA(rRNA)gene等基因序列的引物。梅毒螺旋體基因分型研究：常用arp、tpr等基因序列的引物。第61頁/共74頁第四章梅毒核酸檢測引物的選擇：第61頁/共74頁第五章實(shí)驗(yàn)室生物安全梅毒的生物危害

梅毒螺旋體屬第三類病原微生物，一般情況下對人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，是有有效治療和預(yù)防方法的致病微生物

梅毒相關(guān)檢測的生物安全級別

為了保證安全，對臨床和現(xiàn)場未知樣本的梅毒血清學(xué)檢測應(yīng)在符合Ⅱ級生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。如有艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室，可以在艾滋病抗體檢測實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。第62頁/共74頁第五章實(shí)驗(yàn)室生物安全梅毒的生物危害第62頁/共74頁第六章實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理質(zhì)量控制血清學(xué)室內(nèi)質(zhì)控：非統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制：非梅毒螺旋體試驗(yàn)的RPR和TRUST、以及梅毒螺旋體試驗(yàn)的TPPA、TPHA、TP-RT、TP-WB等均采用肉眼直接閱讀結(jié)果，其室內(nèi)質(zhì)量控制采用非統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行。統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制：TP-ELISA、CLIA法等是通過臨界值（Cut-off）判讀結(jié)果，應(yīng)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)室內(nèi)質(zhì)量控制第63頁/共74頁第六章實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理質(zhì)量控制第63頁/共74頁血清學(xué)非統(tǒng)計(jì)學(xué)方法室內(nèi)質(zhì)控1試劑盒內(nèi)部質(zhì)控品對照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，但不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。2外部質(zhì)控品對照可采用商用質(zhì)控品或自制質(zhì)控品。質(zhì)控品應(yīng)包含陽性和陰性樣品。非梅毒螺旋體試驗(yàn)陽性樣品應(yīng)有抗體滴度（一般為1:8）。除下列情況：更換試劑批號、更換檢測人員、更換試劑廠家等需做質(zhì)量控制外，建議每個(gè)檢測日檢測一次陽性和陰性質(zhì)控品。第64頁/共74頁血清學(xué)非統(tǒng)計(jì)學(xué)方法室內(nèi)質(zhì)控1試劑盒內(nèi)部質(zhì)控品對照第血清學(xué)檢測的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法室內(nèi)質(zhì)控Levey-Jennings質(zhì)控圖“即刻法”質(zhì)控第65頁/共74頁血清學(xué)檢測的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法室內(nèi)質(zhì)控第65頁/共74頁室間質(zhì)控所有梅毒檢測實(shí)驗(yàn)室每年應(yīng)參加一次外部質(zhì)量評價(jià)第66頁/共74頁室間質(zhì)控第66頁/共74頁67謝謝第67頁/共74頁67謝謝第67頁/共74頁主要措施：廣泛開展宣傳教育，普及梅毒防治知識開展綜合防治，阻斷梅毒傳播提高監(jiān)測檢測質(zhì)量，開展主動(dòng)檢測，促進(jìn)梅毒早期發(fā)現(xiàn)提供規(guī)范化梅毒醫(yī)療服務(wù)預(yù)防和控制先天梅毒加強(qiáng)國際合作和應(yīng)用性研究

《中國預(yù)防與控制梅毒規(guī)劃（-年）