冷凝集標(biāo)本對(duì)血細(xì)胞分析結(jié)果的影響及處理方法2020

冷凝集標(biāo)本對(duì)血細(xì)胞分析結(jié)果的影響及處理方法韋理2021年1月13日星期三冷凝集與冷凝集素冷凝集（coldagglutination）是指由自身抗體引起的，紅細(xì)胞在冷環(huán)境中的凝集成團(tuán)的現(xiàn)象。冷凝集反應(yīng)一般出現(xiàn)在31℃以下，在0～4℃時(shí)最強(qiáng)，紅細(xì)胞凝集最明顯；隨溫度的升高，抗原抗體復(fù)合物逐漸解離，凝塊消失。冷凝激素（coldagglutinin）是指冷反應(yīng)型抗紅細(xì)胞抗體，這些自身抗體只能在低溫時(shí)與紅細(xì)胞膜相關(guān)抗原結(jié)合。正常人的血清中都存在低效價(jià)的冷凝集素，參考范圍：效價(jià)＜1：32。冷凝集素的特點(diǎn)通常為IgM型單克隆抗體，繼發(fā)于病毒感染的可有IgG。與紅細(xì)胞膜相關(guān)抗原反應(yīng)溫度需低于31℃，在0～4℃時(shí)明顯增強(qiáng)。當(dāng)抗體滴度高、暴露于冷環(huán)境時(shí)間長(zhǎng)，則可能由于補(bǔ)體參與而造成紅細(xì)胞膜破裂而溶血。冷凝集素產(chǎn)生與冷凝集形成機(jī)制

冷凝集素產(chǎn)生機(jī)制：白血病，惡性淋巴瘤，全身性紅斑狼瘡，特發(fā)性血小板減少性紫癜，肝硬化，血吸蟲病，絲蟲病，瘧疾，非洲錐蟲病，非典型肺炎，傳染性單核細(xì)胞增多癥等，均可出現(xiàn)冷凝集素增高。這些疾病產(chǎn)生冷凝激素的機(jī)制可能各不相同的。其凝集常見于支原體肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥等，一般認(rèn)為，肺炎支原體等病原體感染人體后，能對(duì)人紅細(xì)胞表面唾液酸上的I活性結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾，使其具有免疫原性，機(jī)體針對(duì)這一修飾過(guò)的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生抗體。冷凝集素產(chǎn)生與冷凝集形成機(jī)制

冷凝集形成機(jī)制：紅細(xì)胞膜表面物質(zhì)的構(gòu)型會(huì)隨環(huán)境溫度的變化而發(fā)生改變。在體溫條件下，紅細(xì)胞膜物質(zhì)的構(gòu)型阻礙了冷凝集素與相應(yīng)的抗原決定簇結(jié)合。而在較低溫度時(shí)，紅細(xì)胞膜表面物質(zhì)的構(gòu)型發(fā)生改變，某些抗原決定簇顯露，能與相應(yīng)抗體結(jié)合。這就是冷凝集素只能在低溫時(shí)凝集紅細(xì)胞，，而隨溫度的升高，凝集逐漸解離，消失的原理。冷凝集素臨床評(píng)價(jià)：⑴一般認(rèn)為，病毒和其他微生物感染產(chǎn)生的免疫反應(yīng)的副產(chǎn)物中就有冷凝集素，但常人并不發(fā)生溶血。在慢性淋巴增生疾病、感染和腫瘤潛在發(fā)病的老年人中很可能突破常規(guī)，并出現(xiàn)單克隆抗體的特征(一般為K輕鏈或A輕鏈型)。⑵冷凝集素效價(jià)增高主要見于原發(fā)性冷凝集素綜合征，其效價(jià)可高達(dá)1：1000以上，而輕度增高常見于非特異性炎癥，間質(zhì)性肺炎，自身免疫性疾病，多發(fā)性骨髓瘤，非霍奇金淋巴瘤等。冷凝集與檢驗(yàn)工作冷凝集與血庫(kù)工作：患者血清冷凝集素增高時(shí)，給血型鑒定和交叉配血帶來(lái)困難，這時(shí)應(yīng)對(duì)血清進(jìn)行冷凝集素檢查，排除不規(guī)則抗體和多凝聚紅細(xì)胞，才能確保輸血的安全性和有效性。冷凝集與血細(xì)胞分析：患者血液中冷凝集素增高時(shí)，會(huì)不同程度地影響紅細(xì)胞和白細(xì)胞的分析結(jié)果。如何鑒別冷凝集肉眼直接鑒別：高效價(jià)的凝集可肉眼直接觀察.視頻1

視頻2如何鑒別冷凝集對(duì)于肉眼觀察無(wú)明顯顆粒的冷凝集標(biāo)本，可利用下述規(guī)律：一般正常人Hb/RBC的比值約為30：1，Hb單位為g/L，RBC的單位為1012/L。若Hb/RBC的比值比30大很多，且MCH、MCHC異常升高，則提示有可能是冷凝集現(xiàn)象。

發(fā)生冷凝集后，血常規(guī)各結(jié)果會(huì)發(fā)生怎樣的變化呢？

MCHC（g/dl）=

發(fā)生冷凝集后，血常規(guī)各結(jié)果會(huì)發(fā)生怎樣的變化呢？

數(shù)據(jù)中RBC、HCT極低，RBC與HGB不成比例降低（二者比列約為1:30），且MCH、MCHC明顯升高，血小板數(shù)、白細(xì)胞數(shù)和分類結(jié)果有可能不可靠。MCV=HCT/RBCMCH=Hb/紅細(xì)胞計(jì)數(shù)MCHC=Hb/紅細(xì)胞壓積MCHC（g/dl）=

血紅蛋白/紅細(xì)胞=113/2.47=45.7肉眼并未見到凝集,涂片鏡檢發(fā)現(xiàn)緡錢樣凝集.血紅蛋白/紅細(xì)胞=100/0.66=151.5肉眼觀察血常規(guī)管可看到細(xì)砂樣凝集.肉眼觀察血常規(guī)管可看到塊狀凝集.導(dǎo)致以上變化的原因Sysmex系列儀器，檢測(cè)RBC的原理是鞘流直流電阻抗法，稀釋后的血液樣本從噴頭的前端噴出，被鞘液包著的血細(xì)胞從小孔中央，沿著一定的軌道一個(gè)一個(gè)通過(guò)，而冷凝集的血液樣本，多個(gè)紅細(xì)胞聚集后形成的紅細(xì)胞團(tuán)一起通過(guò)計(jì)數(shù)孔，引起RBC計(jì)數(shù)降低，同時(shí)聚集的細(xì)胞團(tuán)也引起脈沖增大，導(dǎo)致MCV假性升高，但二者又以RBC計(jì)數(shù)減少為主，由此引起HCT也降低，從而造成由RBC、MCV、HCT計(jì)算得出的MCH、MCHC結(jié)果異常增高。冷凝集處理方案方法1：水浴法將室溫調(diào)至25℃以上，標(biāo)本立即放在37℃水浴中，約半小時(shí)后水浴箱內(nèi)混勻，立即以閉蓋模式上機(jī)測(cè)定（一般能糾正輕度和中度冷凝集）。冷凝集處理方案方法2：稀釋法將室溫調(diào)至25℃以上，準(zhǔn)確吸取稀釋液120ul放入EP管中，將EP管與標(biāo)本一同放水37℃溫水浴箱中溫浴，30分鐘后，準(zhǔn)確吸取混勻后樣本20ul加入稀釋液中，充分混勻后，立即用XN-1000的稀釋模式測(cè)定。（推薦方法）冷凝集處理方案方法3：實(shí)驗(yàn)室采集法將室溫調(diào)至25℃以上，將患者叫到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，在血細(xì)胞分析儀旁采集靜脈血（采血前、采血中都用37℃水袋對(duì)血常規(guī)管進(jìn)行保溫），立即上機(jī)測(cè)定(數(shù)秒鐘內(nèi)立即上機(jī)測(cè)定)。前兩種方法都無(wú)法很好糾正時(shí)，建議實(shí)驗(yàn)室采集發(fā)冷凝集處理方案方法4：血漿置換血漿法樣本垂直放置，在管壁標(biāo)記標(biāo)本液面高度，樣本以500g離心力離心5分鐘，用移液器插至上清液與交界面3mm，緩緩將上層血漿取出棄掉，用生理鹽水反復(fù)洗滌3-5次，再加入生理鹽水至標(biāo)記刻度，充分混勻后上機(jī)測(cè)定。（白細(xì)胞和血小板易在洗滌中丟失）冷凝集處理方案方法5：顯微鏡檢查法：在以上方法均未能獲得滿意結(jié)果，回歸傳統(tǒng)的顯微鏡檢查法：將血液標(biāo)本和2.0ml的生理鹽水同置37℃度水浴箱內(nèi)孵育30min，后用加樣器取孵育好的血液10u迅速加入2.0ml的溫鹽水中