蘆薈中蘆薈苷的提取分離

蘆薈中蘆薈苷的提取分離摘要：文章對庫拉索蘆薈(Aloe.barbadensis)中的蘆薈苷有效成分進行提取及分離，獲得蘆薈苷結品，并對其進行定性分析和提取方法探討，比較了現(xiàn)有提取工藝的優(yōu)劣。關鍵詞：庫拉索蘆薈；蘆薈苷；提取分離。Abstract:thearticleonAloeVera(Aloe.barbadensis)ofaloinineffectivecomponentsofextractionandseparation,toobtainthealoeglucosidecrystallization,andcarriesonthequalitativeanalysisandthemethodofextracting,comparisonoftheexistingextractionprocessquality。Keywords:aloe;aloeglucoside;extractionandseparation.1.1蘆薈的藥用價值及意義蘆薈，為百合科多年生肉質草本植物，原產非洲，現(xiàn)在我國廣西、廣東、云南、海南等地均有栽培。蘆薈品種繁多，其中美國翠葉蘆薈，又稱庫拉索蘆薈，是蘆薈家族中最具藥用和美容功效的品種。現(xiàn)代藥理實驗證明蘆薈具有多方面藥理作用，在臨床上的應用也取得了很好的療效，特別是對蘆薈含有的蒽醌類物質、多糖類物質在提高人體免疫力，防治腫瘤、艾滋病等基礎及應用研究中已取得突破性進展，可被認為是一種安全、有效、易用的優(yōu)良天然藥物資源。國內外的一些研究也同樣表明蘆薈中蒽醌類和蘆薈多糖類物質作為蘆薈中的主要成分，的確具有抗胃潰瘍、抗腫瘤、抗衰老、抗病毒、增強免疫功能、護膚美容等功效。1.2蘆薈苷提取分離的研究現(xiàn)狀及展望目前，國內上市的蘆薈系列產品逐漸增多，如飲料、保健品、藥品、美容化妝品等早已走進千家萬戶。蘆薈之所以能夠治療多種疾病，受到醫(yī)學界的高度重視，這與蘆薈的化學成分有關。蘆薈的組成成分十分復雜，到目前為止，被測知的各種化學成分已超過160種。但根據(jù)現(xiàn)代研究表明，蘆薈的主要化學成分可以分為：蒽醌類化合物、糖類、氨基酸和各種有機酸、維生素、酶(多肽)、礦物質。蘆薈苷是蒽醌類化合物中最基本的成分之一。隨著對蘆薈功能研究的日益深入，對蘆薈苷的認識有了進一步的進展，現(xiàn)代醫(yī)學對蘆薈生物活性物質的提取及藥理作用亦有了更深入的了解。研究表明蘆薈在乙醇、氯仿、苯、水的提取物中，乙醇提取物的活性最強，且同種溶劑提取物蘆薈的干燥葉比新鮮葉活性強。從蘆薈葉提取有活性化學物質如蘆薈苷，蘆薈大黃素等的過程分為如下步驟：①提取含可溶性物質的蘆薈原汁；②將蘆薈提取液的pH值調至3?3.5；③向蘆薈原汁中加入水溶性、低脂族極性溶劑，如甲醇、乙醇、丙醇以沉淀有效化學物質，得到多相溶液；④除去多相溶液中的水溶性、低脂族極性溶劑及可溶性物質以分離獲取沉淀狀態(tài)的有活性化學物質：⑤干燥沉淀有活性的化學物質。蘆薈作為一種古老的藥用植物，我們應該把傳統(tǒng)的中醫(yī)理論和蘆薈現(xiàn)代的研究成果結合起來，利用高科技手段，研制高效產品。在美國，從事蘆薈種植、加工、制造、銷售的大公司有10多家，開發(fā)出的蘆薈產品約有1500種，年銷售額達20多億美元。我國雖然在宋代就有蘆薈入藥的記載，但研究與開發(fā)利用遠不及國外。且我國是個消費大國，如果能把蘆薈開發(fā)產業(yè)化，必將帶來巨大的經濟效益。因此，我國應該加快蘆薈藥用新產品、蘆薈保健食品和蘆薈美容化妝品的研究與開發(fā)，以合理利用我國的蘆薈資源，發(fā)展以科學技術為背景的蘆薈加工產業(yè)。本研究通過化學和物理的方法，從鮮蘆薈和蘆薈粉中提取較純的蘆薈苷，對其進行定性分析和研究。通過傳統(tǒng)的方法與總結得來新方法進行比較，討論哪種方法更為有效，可行。通過對不同材料提取的產物進行有效分析比較，總結哪種原材料更為經濟。為蘆薈中類似或其他藥用成分的提取提供參考的依據(jù)。另一方面，通過對蘆薈薄層培養(yǎng)的探索性實驗的研究，使對蘆薈中含有的藥用成分的提取提供更新或更有效的方法。2材料與方法2.1材料庫拉索蘆薈（Aloe.barbadensis）（購于武漢市虎泉花卉市場）蘆薈粉（購于淘寶網(wǎng)，面膜用）2.2儀器及試劑DZ-1A型真空干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）XS-402熒光顯微鏡;WD-9413B凝膠成像分析儀；KQ3200超聲波清洗器；甲醇、乙醇、乙酸乙酯、異丁醇均為分析純。2.3方法蘆薈苷的提取方法一。預處理取庫拉索蘆薈葉片若干，洗凈，切片風干，粉碎，取粉末3g，用5%醋酸酸化，于表面皿中風干，除去多余水分。市售蘆薈粉則直接取3g。將稱取的蘆薈粉末，用三氯甲烷回流提取2h，振搖，趁熱過濾，得濾渣。待慮渣中的三氯甲烷揮十后，將殘渣置于索式提取器其中，用95%乙醇水浴回流提取4h，趁熱過濾，用95%乙醇洗滌3次，所得濾液合并。向濾液中緩慢加入5%氫氧化鉀溶液，同時調節(jié)pH值至9?10，靜置30min后過濾，用95%乙醇洗滌沉淀3次，合并慮液，置真空干燥箱中，以0.8MPa，60?70°C，減壓濃縮全干，得總蒽醌苷的鉀鹽。再加入95%乙醇，使沉淀懸浮于乙醇中，緩慢加入冰醋酸，調節(jié)pH值全中性，水浴加熱，趁熱抽濾，濾液濃縮，濃縮液加醋酸鉛試液，振搖混勻，待沉淀不再繼續(xù)出現(xiàn)，過濾，沉淀以蒸餾水洗滌3次，過濾，所得濾液用1%氫氧化鈉調pH值全中性，重結品，冰浴濾過，所得品體為蘆薈苷。蘆薈苷的提取方法二。取新鮮的蘆薈葉片若干，洗凈。榨取汁液（黃色）200g。市售蘆薈粉則稱取50g粉末，加300ml水溶解，過濾，取濾液（棕色）200g。分別置于1L蒸餾瓶中35C減壓濃縮蒸發(fā)約75%的水分，加入600ml乙酸乙酯萃取3次，萃取溫度保持在55~60C，每次30min。棄去有機相，水相合并后45~55C減壓濃縮，濃縮物為棕黃色固體，蘆薈苷含量約為45%?50%。將濃縮物溶于640ml異丁醇，溫度保持在70C。溶液冷卻至5C析品，持續(xù)4h。布氏漏斗濾出品體，20ml異丁醇洗滌，干燥后即得蘆薈苷。Borntragers反應。分別取從自制蘆薈粉和市售蘆薈粉中提得的蘆薈苷品體以及蘆薈苷對照品，加入10%硫酸溶液5mL，置水浴上加熱2?10min，放冷后，加乙醚2mL振搖，靜置后分別取醚層溶液，加入5%氫氧化鈉水溶液1mL，振搖，比較兩相顏色。硼砂反應。取提取的蘆薈苷粉末0.2g，加純化水20ml，振搖，濾過，取濾液5ml加硼砂0.2g，加熱使溶解，取溶液數(shù)滴，加純化水30ml，搖勻，置紫外光燈（365nm）下觀察。薄層色譜。稱取提取的蘆薈苷粉末0.2g，加甲醇20ml，置水浴上加熱至沸，振搖數(shù)分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取蘆薈苷對照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄HB）試驗，吸取上述兩種溶液各5“1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯一甲醇一水（100:17:13）為展開劑，展開，取出，晾十，噴以10%氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈（365nm）下視檢。3結果分析3.1提取結果對自制蘆薈粉和市售蘆薈粉均用兩種提取分離蘆薈苷。第一種方法由于最終提取的量比較少，重結品，冰浴濾過后得到的少量品體。而第二種方法相對獲得的晶體量較多。自制蘆薈粉所提取的蘆薈苷為片層狀亮棕色品體，而市售蘆薈粉提取物為顆粒狀暗棕色品體，所獲蘆薈苷品體量相當。3.2Borntragers反應通過進行Borntragers反應，并與對照相品比較，兩種方法提取的蘆薈苷晶體的Borntragers反應均呈現(xiàn)醚層由黃色褪為無色，水層顯紅色。3.3硼砂反應兩種材料中提取的蘆薈苷在紫外光燈（365nm）下觀察，均顯綠色熒光。綠色熒光物即為硼砂反應后的蘆薈苷（硼砂反應的載玻片和蓋玻片經過稀鹽酸處理，并浸泡在75%乙醇中?？杀苊馔饨鐭晒馕镔|對實驗的干擾）。自制蘆薈粉和市售蘆薈粉所提取的蘆薈苷硼砂反應均有較為明顯的熒光效應。硼砂反應的綠色熒光物有的呈顆粒狀，有的呈半月型，形態(tài)各異。3.4薄層色譜供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。同時，將市售蘆薈粉和鮮蘆薈的蘆薈苷提取物進行薄層色譜實驗作為初步對比（圖1）。均測得色斑中心全點樣中心的距離為9.3cm，溶劑前沿至點樣中心的距離為11.8cm。由此算得RF值為0.7881。從薄層色譜圖中可以看出，市售蘆薈粉和新鮮蘆薈提取出來的蘆薈苷制作的供試品，均得出了較為明顯的條帶。由資料顯示，蘆薈苷在與顯色劑10%氫氧化鉀甲醇溶液反應后，在紫外光燈（365nm）下顯暗黃色熒光斑點。即最遠端的暗黃色條帶，為蘆薈苷顯示出來的熒光。4結論本研究中，采用兩種不同的方法對鮮蘆薈和市售蘆薈粉進行了蘆薈苷有效成分的提取，通過比較提取物的產量、質量及鑒別實驗結果，分析兩種方法的優(yōu)劣。第一種方法的操作比較復雜。首先，實驗步驟較多，回流和索式提取相對費時費力，各步驟加入的試劑種類也相對較多，在后續(xù)的操作過程中，加入醋酸鉛試液對其他非有效成分進行絡合反應時，容易把重金屬鉛離子帶入到溶液中，造成安全問題。在工業(yè)生產中，凡是有鉛離子帶入的，后續(xù)操作中必須脫鉛。在本實驗中，脫鉛操作需用到H2S氣體，該氣體有劇毒，考慮到脫鉛與否，對提取分離及鑒別實驗并沒大的影響，所以并未采用。其次，通過此法提取的產物，數(shù)量有限，只能在實驗室進行小規(guī)模的提取，用于研究。不適合需求較大的生產。最終得到的蘆薈苷品體，由于數(shù)量有限，只能用于Borntragers反應。但由反應現(xiàn)象可以看出，現(xiàn)象比較明顯，說明最終產物中的蘆薈苷含量還是比較高的。第二種方法操作相對簡便，提取中所帶入的試劑品種也較小。該方法兩次需要進行減壓濃縮，濃縮過程需要耗費較長時間。此方法最主要的優(yōu)點是分離提取出來的量比較多。不過硼砂反應的現(xiàn)象不如Borntragers反應的現(xiàn)象明顯。由此可見，用第二種方法提取出的蘆薈苷，含量較用第一種方法提取出的蘆薈苷少，蘆薈苷較粗。從薄層色譜得出來的圖象分析，帶上的熒光斑點比較多，說明其中含有的雜質成分多且復雜，這些雜質可能為其它蒽醌類、糖類。初步推斷，第一種方法雖然過程復雜，提取量少，但含量較第二種方法提取產物高；第二種方法雖然便于操作，但耗時較長，且產物雜質成分復雜，對后期精致提純要求高。參考文獻：倪同漢.神奇的蘆薈[J].中國野生植物,1989(1):20-25.楊繼遠，袁仲.蘆薈化學成分的保健功效與產品開發(fā)[J].農牧產品開發(fā),2001,(4):6-8.包國榮，陳丹，張東升，等.蘆薈苷的含量測定方法比較研究[J].藥物分析雜志，1997,(5):3