黃芪中氨基酸、異黃酮類成分的特征薄層圖譜研究

黃芪中氨基酸、異黃酮類成分的特征薄層圖譜研究

黃鼠尾是蒙古黃色的一個(gè)蒙古黃鼠尾。作為一個(gè)分生根，它主要含有肥皂、異黃酮、糖和氨基酸。具有補(bǔ)氣升陽(yáng)、固表止汗、托毒排膿、利水消腫、斂瘡生肌之功效。查閱《中國(guó)藥典》2005年版、中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn)、新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)等,發(fā)現(xiàn)涉及黃芪中黃酮類成分的薄層鑒別共7個(gè)標(biāo)準(zhǔn),涉及氨基酸類成分的薄層鑒別共6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。本試驗(yàn)歸納總結(jié)各檢查方法并進(jìn)行試驗(yàn)比較,最終確定特征薄層色譜鑒別方法,為黃芪藥材及含黃芪藥材的成藥鑒別提供試驗(yàn)依據(jù)。1試劑及儀器CAMAGLINOMAT5半自動(dòng)點(diǎn)樣器;CA-MAGREPROSTAR3數(shù)碼成相系統(tǒng);薄層板為硅膠G、GF254(青島海洋化工廠)。黃芪藥材樣品見表1。對(duì)照品精氨酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):110872-200505),丙氨酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):140680-201002),脯氨酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):140677-200405),芒柄花素(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):111703-200602),毛蕊異黃酮-7-O-葡萄糖苷(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào):111920-201001),毛蕊異黃酮(上海同田生物科技有限公司,批號(hào):E-0156),芒柄花素-7-O-葡萄糖苷(上海同田生物科技有限公司,批號(hào):E-0573),試劑均為分析純。2方法和結(jié)果2.1氨基酸化合物2.1.1溶液的制備2.1.1.中藥成方制劑的制備查閱《中國(guó)藥典》2005年版、中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn)及新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)等,涉及黃芪中氨基酸類成分的薄層鑒別方法共6個(gè)標(biāo)準(zhǔn),歸納供試品制備方法如下:方法一(參照中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn):童康片、力加壽片標(biāo)準(zhǔn)):取本品粉末3g,加70%乙醇50mL,水浴回流2h,濾液濃縮至20mL,放冷,加活性炭0.2g,搖勻,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)?0%乙醇1mL使溶解,即得。方法二(參照中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn):產(chǎn)復(fù)康顆粒標(biāo)準(zhǔn)):取本品粉末3g,加水15mL,超聲30min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)?0%乙醇1mL使溶解,即得。2.1.1.2.對(duì)照溶液的制備稱取對(duì)照品精氨酸(3.72mg)、脯氨酸(2.77mg)、丙氨酸(3.7mg),置5mL量瓶,加70%乙醇定容至刻度,即得。2.1.2不同方法展開膠g薄層板上過水照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅣB)試驗(yàn),吸取按方法一與方法二制備的樣品各1.5μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,按以下展開條件分別展開((1)乙醇-濃氨-水(7∶1∶2),(2)正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1),(3)苯酚-水(5∶3)),取出,晾干,噴以0.5%茚三酮,105℃加熱顯色,見圖1。由結(jié)果可知:方法一與方法二處理后的樣品主要斑點(diǎn)無明顯差別,故選擇方法二,簡(jiǎn)便易行;展開劑條件1與2均不能使樣品各斑點(diǎn)得到良好的分離,條件3基本可行。2.1.3薄層板法試驗(yàn)按供試品制備方法二制備1~13號(hào)樣品,照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅣB)試驗(yàn),吸取對(duì)照品5μL、供試品1.5μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以薄層條件3進(jìn)行展開,結(jié)果見圖2。由結(jié)果可知,樣品中均可檢出脯氨酸、丙氨酸及精氨酸,其中由于精氨酸Rf值較低需要液相色譜法進(jìn)一步確認(rèn)。2.2黃酮類化合物2.2.1溶液的制備2.2.1.運(yùn)行用降糖片制備本品溶液查閱《中國(guó)藥典》2005年版、中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn)及新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)等,涉及黃芪中黃酮類成分的薄層鑒別方法共7個(gè)標(biāo)準(zhǔn),歸納供試品制備方法如下:方法一(參照《中國(guó)藥典》2005年版黃芪藥材):取本品粉末2g,加乙醇30mL,加熱回流20min,濾過,濾液蒸干,殘?jiān)?.3%氫氧化鈉溶液15mL使溶解,濾過,濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5~6,用乙酸乙酯15mL振搖提取,分取乙酸乙酯液,用鋪有適量無水硫酸鈉的濾紙濾過,濾液蒸干。殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解,即得。方法二(參照部頒標(biāo)準(zhǔn)丹溪玉屏風(fēng)顆粒):取本品粉末3g,加水150mL,煮沸1h,放冷,濾過,濾液加醋酸乙酯30mL,振搖提取,分取醋酸乙酯液,加無水硫酸鈉適量脫水,濾過,濾液蒸干。殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解,即得。方法三(參照部頒標(biāo)準(zhǔn)降糖甲片):取本品粉末3g,加醋酸乙酯20mL,加熱回流1h,濾過,濾液蒸干。殘?jiān)蛹状?mL使溶解,即得。2.2.1.測(cè)定國(guó)花素、芒果柄花素糖苷、毛常用、無機(jī)溶劑的糖苷3.4%、白充異黃酮3.4%、白廢分子中專屬性分子中專家規(guī)訓(xùn),6.5.5%糖苷、毛常用化合物3.5.5%糖苷、克氏原螯蝦6.5.5.5%糖苷、克氏原螯蝦6.5.5%糖苷3.4.5%、白充填異黃酮3.4.5%糖苷、f、毛常用、活性化合物5.5.5.5%糖苷-4.5%糖苷-4.5%糖苷-4.5.5.5%糖苷-3.5%糖苷-3.5.5%糖苷-3.5%糖苷-3.5.5%糖苷-3.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.5.4.5.5.5.5.5.4.5.5.5.4.5.5.取毛蕊異黃酮葡萄糖苷(2.63mg)、芒柄花素(4.52mg)、芒柄花素葡萄糖苷(2.63mg)、毛蕊異黃酮(3.4mg),置5mL量瓶,加甲醇定容至刻度,即得。2.2.2加樣回收后的熒光測(cè)定照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄ⅣB)試驗(yàn),吸取對(duì)照品5μL、供試品8μL,分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上,按以下展開條件((1)氯仿-甲醇(10∶1),(2)正己烷-乙酸乙酯(6∶4)分別展開,取出,晾干,氨蒸汽熏蒸后于254nm、365nm下檢視熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖3。結(jié)果顯示:供試品制備方法一、二與三處理后的樣品主要斑點(diǎn)無明顯差別,方法三的背景比一、二的略深,但不影響主要斑點(diǎn)的檢視,考慮到方法三簡(jiǎn)單易行,故選此法;展開條件1可檢視的特征斑點(diǎn)較條件2的多,且各斑點(diǎn)Rf值適中,故選擇條件1。2.2.3黃酮類化學(xué)成分檢測(cè)結(jié)果采用上述薄層鑒別方法,對(duì)收集的13批黃芪藥材進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見圖4,由結(jié)果可知,除樣品5、樣品11外均可檢出4個(gè)特征成分,初步證明毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花素、芒柄花素葡萄糖苷可作為黃芪中異黃酮類特征成分進(jìn)行測(cè)定。3不同成分的鑒別查閱《中國(guó)藥典》2005年版、中藥成方制劑標(biāo)準(zhǔn)及新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)等中涉及黃芪中氨基酸、黃酮類成分的薄層鑒別方法,并進(jìn)行歸納總結(jié),結(jié)果詳見表2。黃芪中異黃酮