中醫(yī)動物模型證候屬性的量化分級研究

中醫(yī)動物模型證候屬性的量化分級研究

近年來，西醫(yī)對多個領域進行了定量研究，如神經(jīng)科的通用評分標準偏差，戈斯卡綜合征評分（gcs）、美國國家衛(wèi)生中心的神經(jīng)功能缺陷評分（nihss）、哈mintonchain人口焦慮量表（hasds）、哈明點的自帕斯量表（sds）、自帕斯卡焦慮量表（sa）。評估認知功能和語言功能的一般簡單采樣結果（美國國立衛(wèi)生協(xié)會（nyha）、美國國家衛(wèi)生協(xié)會（美國）、，以及康乃馨協(xié)會（nyha）和康乃馨協(xié)會（abu植物區(qū)本）的功能程度和李爾默斯特勞斯協(xié)會（mese）的功能程度和卡爾拔斯指數(shù)的功能程度。這些量表和分類基準用于評估疾病的嚴重程度，其實用性和科學性已被證實，同時，它為中醫(yī)臨床綜合征的研究和動物模型的評價提供了參考方法和想法。中醫(yī)證候診斷從數(shù)理的角度來看,《黃帝內經(jīng)》、《傷寒論》中普遍包涵了量級概念。如《黃帝內經(jīng)》藥效有大毒、常毒、小毒、無毒之分;脈分浮、沉、大、小、滑、澀、弦、濡,維以微、甚、懸絕3個量級;“氣有多少,病有盛衰,治有緩急,方有大小”之分?！秱摗分泻褂形⒑埂⒑钩?、大汗等之分;寒有微寒、惡寒、大寒之別;證有風寒表實證重、輕、微之分,法宜發(fā)汗峻劑、小發(fā)、微發(fā)其汗,方取麻黃、桂枝麻黃各半、桂枝二麻黃一湯,從量化分級的角度標識了病證之輕重和治方之緩急。中醫(yī)學者也曾試圖通過研制舌診儀、脈診儀、腹診儀、計算機舌象自動識別系統(tǒng)、脈手模型、問診數(shù)學模型等儀器和系統(tǒng)、模型,對診法信息進行定量的描述。但四診信息繁雜,診法研究日趨多元化,與臨床實際應用存在較大差距,在現(xiàn)有條件下難以實現(xiàn)四診信息的客觀化。徐迪華等深化《素問》脈學理論和張仲景《傷寒論》模擬定量(級)方法,將常用四診信息定為輕、中、重3個量級,每級賦以必要的含義,并擬定了望、聞、問、切四診模擬定量(級)的參考標準,為實現(xiàn)中醫(yī)證候客觀化、規(guī)范化提供了行之有效的方法?，F(xiàn)代醫(yī)學的心理量表、神經(jīng)功能缺損評分標準、心功能分級標準等在中醫(yī)病證結合臨床研究中得到了普遍的應用。同時相關學者也相繼借鑒西醫(yī)量化分級與量表的建立方法,引入數(shù)理模型、人工智能、多元統(tǒng)計分析、復雜系統(tǒng)分析,開展了中醫(yī)量化診斷的研究,以期實現(xiàn)證候客觀診斷標準的建立。如舌象量級識別記錄表、動脈硬化閉塞癥(Ⅰ、Ⅱ期)中醫(yī)證候量化診斷標準(包括量化診斷標準和程度分級標準)的建立、腦血管病中醫(yī)辨證量表的編制、全病域中醫(yī)辨證量表的建立等。中醫(yī)證候動物模型20世紀,以腎虛證、脾虛證、血瘀證模型為代表的證的本質研究,未取得突破性進展,延用西醫(yī)方法造模和檢測手段研究尋找特異性和靈敏性指標的思路,結果證實中醫(yī)的證是現(xiàn)代醫(yī)學的多系統(tǒng)和多指標的綜合反應,而試圖用其評價模型成立和指導臨床進行微觀辨證,不可能行得通。修宗昌等提出中醫(yī)證候動物模型是在中醫(yī)學整體觀念及辨證施治思想指導下,運用藏象學說和病因病機制論,把人類病證原型的某些特征在動物身上加以模擬而成。這里突出了中醫(yī)特色的整體觀和辨證論治及中醫(yī)自己的“病理生理學”的指導作用,突破了模仿西醫(yī)造模和評價的思路,體現(xiàn)了中醫(yī)循癥辨證在動物模型身上的體現(xiàn),即模型表現(xiàn)具不具有中醫(yī)證的表形。2005年,田金洲等提出中醫(yī)證候模型研究的“生物表征”理論及應遵循的“因、脈、證、治”的建模思路。指出中醫(yī)證候模型是利用動物的某些生物體表特征來模擬人體證候特征的一類生物表征模型。至此,明確提出了以動物外在表征為著眼點建立和評價證候模型,符合中醫(yī)整體觀和辨證論治的臨床思路。并沿用此思路進行了血瘀證動物模型的評價。扈新剛等依據(jù)動物模型表征理論,初步構建氣虛血瘀大鼠表征體系,探索了大鼠表征研究方法。基于生物表征理論,建立慢性應激肝郁氣營養(yǎng)模型評價量表1.如何觀察動物身上出現(xiàn)的外在表征,如何將動物身上的生物學信息與人四診信息進行轉換,一直為證候動物模型建立和評價的瓶頸。為探討實驗動物四診信息的客觀化,方肇勤等觀測了血瘀證、氣陰兩虛證、陽虛證不同階段荷瘤小鼠后爪顏色和形態(tài)的變化隨病程的進展發(fā)生相應的改變,初步證明了實驗動物有證可辨。并通過對小鼠四診信息非創(chuàng)傷性的采集,初步構建了小鼠四診檢測工作站,包括行為學曠場實驗檢測、爪和尾顯微放大拍攝等各項信息采集單元。屈會化等通過資料系統(tǒng)檢索,初步確定了自發(fā)性高血壓大鼠證候特征觀察指標,包括一般行為、大便狀況、毛發(fā)等宏觀表征和行為學指標,并建立了相應的觀察和測定方法以及操作規(guī)范。2.但如何在采集的大量信息中,采用有效的信息提取方法,如何將所得到的信息進行抽象概括,進而歸屬其證候類型?筆者經(jīng)檢索收集了6篇對動物模型表征進行半定量評分的文章。其中尹軍祥等經(jīng)過分析比較擬定了血瘀證證候模型的舌象變化分級標準和量表,把舌色(腹面色或底色)、舌下脈絡顏色及顯色長短作為評價血瘀證的客觀化表征;李凈等根據(jù)多年觀察,同時把眼球顏色、尾尖至根部有無瘀點、瘀斑納入血瘀證評價指標,自擬血瘀證評分量表。將舌色、舌下脈絡、眼球顏色、尾尖至根部有無瘀點瘀斑生物學表征作為血瘀證證候評價內容,獲得了國內學者的一致認同;并自擬了包括精神狀況、毛發(fā)、大便性狀3個方面的氣虛證辨證量表;袁國強等對李凈等編制的氣虛證模型量表改進,制定了包括精神狀況、皮膚及毛發(fā)、耳尾色澤、糞便性狀4項內容的半定量量表。3.同時相關學者還借鑒臨床量表的建立方法,構建動物證候模型的評價量表。如喬明琦等通過對獼猴各種表情行為進行長期觀察分析,建立《雌性實驗獼猴情緒評價量表》,并對其信度和效度進行了評價,為情志病證獼猴模型的情志評價提供客觀衡量工具。方肇勤等在《辨證論治實驗方法學》中分別介紹了大鼠、小鼠各種診法的信息與采集方法,和辨證論治及計量化療效評價方法,并對常見證候模型氣虛、血虛、陰虛、陽熱、痰瘀邪盛及糖尿病胃熱程度建立了計量化辨證方法并進行了評價,為證候動物模型量化評價提供了一條可行的思路。筆者所在課題組,基于生物表征理論,形成了建立慢性應激肝郁脾虛動物模型評價量表的思路。根據(jù)“應激從中醫(yī)臟象理論分析,當責之于肝”的觀點和“怒傷肝,久則郁”的理論,采用束縛方法(連續(xù)21d)制備慢性應激肝郁脾虛證大鼠模型。初次束縛時,大鼠表現(xiàn)束縛過程中反抗強烈,嘶叫,雙目圓睜,毛須豎立,糞球增多,呼吸加快,拼命撕咬束縛架,掙脫現(xiàn)象嚴重,待解除束縛,大鼠竄叫不安或直立與人對視呈防御姿勢;束縛7d,大鼠動作靈敏、毛發(fā)凌亂、警惕性強,束縛時反抗、嘶叫、掙脫束縛次數(shù)等逐漸減少,解除束縛時,未見竄跳及對峙。束縛制動,限制大鼠活動,使大鼠所欲不遂,激發(fā)郁怒情緒,出現(xiàn)與中醫(yī)肝郁氣滯相類表現(xiàn)。束縛14d,大鼠毛發(fā)散亂直立、活動明顯減少,束縛過程中反抗減弱,甚至未見掙扎及嘶叫,解除束縛后,大多蟄伏于角落,大便可見干濕不調,攝食量減少。肝郁日久,漸及脾土,出現(xiàn)肝郁向肝郁脾虛階段轉化的相類表現(xiàn)。束縛21d時,大鼠表現(xiàn)神態(tài)倦怠、煩躁、毛發(fā)不潔、干澀而黃,目眥不凈,耳廓色淡,吱吱細叫,扎堆或蟄伏在角落、多數(shù)弓背靜臥少動,大便干濕不調(脾虛稀便,氣郁干便),活動量、攝食量明顯減少,體質量增長緩慢,肝郁脾虛表現(xiàn)明顯。結合前期研究,運用荷蘭Noldus公司EthoVision3.0軟件分析系統(tǒng)對束縛模型大鼠在曠場、高架十字迷宮、Y迷宮實驗的自主活動、學習與記憶、焦慮情緒等行為進行了評價。模型束縛大鼠行為學變化和宏觀表征隨病程的進展均發(fā)生相應的改變,說明了在證候模型形成過程中,大鼠的外在表征有證可辨。建立慢性應激肝郁脾虛動物模型評價量表的思路:通過文獻檢索和參考國內肝郁脾虛證候相關資料的診斷標準,建立“慢性束縛應激肝郁脾虛大鼠模型表征數(shù)據(jù)庫”,同時結合本課題組的研究目的和前期研究成果、模型復制特點,經(jīng)過篩選,從外觀表征(除外糞便情況,61個條目)、應激反應(12個條目)、糞便情況(5個條目)結合體質量、攝食量、飲水量、體溫測量(13個條目)4個維度包含91個條目的條目池,形成觀察指標《篩選表》;運用《篩選表》對大鼠進行觀察,并運用統(tǒng)計學方法進行條目篩選,形成了上述4個維度的包括26個條目的《觀察表》;目前,正采用《觀察表》,對模型進行觀察。觀察完成后,運用統(tǒng)計學方法進行分析,通過信度、效度等檢驗,以最終形成量表。以期量表形成