6種固定液短時(shí)間固定對(duì)冰凍切片制片效果影響

6種固定液短時(shí)間固定對(duì)冰凍切片制片效果影響冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。由于其制作過(guò)程較石蠟切片快捷、簡(jiǎn)便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷。但在冰凍切片制過(guò)程中影響制片的質(zhì)量因素較多，從而影響手術(shù)中的快速病理診斷。因此，快速制作一張高質(zhì)量的冰凍切片對(duì)于確保病理診斷極其重要。其中固定是冰凍切片制作中關(guān)鍵步驟之一，對(duì)切片的制片質(zhì)量有著重要的影響。本文通過(guò)6種不同固定液短時(shí)固定對(duì)冰凍切片制片染色的比較，探討不同固定液對(duì)冰凍切片制片效果的影響。1資料與方法1.1材料選自病理科手術(shù)切除的新鮮組織標(biāo)本40例，包括有乳腺、甲狀腺、胃、子宮、卵巢等組織。1.2固定液6種固定液分別為：10%福爾馬林；95%酒精；AF固定液；丙酮：甲醇：乙醚酒精（乙醚：酒精1：1）01.3方法1.3.1取材及切片取材大小為1.5cmx1.5cm，厚2?3mm的新鮮組織，用OCT包埋劑包埋后，放進(jìn)徠卡冰凍切片機(jī)（溫度-18°C?20°C），1?2min后，每例標(biāo)本連續(xù)切片各6張，厚度4?5卩m1.3.2固定及染色切片后立即放進(jìn)上述6種不同的固定液（室溫20?25C）固定6s。將固定過(guò)的切片用蒸餾水洗30s，放進(jìn)改良的GILL蘇木素液（預(yù)先放在65°恒溫水域箱加熱）2min，自來(lái)水洗，1%鹽酸酒精分化液分化10s，溫水（50C）藍(lán)化30s，伊紅染色30s，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。 2結(jié)果切片制作好后，通過(guò)對(duì)6種不同固定液的對(duì)比，在顯微鏡下觀察切片的組織清晰度、細(xì)胞收縮度、細(xì)胞核染色、細(xì)胞漿染色、核漿對(duì)比情況。結(jié)果見(jiàn)表 10表16種不同固定液的對(duì)比固定液組織清晰度細(xì)胞收縮度細(xì)胞核染色細(xì)胞漿染色核漿對(duì)比10%福爾馬林差細(xì)胞腫脹差差差A(yù)F液稍差輕度收縮稍差淡差95%酒精較清晰明顯收縮稍差稍淡稍差丙酮稍差嚴(yán)重收縮稍差不均勻差甲醇較清晰輕度收縮較好較好良好乙醚酒精清晰正常鮮艷鮮艷良好1.3.1取材及切片取材大小為1.5cmX1.5cm,厚3mm的新鮮組織，用OCT包埋劑包埋后，放進(jìn)徠卡恒溫冷凍切片機(jī)（溫度-18°C~20°C）1,2min后，每例標(biāo)本連續(xù)切片各6張，厚度4~5卩m。1.3.2固定及染色切片后立即放進(jìn)上述6種不同的固定液（室溫20~25°C）固定6s。將固定過(guò)的切片用蒸餾水洗30s，放進(jìn)改良的GILL蘇木素液（預(yù)先放在65°恒溫水域箱加熱）2min，自來(lái)水洗,1%鹽酸酒精分化液分化10s，溫水（50°C）藍(lán)化30s，伊紅染色30s，梯度酒精脫水，二甲苯透明,中性樹(shù)膠封片。2結(jié)果切片制作好后，通過(guò)對(duì)6種不同固定液的對(duì)比，在顯微鏡下觀察切片的組織清晰度、細(xì)胞收縮度、細(xì)胞核染色、細(xì)胞漿染色、核漿對(duì)比情況。結(jié)果見(jiàn)表 1。從觀察結(jié)果顯示，在6種固定液固定的冰凍切片中，經(jīng)乙醚酒精固定后的冰凍切片，鏡下組織細(xì)胞形態(tài)清晰，細(xì)胞無(wú)收縮，細(xì)胞核、細(xì)胞漿染色鮮艷，核漿對(duì)比良好。甲醇固定的冰凍切片質(zhì)量次之。95%酒精固定的切片，除細(xì)胞明顯收縮外，組織結(jié)構(gòu)較清晰，細(xì)胞染色尚可。丙酮和AF液固定的冰凍切片，組織結(jié)構(gòu)較清晰度稍差，細(xì)胞漿染色及核漿對(duì)比均差，而且丙酮固定的細(xì)胞收縮較為嚴(yán)重。10%福爾馬林固定的冰凍切片組織清晰度、細(xì)胞核染色、細(xì)胞漿染色及核漿比均差，同時(shí)細(xì)胞腫脹，尤其是細(xì)胞核明顯腫脹、模糊。3討論冰凍切片的目的是在短時(shí)間內(nèi)作出準(zhǔn)確的病理診斷，協(xié)助臨床醫(yī)生確定病變的范圍，決定手術(shù)的范圍，因此，必須盡一切可能爭(zhēng)取時(shí)間，爭(zhēng)取盡快早出切片，并保證質(zhì)量，所以快速制作一張高質(zhì)量的冰凍切片非常重要。中華醫(yī)學(xué)會(huì)規(guī)定完成冰凍 HE染色切片制備時(shí)間通常為20~25min，在冰凍切片制片中，固定液的選擇及固定的時(shí)間長(zhǎng)短是冰凍切片HE染色的一個(gè)關(guān)鍵步驟。用于冰凍組織的固定液種類較多，大多數(shù)固定液需要固定幾分鐘至十幾分鐘時(shí)間，如果只固定數(shù)秒鐘，則大多數(shù)切片固達(dá)不到診斷的要求。由于冰凍切片是由快速切片，快速固定，快速染色這三個(gè)方面相互影響所造成的，其中由于組織固定液因素影響組織細(xì)胞形態(tài)的改變，對(duì)病理醫(yī)生的診斷影響最大，遠(yuǎn)比其他技術(shù)員操作因素引起的組織細(xì)胞形態(tài)改變更難把握。研究表明10%福爾馬林雖然對(duì)組織的穿透力強(qiáng)，固定效果好，但需要固定的時(shí)間長(zhǎng)，而且它不能抵消因冷凍所引起的細(xì)胞內(nèi)液體的腫脹，所以甲醛固定的組織，核發(fā)生腫脹、模糊。從上述6種固定液的比較來(lái)看，如果只進(jìn)行數(shù)秒鐘的短時(shí)固定，10%的福爾馬林和AF液固定的組織，組織清晰度差，細(xì)胞核和細(xì)胞漿著色較淡核漿對(duì)比差。95%酒精固定效果尚可，但細(xì)胞收縮明顯，核漿著色稍差。丙酮固定劑，對(duì)組織穿透性強(qiáng)，但細(xì)胞嚴(yán)重收縮，核漿對(duì)比差。甲醇固定的組織，細(xì)胞輕度收縮性,組織結(jié)構(gòu)清晰，核著色好。但是乙醚酒精固定液的