急性毒性試驗講義ppt模板

動物急性毒性試驗一、概念及意義二、基本原則三、研究內(nèi)容四、數(shù)據(jù)分析及評價目錄五、急性毒性試驗常用試驗方法

動物急性毒性試驗：研究動物一次或24小時內(nèi)多次給予受試物后，一定時間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。急性毒性試驗對闡明藥物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意義。急性毒性試驗所獲得的信息對長期毒性試驗劑量的設(shè)計和某些藥物臨床試驗起始劑量的選擇具有重要參考價值。一、急性毒性試驗的概念及意義二、急性毒性試驗的基本原則1急性毒性試驗設(shè)計遵照化學(xué)藥物急性毒性試驗技術(shù)指導(dǎo)原則進(jìn)行試驗設(shè)計2具體問題具體分析應(yīng)根據(jù)化合物的結(jié)構(gòu)特點、理化性質(zhì)、適應(yīng)癥特點和試驗?zāi)康牡冗x擇合理的試驗方法，設(shè)計適宜的試驗方案，并結(jié)合其它藥理毒理研究信息對試驗結(jié)果進(jìn)行全面的評價3隨機、對照、重復(fù)急性毒性試驗應(yīng)符合一般動物試驗的基本原則，即隨機、對照和重復(fù)三、研究內(nèi)容

1受試藥物

受試藥物：制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試驗用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的樣品。注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等，并附有研制單位的自檢報告。研究內(nèi)容

動物選擇1、種屬大鼠和小鼠毒性反應(yīng)基本相似，但犬科與嚙齒科動物存在很大差別。小鼠致死劑量明顯大于犬類動物，犬和嚙齒類之間的差異在5倍以上。為了獲得更全面的安全性信息，試驗應(yīng)至少采用兩種品系的動物：一種嚙齒類和一種非嚙齒類（常用狗或猴）。急性毒性試驗一般不使用家兔。

大鼠小鼠

研究內(nèi)容

2.數(shù)量：通常使用3-5個劑量組（包括陰性對照組），每組小動物數(shù)量一般大于大動物。嚙齒類每種動物應(yīng)不少于5只，非嚙齒類不少于2只。3.性別：通常采用兩種性別的動物進(jìn)行試驗，雌雄各半。4.年齡：健康成年動物5.體重：動物初始體重不應(yīng)超過或低于平均體重的20%。6.動物應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定的等級要求，來源、品系、遺傳背景清楚，并具有實驗動物質(zhì)量合格證。研究內(nèi)容

給藥途徑

通常，給藥途徑應(yīng)至少包括臨床擬用途徑和一種能使原形藥物較完全進(jìn)入循環(huán)的途徑（如靜脈注射）。如果臨床擬用途徑為靜脈給藥，則僅此一種途徑即可。經(jīng)口給藥，動物一般應(yīng)先進(jìn)行一段時間的禁食（通常一夜，不禁水）。因為胃內(nèi)容物會影響受試物的給藥容量，而嚙齒類動物禁食時間的長短會影響到藥物代謝酶的活性和受試物腸道內(nèi)吸收，從而影響毒性的暴露。研究內(nèi)容給藥劑量水平急性毒性試驗的重點在于觀察動物出現(xiàn)的毒性反應(yīng)。給藥劑量應(yīng)從未見毒性劑量到出現(xiàn)嚴(yán)重毒性(危及生命的)劑量，同時設(shè)空白和/或溶媒（輔料）對照組。觀察時間及指標(biāo)給藥后，一般連續(xù)觀察至少14天，觀察的間隔和頻率應(yīng)適當(dāng)，以便能觀察到毒性反應(yīng)出現(xiàn)的時間及其恢復(fù)時間、動物死亡時間等。研究內(nèi)容觀察的指標(biāo)：包括一般指標(biāo)（如動物外觀、行為、對刺激的反應(yīng)、分泌物、排泄物等）、動物死亡情況（死亡時間、瀕死前反應(yīng)等）、動物體重變化（給藥前、試驗結(jié)束處死動物前各稱重一次，觀察期間可多次稱重）等。記錄所有的死亡情況、出現(xiàn)的癥狀，以及癥狀起始的時間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時間等。研究內(nèi)容病理學(xué)檢查所有的試驗動物均應(yīng)進(jìn)行大體解剖，包括試驗過程中因瀕死而處死的動物、死亡的動物以及試驗結(jié)束時仍存活的動物。任何組織器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時，均應(yīng)記錄并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

四、數(shù)據(jù)分析及評價1根據(jù)所觀察到的各種反應(yīng)出現(xiàn)的時間、嚴(yán)重程度、持續(xù)時間等，分析各種反應(yīng)在不同劑量時的發(fā)生率、嚴(yán)重程度。根據(jù)觀察結(jié)果歸納分析，判斷每種反應(yīng)的劑量－反應(yīng)及時間－反應(yīng)關(guān)系。

數(shù)據(jù)分析及評價2、判斷出現(xiàn)的各種反應(yīng)可能涉及的組織、器官或系統(tǒng)等。

3、根據(jù)大體解剖中肉眼可見的病變和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果，初步判斷可能的毒性靶器官。組織病理學(xué)檢查應(yīng)附有病理學(xué)檢查負(fù)責(zé)人簽名和藥品注冊申請人蓋章的報告及有病變組織的病理照片五、急性毒性試驗常用試驗方法1、近似致死劑量法

該方法主要用于非嚙齒類的動物試驗。

2、最大給藥量法對于某些低毒的受試物可采用該方法。在合理的最大給藥濃度及給藥容量的前提下，以允許的最大劑量單次給藥或24小時內(nèi)多次給藥(劑量一般不超過5g/kg體重)，觀察動物出現(xiàn)的反應(yīng)。一般使用10-20只動物，連續(xù)觀察14天。

急性毒性試驗常用試驗方法3、固定劑量法（Fixed-doseprocedure）

以明顯的毒性體征作為終點進(jìn)行評價。

試驗選擇5、50、500和2000mg/kg四個固定劑量進(jìn)行試驗，特殊情況下可增加5000mg/kg劑量。實驗動物首選大鼠，給藥前禁食6-12小時，給受試物后再禁食3-4小時。采用一次給藥的方式進(jìn)行。

若無有關(guān)資料可作參考時，可用500mg/kg作為初始劑量進(jìn)行預(yù)試，如無毒性反應(yīng)，則用2000mg/kg進(jìn)行預(yù)試，此劑量如無死亡發(fā)生即可結(jié)束預(yù)試。如初始劑量出現(xiàn)嚴(yán)重的毒性反應(yīng)，即降低一個檔次的劑量進(jìn)行預(yù)試，如此時動物存活，就在此兩個固定劑量之間選擇一個中間劑量試驗。每個劑量給一只動物，預(yù)試一般不超過5只動物。每個劑量試驗之間至少應(yīng)間隔24小時。給受試物后的觀察期至少7天，如動物的毒性反應(yīng)到第7天仍然存在，尚應(yīng)繼續(xù)觀察7天。

在上述預(yù)試的基礎(chǔ)上進(jìn)行正式試驗。每個劑量至少用10只動物，雌雄各半。根據(jù)預(yù)試的結(jié)果，在上述四種劑量中選擇一個可能產(chǎn)生明顯毒性但又不引起死亡的劑量進(jìn)行試驗，如預(yù)試結(jié)果表明，5.0mg/kg引起死亡，則降低一個劑量檔次進(jìn)行試驗急性毒性試驗常用試驗方法急性毒性試驗常用試驗方法4、上下法（階梯法，序貫法，Upanddownmethod）

該方法由Dixon和Mood首次提出，1985年Bruce又進(jìn)行了改進(jìn)，目前是OECD（OrganizationforEconomicCo-operationandDevelopment）和EPA（EnvironmentalProtectionAgency）推薦的方法之一。其最大的特點是節(jié)省實驗動物，同時，不但可以進(jìn)行毒性表現(xiàn)的觀察，還可以估算LD50及其可信限，適合于能引起動物快速死亡的藥物。該方法分為限度試驗和主試驗。一、限度試驗：是最多用5只動物進(jìn)行的序列試驗。試驗劑量為2000mg/kg，特殊情況下也可使用5000mg/kg。1）2000mg/kg劑量水平的限度試驗：（動物數(shù)n=5）受試物1只死亡主試驗存活其余4只觀察是否在觀察期死亡1只在試驗后期死亡，其他動物存活，應(yīng)停止對其他動物給藥，對所有動物進(jìn)行觀察，是否在相似觀察期間也發(fā)生死亡。急性毒性試驗常用試驗方法急性毒性試驗常用試驗方法1.有3只或3只以上動物死亡時，LD50小于2000mg/kg；2.有3只或3只以上動物存活時，LD50大于2000mg/kg；3.如果有3只動物死亡，則進(jìn)行主試驗。

后期死亡的動物應(yīng)與