臨床生物化學(xué)檢驗(yàn)：心肌標(biāo)志物測(cè)定

1心肌標(biāo)志物測(cè)定

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心肌細(xì)胞4

目前實(shí)驗(yàn)診斷的項(xiàng)目有兩大類，即與心肌收縮細(xì)胞有關(guān)的：一、心肌酶二、心肌蛋白5實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆眨喝樗崦摎涿福↙DH）、肌酸激酶及同工酶（CK/CKMB）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、肌鈣蛋白（金標(biāo)法）測(cè)定原理；脫氫酶指示系統(tǒng)測(cè)定原理。熟悉：心肌梗死時(shí)各指標(biāo)的變化了解：心肌標(biāo)志物的臨床意義6實(shí)驗(yàn)安排肌鈣蛋白cTnI手工天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶AST乳酸脫氫酶LDH肌酸激酶CK半自動(dòng)肌酸激酶同工酶CK-MB7肌鈣蛋白(cTnI)金標(biāo)法

cTnI檢測(cè)卡利用高特異性的抗原抗體反應(yīng)原理和免疫層析分析技術(shù)來檢測(cè)血清中的cTnI。8

9方法：往樣本孔垂直加入3滴或120μl樣本，在10-20min判讀結(jié)果，20min后判讀結(jié)果無效。

NAD+

NADH

+

H+脫氫酶脫氫酶指示系統(tǒng)：NADP+

NADPH

+

H+NADH/NADPH在340nm處有特異吸收峰，可在340nm處連續(xù)監(jiān)測(cè)NADH/NADPH的生成量/消耗量，根據(jù)線性反應(yīng)期吸光度上升/下降速率（+/-△A/min

），計(jì)算出酶的活性濃度。11天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移（AST）

速率法340nm12試劑：R1NADH、a-酮戊二酸、乳酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶

R2L-天冬氨酸、Tris緩沖液操作步驟：樣本和試劑迅速混勻后，340nm波長，空白管調(diào)零，室溫測(cè)定1、2、3分鐘的吸光度，得到-△A/minR1+R2=R空白管樣本管樣本----0.30ml蒸餾水3.30ml----工作液----3.00ml

K=1740計(jì)算酶國際單位（U）:實(shí)驗(yàn)規(guī)定的條件下（最適溫度，最適PH，最適底物濃度時(shí)），每分鐘催化一個(gè)微摩爾底物變化所需要的酶量。2214乳酸脫氫酶（LDH）

(速率法）

L-乳酸+

NAD+

丙酮酸

+

NADH

+

H+

LDH340nm15試劑：R1NADR2乳酸、氯化鉀、緩沖液操作步驟：R1+R2=R空白管樣本管樣本----0.06ml蒸餾水3.06ml----工作液----3.00ml樣本和試劑迅速混勻后，340nm波長，空白管調(diào)零，室溫測(cè)定1、2、3分鐘的吸光度，得到△A/min

K=41802217肌酸激酶(CK)

酶偶聯(lián)法340nm18試劑：R1己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、ADP、AMP、NAC、

Ap5A、磷酸肌酸、NADPR2

緩沖液、葡萄糖操作步驟：混勻后立即上機(jī)(吸樣量500ml）R1+R2=R空白管樣本管樣本----0.02ml蒸餾水1.0ml----工作液1.0ml19

K=81992220肌酸激酶同工酶(CK-MB)

（免疫抑制法）340nmCK-B21試劑：R1己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、ADP、AMP、NAC、

Ap5A、抑制CK-M抗體、磷酸肌酸、NADPR2

緩沖液、葡萄糖操作步驟：混勻后立即上機(jī)(吸樣量500ml）R1+R2=R空白管樣本管樣本----0.04ml蒸餾水1.0ml----工作液1.0ml22

K=83602223注意事項(xiàng)反應(yīng)準(zhǔn)確計(jì)時(shí)檢測(cè)標(biāo)本最好用新鮮標(biāo)本溶血的影響實(shí)驗(yàn)安排方法試劑ASTLDH手工法手工法10毫升，每組一瓶10毫升，每組一瓶CKCK-MB