毛細(xì)管氣相色譜法測定蛋白粉中乙酸龍腦酯的含量

毛細(xì)管氣相色譜法測定蛋白粉中乙酸龍腦酯的含量

根據(jù)文獻(xiàn)，酒精含量高于主要有效成分，其中醋酸龍腦酯含量高于（53.90%）。根據(jù)《中國藥典》的質(zhì)量監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)，只有特定的發(fā)芽含量：陽春砂和綠殼砂不超過3.0%，海南砂不超過1.0%。而研究表明不同品種、不同產(chǎn)地的砂仁揮發(fā)油中的乙酸龍腦酯含量差異甚大,可見以揮發(fā)油含量的高低來評價(jià)砂仁藥材的質(zhì)量并不準(zhǔn)確,為此,有必要制定砂仁藥材中乙酸龍腦酯的含量標(biāo)準(zhǔn)。目前雖有不少關(guān)于砂仁質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的報(bào)道,但未見用氣相色譜法對不同產(chǎn)地砂仁中的乙酸龍腦酯的含量測定方法的研究報(bào)道。本研究采用氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測定砂仁藥材種子團(tuán)中乙酸龍腦酯的含量,該方法靈敏度高、專屬性強(qiáng)、操作方便。1儀器和試劑盒1.1風(fēng)-電子天平的數(shù)據(jù)處理SHIMADZUGC-14C氣相色譜儀,氫火焰離子化檢測器(FID),CBM-102型數(shù)據(jù)處理機(jī),Chromato-SolutionLight工作站;梅特勒-托利多AG135電子天平;KUDOS超聲清洗儀(功率250W,頻率40kHz);上海分析器械廠800型離心機(jī)(功率25W,轉(zhuǎn)速2000r/min)。1.2試劑甲醇(批號:20071206-2)為分析純,廣州化學(xué)試劑廠。1.3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)乙酸龍腦酯(批號110759-200303),水楊酸甲酯(批號:707-200107),均購于中國藥品生物制品檢定所。1.4測試對象砂仁藥材采購自藥材公司或到產(chǎn)地采購,所有藥材均經(jīng)廣東省湛江市藥品檢驗(yàn)所王其新主任鑒定,見表6。2結(jié)果和方法2.1氫火焰離子化分離器fidSUPELCOWAXTM-10(30m×0.25mm×0.25μm)彈性石英毛細(xì)管色譜柱,氫火焰離子化檢測器(FID),柱溫150℃,進(jìn)樣口溫度220℃;檢測器溫度250℃;分流比20∶1,進(jìn)樣量為2μl。在上述色譜條件,乙酸龍腦酯與內(nèi)標(biāo)物水楊酸甲酯均達(dá)到基線分離,砂仁供試品溶液、乙酸龍腦酯對照品溶液、內(nèi)標(biāo)水楊酸甲酯溶液與空白溶劑的GC圖譜見圖1。2.2溶液的制備2.2.1內(nèi)標(biāo)溶液的制備取水楊酸甲酯適量,加甲醇制成每1ml含3.5mg的溶液,作為內(nèi)標(biāo)溶液。2.2.2溶液的配制取乙酸龍腦酯對照品適量,精密稱定,加甲醇溶液制成每1ml含1mg的溶液。精密量取5ml,置10ml量瓶中,精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml,加甲醇稀釋至刻度,即得。2.2.3超聲法w,w,k-超聲法取砂仁種子團(tuán)粉末(過三號篩,不宜久置)2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40kHz)20min,放冷,稱定重量,用甲醇補(bǔ)足減失的重量,離心(功率25W,轉(zhuǎn)速2000r/min)5min,精密吸取上清液5ml,置10ml量瓶中,精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得。2.3梯度溶液的配制精密量取乙酸龍腦酯對照品溶液(1.9721mg/ml)1、2、3、4、5、6ml,分別置10ml量瓶中,精密加入內(nèi)標(biāo)溶液(0.6938mg/ml)2ml,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,即得每1ml含0.1972、0.3944、0.5916、0.7888、0.9860、1.1832mg的梯度溶液。分別精密吸取2μl,注入氣相色譜儀,按含量測定的方法測定,以乙酸龍腦酯的濃度與水楊酸甲酯的濃度之比作為橫坐標(biāo),測得的乙酸龍腦酯峰面積與水楊酸甲酯峰面積的面積比為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程:y=0.3069x-0.0163,r=0.9999。結(jié)果表明,乙酸龍腦酯對照品濃度在0.1972～1.1832mg/ml之間與乙酸龍腦酯峰面積和水楊酸甲酯峰面積的面積比呈良好的線性關(guān)系。結(jié)果見表1。2.4內(nèi)標(biāo)水楊酸甲酯峰面積比rsd的測定精密吸取“2.2.2”項(xiàng)下制備的對照品溶液2μl,按“2.1”項(xiàng)下方法測定,重復(fù)進(jìn)樣6次,計(jì)算乙酸龍腦酯峰面積和內(nèi)標(biāo)水楊酸甲酯峰面積的面積比,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值(RSD)=0.069%。2.5進(jìn)樣測定條件:“2.2、4、6.8、8h進(jìn)樣測定,5月2月5日進(jìn)樣測定2月5日起試驗(yàn)總有效率2.2取6號砂仁供試品,按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備,按“2.1”項(xiàng)下方法測定,分別在0、2、4、6、8h進(jìn)樣測定。結(jié)果供試品溶液自制備后8h內(nèi)測定基本穩(wěn)定,RSD=0.13%。2.6重復(fù)試驗(yàn)取6號砂仁供試品6份,按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備,按“2.1”項(xiàng)下方法測定。結(jié)果重復(fù)性良好,RSD=0.69%。2.7乙酸龍腦酯回收率測定取同一批已知含量(3號樣品,含量2.847%)的供試品6份,每份取樣量為供試品取量(2g)的50%(即1g),以當(dāng)前取樣含量的1∶1,分別精密加入乙酸龍腦酯對照品溶液(28.501mg/ml)1ml,按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備,按“2.1”項(xiàng)下方法測定,計(jì)算乙酸龍腦酯的回收率。結(jié)果平均回收率為103.22%,RSD=0.026%。結(jié)果見表2。2.8樣品含量的測量取10個(gè)批次的砂仁樣品,按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備,按“2.1”項(xiàng)下方法測定,結(jié)果見表3。3砂性部門的選擇自1963起收載于中國藥典,以后各版藥典對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)都有進(jìn)一步修改和提高,從原來只收載陽春砂仁、縮砂(進(jìn)口)2個(gè)品種,發(fā)展到2005年版《中國藥典》收載陽春砂仁、綠殼砂仁和海南砂仁3個(gè)品種作為砂仁入藥。本次收集樣品時(shí),有從市面醫(yī)藥公司購買的砂仁藥材,也有前往產(chǎn)地采購的,如7號、8號樣品為在廣東陽春春灣采購,9號、10號樣品為前往云南西雙版納勐臘采購所得。采購過程中,因海南本地也無法購得正品海南砂仁,故本次實(shí)驗(yàn)缺海南砂仁樣品數(shù)據(jù)。3.2超聲時(shí)間的確定用超聲法和浸泡過夜法對多份樣品進(jìn)行提取,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在條件相同的情況下,超聲法與浸泡過夜法提取效果無明顯差異,考慮到浸泡過夜法操作耗時(shí)過長,故選擇超聲法。用超聲法提取多份樣品,超聲時(shí)間分別定為15、20、30min,其余照“2.2.3”項(xiàng)下方法操作,結(jié)果表明,3個(gè)提取時(shí)間的結(jié)果無明顯差別,經(jīng)綜合考慮,采用提取20min為宜。取同一批供試品,分別精密加入甲醇25、50、75ml,其余照“2.2.3”項(xiàng)下方法操作。結(jié)果表明,用25ml提取含量較低,用50與75ml提取的結(jié)果無明顯差別,經(jīng)綜合考慮,采用50ml為宜。3.3色譜柱溫的確定按文獻(xiàn),選擇130℃作為柱溫,結(jié)果乙酸龍腦酯分離較差,水楊酸甲酯出峰時(shí)間過長。后將柱溫改為150℃,結(jié)果供試品中乙酸龍腦酯峰達(dá)到基線分離,峰形對稱,分離度為1.8,理論板數(shù)為22635,水楊酸甲酯峰保留時(shí)間適中(約13mim),達(dá)到基線分離,峰形對稱,