實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作

分析方法驗(yàn)證

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作現(xiàn)代驗(yàn)證系列專屬性必須進(jìn)行專屬性研究鑒別試驗(yàn)雜質(zhì)鑒別試驗(yàn)含量分析證明專屬性方法取決于分析方法分析目標(biāo)同義詞特異性,選擇性2專屬性難點(diǎn)證明一個(gè)分析方法對(duì)于特定分析物是專屬的不太可能建議:結(jié)合使用兩個(gè)或多個(gè)分析方法來達(dá)到區(qū)別的必要水平3專屬性方法含被測(cè)物樣品為正反應(yīng)不含被測(cè)物樣品為負(fù)反應(yīng)與被測(cè)物結(jié)構(gòu)相似的或相關(guān)的物質(zhì)負(fù)反應(yīng)要求鑒別試驗(yàn)應(yīng)該能區(qū)別可能存在的結(jié)構(gòu)相似的化合物鑒別項(xiàng)目對(duì)潛在干擾物質(zhì)選擇應(yīng)該依據(jù)科學(xué)判斷全面考慮可能產(chǎn)生的干擾物4專屬性色譜方法,用代表性色譜圖證明專屬性,各單獨(dú)化合物適當(dāng)標(biāo)記通過洗脫的最接近兩個(gè)化合物分離度證明含量分析與雜質(zhì)測(cè)定方法類似含量測(cè)試和雜質(zhì)測(cè)試5專屬性含量分析證明在雜質(zhì)與輔料存在的情況下區(qū)別出被測(cè)物實(shí)際操作中,將一定量的雜質(zhì)和/或輔料加入到純物質(zhì)雜質(zhì)測(cè)定原料藥或制劑中加入一定量的雜質(zhì),證明單獨(dú)分離這些雜質(zhì)同樣樣品基質(zhì)中的其他組分的分離開來進(jìn)行雜質(zhì)是可以得到6專屬性比較包含雜質(zhì)或降解產(chǎn)物樣品測(cè)試結(jié)果和另一個(gè)性能良好的分析方法適當(dāng)?shù)?在相對(duì)激烈條件下:光,熱,濕度,酸/堿,氧化,還原對(duì)于含量分析比較這兩個(gè)結(jié)果對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定比較雜質(zhì)圖形雜質(zhì)不可以得到峰純度測(cè)試:二級(jí)管陣列檢測(cè)器,質(zhì)譜7推薦專屬性測(cè)定方法按照規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)或參考文獻(xiàn)的色譜分析方法分別進(jìn)樣原料藥,中間體,可得到雜質(zhì),原料,中間體,前體,降解產(chǎn)物,制劑的其它組分記錄各物質(zhì)相對(duì)保留時(shí)間確保各樣品之間峰可以分開至少確保其它物質(zhì)峰與主峰分開8線性線性應(yīng)該通過被測(cè)物濃度或含量的信號(hào)圖作出可視檢測(cè)圖來評(píng)價(jià)如果有線性關(guān)系,測(cè)試結(jié)果應(yīng)該通過合適的統(tǒng)計(jì)方法來評(píng)價(jià)應(yīng)該在分析方法的范圍內(nèi)評(píng)價(jià)線性關(guān)系9線性報(bào)告要求相關(guān)系數(shù)y-截距線性回歸斜率剩余平方和建立線性,最少要求5個(gè)濃度點(diǎn)10推薦線性度測(cè)定方法在含量測(cè)定濃度的70%-130%或50%-150%均勻選擇至少六個(gè)不同的濃度點(diǎn)每一個(gè)嘗試至少需測(cè)定四次記錄各對(duì)應(yīng)濃度下的相應(yīng)響應(yīng)值11推薦線性度測(cè)定接受標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)系數(shù)應(yīng)當(dāng)在0.999與1.000之間線性回歸處理截距不應(yīng)明顯地偏離零點(diǎn)12范圍通過證實(shí)分析方法提供的線性,準(zhǔn)確度與精密度可接受度建立范圍測(cè)定線性準(zhǔn)確度和精密度時(shí)所用到的樣品中含被測(cè)物的量應(yīng)在分析方法指定的范圍內(nèi)或是在范圍的極值特定范圍通常來源于線性研究并且取決于分析方法預(yù)定的應(yīng)用13范圍應(yīng)該考慮到以下最小指定范圍：原料藥或是成品制劑含量分析測(cè)試濃度的80~120%含量均一度測(cè)試測(cè)試濃度最小范圍是70~130%溶解度測(cè)試指定范圍+/-20%14范圍如果控釋制劑的規(guī)格覆蓋的范圍是從1小時(shí)后的20%到24小時(shí)的90%標(biāo)簽聲明的有效范圍應(yīng)該為1-110%對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定從雜質(zhì)的報(bào)告水平到規(guī)格的120%對(duì)于有效的或是產(chǎn)生毒性或非預(yù)期的藥效的已知雜質(zhì)檢測(cè)/定量限應(yīng)該與雜質(zhì)應(yīng)該控制的水平相當(dāng)15范圍在研發(fā)期間執(zhí)行的雜質(zhì)測(cè)試方法的驗(yàn)證可能有必要考慮到可能的限度的范圍。如果含量和純度測(cè)試作為一個(gè)試驗(yàn)進(jìn)行,且只有用到一個(gè)100%的標(biāo)準(zhǔn)品線性應(yīng)該覆蓋從雜質(zhì)報(bào)道的水平到含量分析規(guī)格的120%16準(zhǔn)確度分析方法應(yīng)用到已知純度的被測(cè)物中將預(yù)定的分析方法與的結(jié)果與另一個(gè)良好性能的方法的結(jié)果比較可以從已經(jīng)建立的精密度,線性和專屬性中推斷準(zhǔn)確度應(yīng)該在分析方法指定范圍內(nèi)建立準(zhǔn)確度含量分析:原料藥17準(zhǔn)確度按用于分析的已知藥物制劑的量來藥物制劑的各個(gè)組分進(jìn)行混合在不能獲得藥物制劑的所有組分的情況下,或者向藥物制劑中加入已知量的被測(cè)物與另一個(gè)良好性能方法所得到的結(jié)果進(jìn)行比較可以從已經(jīng)建立精密度,線性和專屬性項(xiàng)中推導(dǎo)準(zhǔn)確度含量分析:藥物制劑18準(zhǔn)確度用已知量的雜質(zhì)加入到樣品中在不能獲得某種雜質(zhì)和/或降解產(chǎn)物的樣品的情況下,可以考慮將用單獨(dú)方法獲得的結(jié)果進(jìn)行比較含量分析:雜質(zhì)(定量)19準(zhǔn)確度具體要求指定范圍內(nèi)最少9個(gè)測(cè)定點(diǎn)最少3個(gè)濃度水平準(zhǔn)確度應(yīng)該進(jìn)行報(bào)道作為測(cè)定樣品中被測(cè)物的已知加入量百分比回收率作為平均值與可接受真值的差異和置性區(qū)間推薦數(shù)據(jù)20推薦準(zhǔn)確度測(cè)定接受標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定得到的主品的百分回收率與理論回收率100%間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得大于方法重復(fù)性相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的4倍21AOAC濃度與回收率關(guān)系濃度(%)比率單位平均回收率(%)1001100%98-102

1010-110%98-102

110-21%97-103

0.110-30.1%95-1050.0110-4100ppm90-1070.00110-510ppm80-1100.000110-61ppm80-1100.0000110-7100ppb80-1100.00000110-810ppb60-1150.000000110-91ppb40-12022精密度最少9個(gè)測(cè)試指覆蓋分析方法的指定范圍(例如,3個(gè)濃度/每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)樣品)最少6個(gè)測(cè)定值,濃度在100%的測(cè)定濃度要求含量測(cè)定和雜質(zhì)定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證包括精密度研究重復(fù)性23精密度建立分析方法精密度上任意事件的影響典型變異包括不同分析天,分析者,儀器,等沒有必要單獨(dú)考慮這些因素提倡使用實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(矩陣)中間精密度建立中間精密度程度取決于方法所要應(yīng)用的環(huán)境24精密度通過之間實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)的方式來評(píng)價(jià)的重現(xiàn)性應(yīng)該考慮在分析方法標(biāo)準(zhǔn)化的情況下這些數(shù)據(jù)不是市場(chǎng)授權(quán)檔案的一部分重現(xiàn)性25精密度報(bào)告每種精密度標(biāo)準(zhǔn)偏差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(變異系數(shù))置信區(qū)間推薦數(shù)據(jù)26容易混淆的精密度中術(shù)語儀器重復(fù)性相同人員,儀器,日期,標(biāo)準(zhǔn)液方法重復(fù)性相同人員,儀器,日期,重新配制標(biāo)準(zhǔn)液中間精密度不同日期,不同分析人員,不同儀器27系統(tǒng)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一均勻標(biāo)準(zhǔn)樣品溶液連續(xù)重復(fù)測(cè)定六次記錄每次測(cè)定各組分響應(yīng)計(jì)算各響應(yīng)值與平均值之間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差28方法重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)均勻樣品按照分析方法規(guī)定至少稱量出六份按含量測(cè)定方法測(cè)定每一份樣品含量計(jì)算每一次測(cè)定