酶和糖類藥物

酶類藥物1、酶類藥物的原料選擇（1）不同酶的原料選擇。（2）注意不同生長發(fā)育情況及營養(yǎng)狀況：微生物制酶，需測其活力來決定取酶階段。（3）原料來源是否豐富；（4）簡化提純步驟。（5）如用動(dòng)物組織作原料，則此動(dòng)物宰殺后應(yīng)立即取材。從動(dòng)物或植物中提取酶受到原料的限制。2、酶的提取方法（1）水溶液法，常用稀鹽緩沖液。為防酶活力降低，低溫操作。（2）有機(jī)溶劑法（3）表面活性劑法3、酶制劑的工業(yè)提取法（酶的兩種劑型液體制劑和粉劑）（1）發(fā)酵液的預(yù)處理及過濾（2）酶液的脫色（3）鹽析法（4）有機(jī)溶劑法（4）噴霧干燥直接制各粉末酶制劑4、 酶去雜質(zhì)的方法（1）pH和加熱沉淀法蛋白質(zhì)酸堿變性，調(diào)pH和等電點(diǎn)除去雜蛋白，不同蛋白質(zhì)對熱穩(wěn)定差異，使雜蛋白變性沉淀。（2）蛋白質(zhì)表面變性法蛋白質(zhì)表面變性性質(zhì)差別，也可除去雜蛋白。（3）選擇性變性法蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的不同，除雜蛋白。（4）核酸沉淀劑法用微生物制備酶，含有較多核酸，可用核酸酶將核酸降解成核苷酸。（5）將酶與底物結(jié)合，酶和底物結(jié)合或與競爭性抑制劑結(jié)合后，穩(wěn)定性提高，可用加熱法除去雜蛋白。5、 酶結(jié)晶的方法①鹽析法適當(dāng)?shù)膒H、溫度下，保持酶穩(wěn)定，慢慢改變鹽濃度進(jìn)行結(jié)晶。②有機(jī)溶劑法。酶液中加有機(jī)溶劑，使酶形成結(jié)晶。易引起酶失活。③復(fù)合結(jié)晶法。酶與有機(jī)化合物或金屬離子形成復(fù)合物或鹽。④透析平衡法。對鹽溶液或有機(jī)溶劑進(jìn)行透析平衡，酶液可緩慢地達(dá)到過飽和析出結(jié)晶。⑤等電點(diǎn)法。蛋白質(zhì)酶在等電點(diǎn)附近酶的溶解度很小。6、 影響酶結(jié)晶的因素①酶的純度。純度越高，越易結(jié)晶，越易長成大單晶。②酶的濃度。結(jié)晶母液通應(yīng)保持盡可能高的濃度。③溫度。結(jié)晶的溫度通常在4°C下或室溫25°C下，低溫下酶溶解度低，且不易變性。④時(shí)間。結(jié)晶形成的時(shí)間不同⑤pH。pH—般選擇在被結(jié)晶酶的等電點(diǎn)附近。⑥金屬離子。許多金屬離子能引起或有助于酶的結(jié)晶，二價(jià)金屬離子存在可促進(jìn)酶結(jié)晶長大⑦晶種。不易結(jié)晶的蛋白質(zhì)和酶，需加入微量的晶種才能結(jié)晶。⑧結(jié)晶器皿處理。結(jié)晶用的器皿要充分清洗、烘干。使用前用結(jié)晶母液再?zèng)_洗一次。7、 酶分離和純化工作中的注意事項(xiàng)（1） 防止酶蛋白變性避免pH過高或過低和高溫。一般中性pH和低溫（4°C左右）。防止酶蛋白的表面變性，不可劇烈攪拌，產(chǎn)生泡沫。避免酶和重金屬或其他蛋白變性劑接觸。（2） 防止輔因子的流失有些酶除酶蛋白外，還含輔因子。超濾、透析時(shí)，要防止輔因子流失。（3）防止酶被蛋白水解酶降解在提取液尤其微生物培養(yǎng)液中，常存在一些蛋白水解酶，要及時(shí)將它們除去。糖類藥物1、 多糖的藥理活性（1） 抗腫瘤和免疫促進(jìn)活性對免疫功能具有的調(diào)節(jié)作用，從多個(gè)層次多個(gè)途徑激活機(jī)體免疫系統(tǒng)。對各種免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)，對細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)以及對補(bǔ)體的調(diào)節(jié)。（2） 抗病毒活性多糖類結(jié)構(gòu)上與細(xì)胞表面糖胺聚糖類似，競爭抑制病毒與細(xì)胞結(jié)合，是許多細(xì)胞表面分子的模擬配體，直接與細(xì)胞結(jié)合，阻礙病毒的吸附。（3）抗凝血活性（4） 抗氧化活性提高抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化，從而保護(hù)生物膜。（5） 抗感染作用多糖可提高機(jī)體組織細(xì)胞對細(xì)菌、原蟲、病毒和真菌感染的抵抗力。（6） 降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化作用類肝素、硫酸軟骨素、小分子量肝素等具有降血脂、降血膽固醇、抗動(dòng)脈粥樣硬化作用，用于防治冠心病和動(dòng)脈硬化。（7）抗輻射、抗突變2、 多糖的純化

（1）乙醇沉淀法乙醇的加入，改變了溶液的極性，導(dǎo)致糖溶解度下降。向溶液中加入一定濃度的鹽，有助于使黏多糖從溶液中析出。（2）分級沉淀法不同多糖在不同濃度的甲醇、乙醇或丙酮中的溶解度不同，可用不同濃度的有機(jī)溶劑分級沉淀分子量大小不同的黏多糖。（3）季銨鹽絡(luò)合法黏多糖與陽離子表面活性劑能形成季銨鹽絡(luò)合物。這些絡(luò)合物在低離子強(qiáng)度的水溶液中不溶解，在離子強(qiáng)度大時(shí)，這種絡(luò)合物可以解離、溶解、釋放。（4）離子交換層析法黏多糖由于具有酸性基團(tuán)如糖醛酸和各種硫酸基，在溶液中以聚陰離子形式存在，可用陰離子交換劑進(jìn)行交換吸附。（5）凝膠過濾法凝膠過濾法可根據(jù)多糖分子量大小不同進(jìn)行分離。區(qū)帶電泳法、超濾法及金屬絡(luò)合法等在多糖的分離純化中也常采用。3、溶液中多糖濃度的測定（1）蒽酮－硫酸比色法測定糖含量糖類遇濃硫酸脫水生成糠醛或其衍生物，與蒽酮試劑產(chǎn)生顏色反應(yīng)，反應(yīng)后溶液呈藍(lán)綠色，于620nm處有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關(guān)系。（2） 3，5—二硝基水楊酸（DNS）比色法測還原糖堿性溶液中DNS與還原糖共熱被還原成棕紅色氨基化合物，一定范圍還原糖量與反應(yīng)液顏色強(qiáng)度呈比例關(guān)系，比色法可測含糖量。（3） 苯酚硫酸比色法苯酚一硫酸試劑可與多糖中的己糖、糖醛酸起顯色反應(yīng)，在490nm處有最大吸收，吸收值與糖含量呈線性關(guān)系。（4） 葡萄糖氧化酶法測定葡萄糖葡萄糖氧化酶氧化0—葡萄糖成葡萄糖酸和H2O2，利用過氧化物酶催化過氧化氫氧化某些物質(zhì)如鄰甲氧苯胺使其從無色轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩?，比色法?jì)算葡萄糖含量。（5） Nelson法還原糖將銅試劑還原生成氧化亞銅，在濃硫酸存在下與砷鉬酸生成藍(lán)色溶液，在560nm下的吸收值與糖含量呈線性關(guān)系。4、純度檢查（1）常壓凝膠層析法據(jù)凝膠柱上不同分子量的多糖與洗脫體積成一定關(guān)系的特性進(jìn)行的。（2）高效凝膠滲透色譜法HPLC法具有快速、高分辨率和重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。（3） 比旋度法不同的多糖具有不同的比旋度，在不同濃度的乙醇中具有不同溶解度。（4） 超離心法如多糖在離心力場作用下形成單一區(qū)帶，說明多糖微粒沉降速度相同，表明其分子的密度、大小和形狀相似。牛纓臟ob亍君浸取液 沉淀物皚250卞廠「糜囊白酶原'’: 〔鹽析〔溶解〕亠胰蛋白酶原沉淀物PH3〔活化〕 〔除鈣〕叫瞬愛白酶 噸，（眄皿PH7.5,72h借化液PH3,48h溶解液謬誓透析號旦胰蛋白酶成品工藝過桎濾液噸，詈）2亠胰蛋白酶原沉淀物PH3〔活化〕 〔除鈣〕叫瞬愛白酶 噸，（眄皿PH7.5,72h借化液PH3,48h溶解液謬誓透析號旦胰蛋白酶成品工藝過桎〔鹽析〕 _—濾液y沉淀物爾鑿駕學(xué)竺（沉淀） （酸化） （吸附） （洗癒）男性尿23空上清尿密竺寧酸化尿空遲硅藻土吸附物牛（洗脫） （去熱原a去色素）硅藻土柱“2隔氨水加。.氯洗脫液 壯：》流出邈c淞電 醋輕豔鈉 葉薩沛$芒臥審?fù)袨o（凍干）舟口話廠CM_C柱氨水+氯化鈉phh—iE洗脫液―透析?！善?/p>

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