冰凍切片步驟很全面之歐陽(yáng)理創(chuàng)編

歐陽(yáng)陽(yáng)理創(chuàng)編 歐陽(yáng)陽(yáng)理創(chuàng)編 2021.03.04歐陽(yáng)陽(yáng)理創(chuàng)編 歐陽(yáng)陽(yáng)理創(chuàng)編 2021.03.04冰潦切片是指瘠殂枳在濟(jì)潦狀態(tài)下直接用切片機(jī)切片。它實(shí)陸上是必水拓包惟劑，瘠狙枳進(jìn)行冰療至墜硬后切片的。在冰療切片帶狙枳耒徑過(guò)儀何化巻翡晶處理或餉藝過(guò)程，丈丈拓題了制片時(shí)間。同時(shí)，由弓此號(hào)耒需要徑過(guò)脫水、透明和沒蠟著步驟，因而輟適合于脂肪、種經(jīng)殂枳和一宙狙枳化修的制片，弄作簽快速切片的方診疝用在疇凍診斷。時(shí)間：2021.03.05創(chuàng)作：歐陽(yáng)理1.取材：盜盡可憐快地采取新鮮的材抖，防止鈕袒歿望死后吏建療:尙了軼朝地保為徹腕內(nèi)的髒活徃或盡快制啟切片標(biāo)冷的需要，-＜A取材后就宴立刻對(duì)組織塊進(jìn)行建潦，＜值枳鍛度嫌棒，拓極粋溫的時(shí)間，減歹冰晶的形啟。液氮速潦切片法是實(shí)驗(yàn)室眾纟用的速潦切片方注。具俸做該是將組袒塊年敎于怨塑撅蓋或特制小盒內(nèi)(直往狗2cm兒的組袒塊小可適蜃加OCT包悝劃沒沒組絹，銘后瘠特制小盒後後年敘入盛韋液氮的小糅內(nèi)，由僉蔻部接觸液氮時(shí)即卄胎九化碎勝，此時(shí)小盒保持原儘初勿沒入潅氮屮，犬箝10?20s組袒即迅速冰轉(zhuǎn)啟塊。在劇啟潦塊后，即可置入惟濟(jì)箱切片機(jī)冰潦切片?？嘈枰?wèi)，溢快速”【鋁箔或塑抖售膜去包，立即置入?80°C冰箱舷爲(wèi)備用。因定./稈品托上涂一眉OCT包悝胺，瘠速冰鈕織置孑曳上，4°C冰箱預(yù)冷5?1Omin讓OCT胺沒逵組織。取下值怨置于錫箔或者披片上，蚪品托速潦。值枳置孑瞬品托上，曳上再濟(jì)一層OCT腹，＜4憲全覆蓋簽宜，速潦架(PE)上30min。切片：惟泯冰淙切片機(jī)卷軼理想的冰潦切片機(jī)，其疙滓穡枸是將切片機(jī)逍扌個(gè)溫鑽聞室內(nèi)，故初片時(shí)耒爰外界泯度和琢境彩詢，可直鮫切售片至5?10屮II。初片時(shí)，低泯室內(nèi)a<^-15°C??20°C伶宜，泯應(yīng)過(guò)低組袒易融碎，抗寒祓的儘置及簾及要適占，裁玻片附貼値枳創(chuàng)片，切勿上下移鋤。切朝室泯敘置30min后，入4°C內(nèi)蹣固定.5?lOmin,烘箱彳爆20minoPBS況5minx3o進(jìn)行抗原孩修條，<說(shuō)藝修衣也可，室溫自磁濟(jì)抑?？捎?%H2O2Mt5?lOmin,消除內(nèi)陳槌過(guò)氣化物髒的活槌。5.免痰熒蕪集色；冰潦切片室泯眺吟15min,可用會(huì)10%正纟山羊血請(qǐng)的PBS室泯農(nóng)閉初片1小時(shí)（此步可耒詵J謫加適占比例稀轉(zhuǎn)的一抗或一抗工作液（抗俸的蜃視值枳丈小而応，屎則是可必射自覆蓋組袒面，且保證超個(gè)過(guò)程屮耒會(huì)使值枳個(gè)涸），焙切片敎慮加了PBS的免痰怨化濕盒，室浪籀資2小時(shí)或4°C過(guò)走。緒二夭屯焙濕盒敎到37°C回浪lh,磁后呱取片止的一抗進(jìn)行②收，將切片插入到小染杠PBS沖洗。"用PBS稀轉(zhuǎn)虧的二杭（魅兒J逍子今&涂姿箱屮37°CMt1小時(shí)?；厥斩?，切片置于染杠內(nèi)，PBS況5minx3決。謫加DAPI工作滋染核，室浪10-20min（工作濃及0.1%染色15min）o②收DAPI,謫加5?10卩1杭熒蕪袤減去片刑或屮槌樹胺，用處理彳冷的蓋玻片農(nóng)片，即可到熒