高效液相色譜儀測定發(fā)酵液中的氨基酸含量

高效液相色譜儀測定氨基酸的含量1L--色氨酸含量的測定實(shí)驗(yàn)儀器與試劑色氨酸樣品，甲醇，高效液相色譜儀，0.03%KH2PO4溶液1.2HPLC色譜分析條件流動相為0.03%KH2PO4溶液（A）-甲醇（B），線性梯度淋洗，流速1.0mL/min，柱溫35℃，檢測波長276nm。流動相時間（t/min）5101520A（%）80908070B（%）20102030標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取色氨酸標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品50mg，置100ml容量瓶中，振搖，用流動相溶解到刻度，作為供試品溶液，另取色氨酸樣品適量，同法操作。標(biāo)準(zhǔn)直線的制作精密稱取色氨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品適量,分別稀釋制成每1ml中含色氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg的溶液，注入液相色譜儀，以色氨酸峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，制作回歸標(biāo)準(zhǔn)直線。發(fā)酵液中樣品中色氨酸含量的測定取發(fā)酵液，稀釋配制成約500μg/ml的溶液，搖勻，過濾，取25μl進(jìn)樣，在高效液相色譜儀下測量，記錄峰值面積，作圖。L-精氨酸含量的測定實(shí)驗(yàn)儀器與試劑L-精氨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品，乙腈，高效液相色譜儀，磷酸二氫銨。PH計(jì)，磷酸，HPLC色譜分析條件流動相:以磷酸二氫銨溶液(稱取磷酸二氫銨1.15g,加水800m溶解后,用磷酸調(diào)節(jié)pH值至2.0±0.1,加水稀釋至1000ml)-乙腈為流動相，線性梯度淋洗;柱溫為30℃檢測波長為206nm；進(jìn)樣量：25μl。標(biāo)準(zhǔn)直線的制作精密稱取精氨酸標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品50mg，置100ml容量瓶中，振搖，用流動相溶解到刻度，作為供試品溶液，另取色氨酸樣品適量，同法操作。精密稱取精氨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品適量,分別稀釋制成每1ml中含精氨酸50.0、100.0、200.0、400.0、600.0、800.0、1000.0μg的溶液，注入液相色譜儀，以精氨酸峰面積A為縱坐標(biāo)，濃度C為橫坐標(biāo)，制作回歸標(biāo)準(zhǔn)直線。發(fā)酵液中樣品中精氨酸含量的測定取發(fā)酵液，稀釋配制成約500μg/ml的溶液，搖勻，過濾，取25μl進(jìn)樣，在高效液相色譜儀下測量，記錄峰值面積，作圖。L-甘氨酸含量的測定實(shí)驗(yàn)儀器和試劑乙酸銨溶液；乙腈；L-甘氨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品；高效液相色譜儀。ＨＰＬＣ色譜分析條件流動相:A為0.02%mol/L乙酸銨溶液（PH=6.5）:B為乙腈，線性梯度淋洗；流速:110mL/min；柱溫:30℃；進(jìn)樣量:２0μL。梯度洗脫表3流動相時間（t/min）102030405060A（%）806040406080B（%）204060604020標(biāo)準(zhǔn)直線的制作方法同2.2節(jié)發(fā)酵液中樣品中甘氨酸含量的測定方法同2.5節(jié)L-甲硫氨酸含量的測定4.1實(shí)驗(yàn)儀器和試劑L-甲硫氨酸標(biāo)準(zhǔn)樣品；甲醇；醋酸鈉；高效液相色譜儀。HPLC色譜分析條件流動相:A為甲醇,B為50mmol/L的醋酸鈉緩沖溶液;流速1.0mL/min;梯度洗脫見表1，測定波長為262nm，柱溫為30℃。梯度洗脫表4流動相時間（t/min）102030405060A（%）30508085100100B（%）7050201500標(biāo)準(zhǔn)直線的制作方法同2.2節(jié)發(fā)酵液中樣品中甲硫氨酸含量的測定方法同2.5節(jié)回收率實(shí)驗(yàn)稱