免疫定性項(xiàng)目性能驗(yàn)證

臨床免疫定性檢測(cè)

的性能驗(yàn)證高速列車(chē)性能驗(yàn)證空氣動(dòng)力學(xué)速度車(chē)體轉(zhuǎn)向架運(yùn)行固定、懸掛的零部件強(qiáng)度穩(wěn)定性舒適感故障率……第3頁(yè)測(cè)定系統(tǒng)方法學(xué)操作程序校準(zhǔn)品儀器試劑測(cè)定系統(tǒng)的關(guān)鍵要素醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)為什么需要“性能驗(yàn)證”？評(píng)價(jià)檢測(cè)系統(tǒng)是否滿足臨床檢測(cè)和認(rèn)可組織的要求（ISO15189）；驗(yàn)證廠家提供的試劑參數(shù)能否在本實(shí)驗(yàn)室得到重現(xiàn)。什么時(shí)候進(jìn)行性能驗(yàn)證使用新的檢測(cè)試劑或系統(tǒng)時(shí)；更換檢測(cè)試劑或系統(tǒng)時(shí)。更換新的試劑或系統(tǒng)意義：更易于操作更高的檢測(cè)性能更經(jīng)濟(jì)更能滿足實(shí)驗(yàn)室測(cè)定要求

一.

定性臨床應(yīng)用與分類(lèi)1、定性測(cè)定的臨床應(yīng)用

免疫學(xué)測(cè)定：感染性疾病、腫瘤標(biāo)志物

核酸和基因檢測(cè)

微生物檢驗(yàn)

細(xì)胞學(xué)檢驗(yàn)

寄生蟲(chóng)檢驗(yàn)2、定性實(shí)驗(yàn)的臨床分類(lèi)篩查實(shí)驗(yàn)：如便潛血、TP診斷實(shí)驗(yàn)：如微生物學(xué)培養(yǎng)與細(xì)菌鑒定確認(rèn)實(shí)驗(yàn)：對(duì)以上已做出的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證和確認(rèn)3.幾個(gè)重要概念

篩查試驗(yàn)：臨床上篩查方法通常用于檢測(cè)整個(gè)人群（或者人群中的特定部分）中特定指標(biāo)的情況。例如對(duì)需輸血患者樣本做HIV血清學(xué)試驗(yàn)。

一般來(lái)說(shuō)，這些用于篩查的定性試驗(yàn)必須具有高敏感性以確保真陽(yáng)性結(jié)果的檢出。如果篩查試驗(yàn)的假陽(yáng)性結(jié)果所造成的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)后果不是非常嚴(yán)重，這種低特異性可通過(guò)特異性較好的確認(rèn)試驗(yàn)加以彌補(bǔ)。CLSI

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Guideline3.幾個(gè)重要概念診斷試驗(yàn)：通常用于臨床懷疑某種特定疾病或狀況是否存在的診斷性定性試驗(yàn)。例如各種微生物培養(yǎng)就是用于檢查感染情況的診斷試驗(yàn)。

臨床上對(duì)治療的要求，診斷試驗(yàn)應(yīng)具有很好的敏感性和特異性。如果診斷試驗(yàn)后還進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，那么診斷試驗(yàn)的特異性要求可以稍微降低。CLSI

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Guideline3.幾個(gè)重要概念確認(rèn)試驗(yàn)：確認(rèn)試驗(yàn)用于驗(yàn)證篩查試驗(yàn)或者診斷試驗(yàn)結(jié)果。如果確診試驗(yàn)證實(shí)了之前的檢測(cè)結(jié)果，臨床醫(yī)生即可作出診斷。確認(rèn)試驗(yàn)通過(guò)設(shè)計(jì)使其具有較高的特異性（有時(shí)甚至以犧牲敏感性為代價(jià)）以及高陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。免疫印跡試驗(yàn)就是一種用于HIV血清學(xué)試驗(yàn)等篩查試驗(yàn)之后的確認(rèn)試驗(yàn)。

3.幾個(gè)重要概念敏感性或陽(yáng)性測(cè)定能力指數(shù)（DI（＋））：可定義為一實(shí)驗(yàn)對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本測(cè)定后給出陽(yáng)性結(jié)果的能力。DI（＋）=[真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）]×100%特異性或陰性測(cè)定能力指數(shù)（DI（－））：則為對(duì)陰性樣本測(cè)定給出陰性結(jié)果的能力DI（－）=[真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）]×100%

3.幾個(gè)重要概念陽(yáng)性預(yù)示值：即測(cè)定為陽(yáng)性的標(biāo)本實(shí)際上為陽(yáng)性的可能性。

=[真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陽(yáng)性）]×100%陰性預(yù)示值:則為一份給出陰性結(jié)果的樣本實(shí)際上為陰性的可靠性。

=[真陰性/（真陰性+假陰性）]×100%臨床診斷（金標(biāo)準(zhǔn)）總計(jì)陽(yáng)性陰性驗(yàn)證方法陽(yáng)性ABA+B陰性CDC+D總計(jì)A+CB+DN敏感度=100%×[A/（A+C）]特異性=100%×[D/（B+D）]相關(guān)樣本的患病率=100%×[（A+C）/N]陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（PVP）=100%×[A/（A+B）]陰性預(yù)測(cè)值（PVN）=100%×[D/（C+D）]方法效率（正確率）=100%×[（A+D）/N]“預(yù)示值”對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果影響預(yù)示值對(duì)一個(gè)有95%敏感性和95%特異性的試劑檢測(cè)結(jié)果的影響（100,000人）

結(jié)果10%感染率1%感染率

檢出(+)未檢出(－)

檢出(+)未檢出(－)+9,50050095050

－4,50085,5004,95094,050敏感性(TP/[TP+FN])95%95%特異性(TN/[TN+FP])95%95%陽(yáng)性預(yù)示值TP/[TP+FP]9500/[9500+4500]=67.9%950/[950+4950]=16%陰性預(yù)示值TN/[TN+FN]85500/[85500+500]=99.4%94050/[94050+50]=99.9%二.定性檢測(cè)系統(tǒng)的性能驗(yàn)證

驗(yàn)證的內(nèi)容:1.正確度（準(zhǔn)確度）2.精密度3.敏感性4.特異性5.CUTOFF值驗(yàn)證6.其他（需要時(shí)）EP15A2EP17AEP12ClinicalLaboratoryandStandardsInstitute(CLSI)

涉及免疫定性檢測(cè)評(píng)價(jià)方法標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室精密度和準(zhǔn)確度的確認(rèn)檢出限與定量限的評(píng)價(jià)定性檢測(cè)評(píng)價(jià)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)性能驗(yàn)證前的準(zhǔn)備應(yīng)熟悉待驗(yàn)證的試劑或系統(tǒng)進(jìn)行必要的培訓(xùn)，包括樣本的處理和儲(chǔ)存、試劑的處理和儲(chǔ)存、合理的檢測(cè)方案、對(duì)結(jié)果合理的解釋以及系統(tǒng)的質(zhì)量控制等。制定質(zhì)量保證計(jì)劃確定患者樣本的數(shù)量及強(qiáng)弱（評(píng)價(jià)重復(fù)性）確定比較的方法CLSI

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Guideline性能驗(yàn)證的合格標(biāo)準(zhǔn)從何而來(lái)？試劑盒說(shuō)明書(shū)國(guó)際和／或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)性能驗(yàn)證前樣本的準(zhǔn)備質(zhì)控品：使用商品化質(zhì)控物進(jìn)行，包括陰性和陽(yáng)性。樣本的采集和保存：采集時(shí)間、保存方式等必須保證一致性。CLSI

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Guideline方法比較用樣本數(shù)量取決于評(píng)價(jià)者的目的。作為最低要求，檢測(cè)要持續(xù)到至少用比較方法獲得50個(gè)陽(yáng)性樣本。并且至少用比較方法獲得50例陰性樣本以確定此種檢測(cè)方法的特異性。CLSI

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1.準(zhǔn)確度驗(yàn)證1）檢測(cè)已知值的參考物質(zhì)室間質(zhì)評(píng)材料(衛(wèi)生部或者CAP)廠商提供的已賦值的參考材料分析用參考方法或決定方法定值的材料。2）方法比較試驗(yàn)：樣本數(shù)為10-20個(gè)，兩種方法同時(shí)測(cè)定同樣的樣品，用KAPPA檢驗(yàn)方法分析兩種方法檢測(cè)結(jié)果一致性.(比如HBV酶免法和發(fā)光法比對(duì))選取40份（20份）樣本,最好陰陽(yáng)性各半↓隨機(jī)盲法重新分號(hào)↓檢測(cè)樣本↓將所有檢測(cè)結(jié)果匯總填表↓計(jì)算評(píng)價(jià)性能指標(biāo)2.精密度驗(yàn)證1）批內(nèi)精密度:同一份樣本在同一批次內(nèi)平行重復(fù)檢測(cè)10次.然后計(jì)算均值,SD和CV.2）批間精密度:同一份樣本連續(xù)檢測(cè)10天,每天平行檢測(cè)雙孔.然后計(jì)算均值,SD和CV.

Note:用S/CO比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)計(jì)算.

最好選擇臨界值,或弱陽(yáng)性樣本.判斷標(biāo)準(zhǔn):批內(nèi)CV小于15%,批間CV小于25%.批內(nèi)重復(fù)性的驗(yàn)證高、中、低三個(gè)濃度的樣本，在一批檢測(cè)內(nèi)，重復(fù)檢測(cè)20次（孔），計(jì)算所得S/CO值的均值和SD，計(jì)算批內(nèi)CV%。判斷結(jié)論：應(yīng)≤試劑說(shuō)明書(shū)所標(biāo)明的批內(nèi)變異。ELISA的批內(nèi)變異CV%應(yīng)≤10%。批間重復(fù)性的驗(yàn)證高、中、低三個(gè)濃度的樣本，在10天以上時(shí)間內(nèi)單次（孔或管）重復(fù)進(jìn)行20批檢測(cè)，計(jì)算所得S/CO值的均值和SD，計(jì)算批間CV%。判斷結(jié)論：應(yīng)≤試劑說(shuō)明書(shū)所標(biāo)明的批間變異。ELISA的批間變異CV%應(yīng)≤15%。

3.敏感性1）驗(yàn)證方法:取10-20份已知真陽(yáng)性的樣本，用常規(guī)檢測(cè)方法檢測(cè)，計(jì)算檢測(cè)陽(yáng)性的樣本占樣本總數(shù)的比例。

2）樣本來(lái)源:臨床診斷的陽(yáng)性病人血清；廠家提供的陽(yáng)性對(duì)照；決定性參考方法檢測(cè)陽(yáng)性的樣本；以上陽(yáng)性樣本來(lái)源緊張時(shí)，可以進(jìn)行稀釋?zhuān)ㄈ?：3，3：4這樣稀釋?zhuān)?/p>

4.特異性1）驗(yàn)證方法：選取20份正常健康人血清（一般取自健康體檢者），計(jì)算其檢測(cè)陰性結(jié)果所占百分率。

2）樣本來(lái)源:體檢樣本,體檢者確認(rèn)符合要求后即可.NOTE:部分項(xiàng)目在健康體檢人群中陽(yáng)性率也很高,此類(lèi)項(xiàng)目特異性驗(yàn)證很難執(zhí)行,建議引用廠家說(shuō)明書(shū).

比如麻疹病毒IgG,CP-IgG,MP-IgG等一系列病毒抗體IgG.因?yàn)楹茈y確認(rèn)體檢者既往是否有過(guò)感染史,而IgG抗體在體內(nèi)存留時(shí)間長(zhǎng).因此很難收集到真正意義上的陰性樣本.特異性驗(yàn)證（干擾）特定病原體以外感染性疾病患者的樣本。含有干擾性物質(zhì)的樣本：類(lèi)風(fēng)濕因子（RF）陽(yáng)性、含異嗜性抗體、溶血、脂血、高膽紅素樣本。結(jié)果判斷：非特定病原體感染患者樣本均應(yīng)為陰性。含一定濃度干擾物質(zhì)的樣本檢測(cè)應(yīng)為陰性。5.CUT-OFF重復(fù)性和測(cè)定下限驗(yàn)證CUT-OFF重復(fù)性驗(yàn)證：樣本濃度應(yīng)接近臨界值。不宜用陰性或強(qiáng)陽(yáng)性樣本。批內(nèi)和批間變異驗(yàn)證：高、中和低三個(gè)濃度（與試劑盒說(shuō)明書(shū)中所述相適應(yīng)）臨界點(diǎn)的定義同樣一份樣本，在多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)中各有50%的幾率獲得陽(yáng)性或陰性的結(jié)果時(shí)該分析物的濃度。CLSI

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Guideline臨界點(diǎn)（CUT-OFF)與試劑盒判斷值（CUT-OFF值）的區(qū)別這里的臨界點(diǎn)指的是一個(gè)處于試劑檢測(cè)臨界點(diǎn)的樣本濃度，其一旦確定，是不變的。試劑盒CUT-OFF值指的是一個(gè)判斷某一次測(cè)定結(jié)果的由陰性和陽(yáng)性對(duì)照信號(hào)值按一定公式計(jì)算出來(lái)的信號(hào)值，每次測(cè)定都會(huì)有所差異。(1)CUT-OFF重復(fù)性驗(yàn)證CUT-OFF的重復(fù)性（同時(shí)包含測(cè)定下限的驗(yàn)證）批內(nèi)變異的驗(yàn)證批間變異的驗(yàn)證驗(yàn)證步驟制備足夠40次重復(fù)檢測(cè)的3份樣本：分別為處于臨界濃度、高于臨界濃度20%和低于臨界濃度20%的樣本。重復(fù)檢測(cè)樣本40次，確定每一份樣本結(jié)果為陽(yáng)性和陰性的百分比。評(píng)價(jià)臨界濃度是否準(zhǔn)確？評(píng)價(jià)+20至-20%的濃度范圍是否包含于、位于或者超出這種方法的95%區(qū)間？CLSI

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GuidelineC50是否準(zhǔn)確？40次測(cè)試C501陽(yáng)性結(jié)果=<13/40(32.5%)不正確>=27/40(67.5%)2陽(yáng)性結(jié)果（14-26）/40（35%-65%）正確陽(yáng)性結(jié)果重復(fù)性檢測(cè)總次數(shù)次數(shù)百分比真正百分比樣本的實(shí)際濃度201050%30%-70%C30-C70402050%35%-65%1005050%40%-60%不同C50重復(fù)檢測(cè)次數(shù)與檢出

陽(yáng)性數(shù)的關(guān)系臨界點(diǎn)（CUT-OFF）的重復(fù)性指的是什么？是為正在評(píng)價(jià)的檢測(cè)試劑或系統(tǒng)建立分析物的臨界濃度(C50)，并且確保臨界濃度±20%的范圍處于95%區(qū)間內(nèi)。CLSI

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Guideline如何獲得系統(tǒng)或試劑的“臨界點(diǎn)”檢測(cè)試劑或系統(tǒng)的說(shuō)明書(shū)可能會(huì)注明分析物的臨界濃度。如果臨界濃度未知，則可以將陽(yáng)性樣本進(jìn)行一系列稀釋?zhuān)缓髮⑺麄冞M(jìn)行重復(fù)檢測(cè)以確定能夠獲得50%陽(yáng)性和50%陰性結(jié)果的那個(gè)稀釋度。這一稀釋度的分析物濃度即為臨界點(diǎn)。CLSI

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