半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)技術(shù)

半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)技術(shù)目錄抗原與半抗原偶聯(lián)蛋白人工抗原合成的方法影響人工抗原質(zhì)量的因素人工抗原的質(zhì)量評定抗原與半抗原抗原抗原

——能與淋巴細(xì)胞抗原受體（TCR/BCR）特異性結(jié)合，刺激機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并與相應(yīng)免疫應(yīng)答產(chǎn)物（指抗體或致敏淋巴細(xì)胞）在體內(nèi)、外發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)?？乖姆诸愄烊豢乖纾杭?xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲等。人工抗原如：人工結(jié)合抗原、人工合成抗原、基因工程抗原常見的天然抗原-細(xì)菌鏈球菌痢疾桿菌霍亂弧菌傷寒桿菌常見的天然抗原-病毒狂犬病病毒腺病毒口蹄疫病毒流感病毒常見的其他天然抗原真菌白色念珠菌

(1,000Xoil)

瘧原蟲常見的其他天然抗原

異種動物血清異嗜性抗原血型抗原主要組織相容性抗原腫瘤抗原超抗原人工抗原

人工結(jié)合抗原

——將無免疫原性的簡單化學(xué)基團與蛋白質(zhì)載體偶聯(lián)，或?qū)o免疫原性的有機分子與蛋白質(zhì)載體結(jié)合，形成載體-半抗原結(jié)合物，均屬人工結(jié)合抗原。

人工抗原

人工合成抗原

——用化學(xué)方法將活化氨基酸聚合，使之成為合成多肽。（應(yīng)用這種人工合成多肽可研究氨基酸種類、序列與蛋白質(zhì)抗原性及免疫原性的關(guān)系。）

人工抗原基因工程抗原——通過基因重組、再表達(dá)制備的抗原物質(zhì)。如：目的基因（編碼抗原）+載體（質(zhì)粒等）

重組DNA

細(xì)胞（真核或原核）

表達(dá)

純化

基因工程疫苗抗原的性質(zhì)1.免疫原性：抗原刺激機體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，誘生相應(yīng)抗體和效應(yīng)淋巴細(xì)胞的能力。2.抗原性:

抗原可在體內(nèi)、外與相應(yīng)的抗體/效應(yīng)淋巴細(xì)胞發(fā)生特異性結(jié)合，產(chǎn)生免疫應(yīng)答的特性?？乖ò凑彰庖咴约懊庖叻磻?yīng)性）分類1、完全抗原:既有免疫原性又有抗原性的物質(zhì)，如多數(shù)蛋白質(zhì)分子。2、半抗原:又稱不完全抗原，單獨存在時只具有抗原性而無免疫原性的物質(zhì)，如二硝基酚、青霉素。完全抗原半抗原與載體結(jié)合后可使其具有免疫原性。半抗原+載體完全抗原半抗原

+載體抗體BT完全抗原BBBT常見的偶聯(lián)蛋白常見的偶聯(lián)蛋白常用來作為合成人工抗原的載體蛋白質(zhì)有：牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OA)、鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)

人工合成的多聚賴氨酸(PLL)等。

常見的偶聯(lián)蛋白牛血清白蛋白（BSA）包含583個氨基酸殘基，分子量為66.43kDa，等電點為4.7。

BSA結(jié)構(gòu)常見的偶聯(lián)蛋白卵清蛋ovalbvmin

是一種糖蛋白。含有微量的磷。是卵清中蛋白質(zhì)的主要成分，約占65％。雞的卵清蛋白分子量約45kDa。a.牛血清白蛋白b.磷酸酪氨酸血清白蛋白c.卵清蛋白d.磷酸酪氨酸卵清蛋白常見的偶聯(lián)蛋白鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)由于KLH質(zhì)量大，復(fù)雜性高，與其他載體蛋白相比KLH會引起更強的免疫應(yīng)答。來源于軟體動物，它在系統(tǒng)發(fā)生上遠(yuǎn)離哺乳動物物種，在測定過程中產(chǎn)生會與典型靶點樣品發(fā)生交叉反應(yīng)的抗體的可能性較小。常見的偶聯(lián)蛋白

人血清白蛋白（簡稱HSA），是人血漿中的蛋白質(zhì)，其非糖基化的單鏈多肽包含585個氨基酸，分子量為66kD。在血漿中其濃度為42g/L，約占血漿總蛋白的60%。常見的偶聯(lián)蛋白ε-多聚賴氨酸是目前天然防腐劑中具有優(yōu)良防腐性能的微生物類食品防腐劑。它是由25～30賴氨酸殘基聚合而成，具有強烈的抑菌能力，可以作為防腐劑用于食品的保鮮。

偶聯(lián)蛋白的性質(zhì)

載體表面應(yīng)首先應(yīng)具有化學(xué)活性基團，這些基團可以直接與抗生素或農(nóng)藥分子偶聯(lián)，這是化學(xué)偶聯(lián)制備抗原的前提；其次，載體應(yīng)具備一定的容量，可以偶聯(lián)足夠的分子；載體還應(yīng)該是惰性的，不應(yīng)干擾偶聯(lián)分子的功能；而且載體應(yīng)具有足夠的穩(wěn)定性，且應(yīng)該是廉價易得的。人工抗原合成方法人工抗原合成方法

小分子半抗原與載體蛋白偶聯(lián)效果會受到偶聯(lián)物的濃度及其相對比例、偶聯(lián)劑的有效濃度及其相對量、緩沖液成分及其純度和離子強度、pH以及半抗原的穩(wěn)定性、可溶性和理化特性等因素的影響。一般是由半抗原上的活性基團決定偶聯(lián)合成的方法。半抗原上的活性基團人工抗原合成方法1、分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶聯(lián)A、混合酸酐法。B、碳化二亞胺法。C、N-羥琥珀酰亞胺酯法

混合酸酐法交聯(lián)原理混合酸酐法交聯(lián)原理碳化二亞胺法交聯(lián)原理碳化二亞胺法交聯(lián)原理碳化二亞胺法交聯(lián)原理人工抗原合成方法2、含有氨基或可還原硝基半抗原的偶聯(lián)1）戊二醛法：雙功能試劑戊二醛的兩個醛基分別與半抗原和蛋白質(zhì)上的氨基形成schiff鍵(-N=C<，在半抗原和蛋白質(zhì)間引入一個5碳橋。這一反應(yīng)條件溫和，可在4～4