菌種的保藏和使用-凍干菌株的活化（食品微生物檢驗(yàn)課件）

食品微生物與檢驗(yàn)菌株活化技術(shù)a標(biāo)準(zhǔn)菌株：至少定義到屬或種水平的菌株，按菌株特性進(jìn)行分類和描述，官方菌種保藏機(jī)構(gòu)獲得，最好來(lái)源于食品或水。b標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株：將實(shí)驗(yàn)室獲得或供應(yīng)商提供的標(biāo)準(zhǔn)菌株轉(zhuǎn)接一代后得到的一套完全相同的獨(dú)立菌株。儲(chǔ)備菌株：從標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株轉(zhuǎn)接第一代的培養(yǎng)物。cd工作菌株：由標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株或儲(chǔ)備菌株轉(zhuǎn)接一代獲得的菌株。一、菌株概述美國(guó)菌種保藏中心AmericanTypeCultureCollectionCenter，ATCC中國(guó)普通微生物菌株保藏中心ChinaGeneralMicrobiologicalCultureCollectionCenter，CGMCC工業(yè)微生物菌種保藏管理中心ChinaCenterforIndustrialCultureCollection，CICC中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏中心ChinaCenterforMedicalCultureCollection，CMCC標(biāo)準(zhǔn)或質(zhì)控菌株主要來(lái)源一、菌株概述ATCC19606ATCC菌株（進(jìn)口）CMCC1.1923CMCC菌株（國(guó)產(chǎn)）一、菌株概述菌種代數(shù)：將活的菌株接種到新鮮培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，并希望獲取新的微生物培養(yǎng)物。這種操作方式，新培養(yǎng)物對(duì)接種培養(yǎng)物而言就稱為一代。注：GB/T27405-2008規(guī)定，工作菌株≤5代二、菌株活化步驟二、菌株活化步驟二、菌株活化步驟ATCC菌株活化步驟二、菌株活化步驟從凹口處撕開產(chǎn)品包裝撕掉標(biāo)簽上的拉片，將其貼于初級(jí)培養(yǎng)平板或QC記錄上捏管帽處安瓿瓶中部（僅一次），使其釋放水合液體垂直捏住試管并輕拍之，使液體流入含小球的管底通過(guò)擠捏壓碎小球，使其與液體混合立即將拭子浸于水合懸液中LOREMIPSUMDOLORSITAMET注：ATCC菌株要嚴(yán)格按照說(shuō)明書上“操作流程”，“推薦生長(zhǎng)條件”，“推薦培養(yǎng)方法”活化標(biāo)準(zhǔn)菌株。否則不能保證菌株質(zhì)量。二、菌株活化步驟擠壓并旋轉(zhuǎn)拭子，接種于初級(jí)培養(yǎng)平板，接種圈的直徑約25mm用一無(wú)菌接種環(huán)在先前接種區(qū)域劃線10-20次，促使其分離出單菌落立即培養(yǎng)接種好的初級(jí)培養(yǎng)平板采用合適的生物危害處理法丟棄KWIK-STIKTM斜面平板菌液用無(wú)菌吸管吸取0.3-0.4mL適宜的液體培養(yǎng)基，滴入菌種管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解成懸浮液。取約0.2mL菌懸液，轉(zhuǎn)種于特定瓊脂培養(yǎng)基斜面或平板上，剩余的菌液注入特定的液體培養(yǎng)基（3-4mL內(nèi)），然后再按照菌種特性，在一定溫度下培養(yǎng)。二、菌株活化步驟國(guó)產(chǎn)菌株活化步驟普通細(xì)菌：營(yíng)養(yǎng)肉湯NB(CM106)胰蛋白胨大豆肉湯TSB(CM301)腦心浸液培養(yǎng)基BHI(CM917)胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯TSB-YE(CM501)真菌：真菌培養(yǎng)基(CM802)乳酸菌：MRS肉湯(CM187)嗜鹽性弧菌：含3%NaCl的TSB(CM301+2.5%NaCl)注：ATCC菌株請(qǐng)按說(shuō)明書附錄“推薦培養(yǎng)基”使用。三、菌株活化培養(yǎng)基1.液體普通細(xì)菌：營(yíng)養(yǎng)瓊脂NA(CM107)胰蛋白胨大豆瓊脂TSA(CM168)腦心浸液瓊脂BHIA(CM918)胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂TSA-YE(CM502)真菌：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(CM123)乳酸菌：MRS瓊脂MRSA(CM188)嗜鹽性弧