鹽酸小堿與環(huán)孢素a合用對(duì)小鼠肝微粒體cyp450、erd、adm和gs的影響

鹽酸小堿與環(huán)孢素a合用對(duì)小鼠肝微粒體cyp450、erd、adm和gs的影響

小黃堿（berberin）具有抗微生物、抗心力衰竭、抗高血壓、降血糖和抗高血壓作用。環(huán)孢素A(cyclosporine,CsA)是器官移植受者普遍應(yīng)用的免疫抑制劑之一,我們?cè)谂R床工作中首次發(fā)現(xiàn),合并應(yīng)用鹽酸小檗堿(berberinehydrochloride,BBH)可使CsA的血濃度顯著提高。為了闡明BBH和CsA相互作用的機(jī)制,我們研究了BBH和CsA對(duì)小鼠肝臟細(xì)胞色素P450酶(cytochromeP450,CYP450)系的影響。1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及藥物1.1藥品與試劑:BBH為上海天平制藥廠產(chǎn)品,批號(hào)990801;CsA為華北制藥集團(tuán)有限責(zé)任公司生產(chǎn),批號(hào)960801;酮康唑?yàn)槲靼矖钌扑幱邢薰井a(chǎn)品,批號(hào)000222565;硝苯地平注射液為武漢濱湖制藥廠生產(chǎn),批號(hào)961218;地塞米松注射液為江蘇板橋藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號(hào)9910221;紅霉素(erythromycin)、氨基比林(aminopyrine)、6-磷酸葡萄糖二鈉、6-磷酸葡萄糖脫氫酶、1-氯-2,4-二硝基苯(1-chloro-2,4-dinitrobenzene,CDNB)、還原型谷胱甘肽(GSH)均為Sigma公司產(chǎn)品。牛血清白蛋白(BSA)、氧化型輔酶Ⅱ(NADP)、甲醛、乙酰丙酮、甲醇等為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?.2分組及給藥:昆明種雄性小鼠,體重20～24g,由本院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(酶誘導(dǎo)劑采用地塞米松,酶抑制劑采用硝苯地平或酮康唑)、BBH組、CsA組和BBH與CsA合用組。BBH、CsA、酮康唑ig給藥,硝苯地平、地塞米松ip給藥,陰性對(duì)照組以相同途徑給予等容量的溶媒,分別給藥3,6d后處死動(dòng)物,取肝臟制備微粒體。1.3儀器:分光光度法采用UV-3000分光光度計(jì)(日本島津)及HTS7000多孔板分析儀(美國(guó)PE公司)。1.4微粒體制備:采用鈣沉淀法制備肝臟微粒體,-40℃保存?zhèn)溆谩?.5藥物代謝酶測(cè)定:細(xì)胞色素P450含量測(cè)定采用Omura方法,紅霉素N-脫甲基酶(aminopyrenceN-demethylase,ADM)活性測(cè)定用分光光度法,氨基比林和紅霉素的終濃度分別為0.4,8mmol/L。谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(glutathioneStransferees,GST)活性測(cè)定參照文獻(xiàn)。蛋白含量測(cè)定采用folin酚試劑法。1.6統(tǒng)計(jì)方法;結(jié)果以ˉx±s表示,并用組間t檢驗(yàn)分析差異的顯著性。2結(jié)果2.1小鼠肝微粒體cyp450酶活性檢測(cè)合用3d對(duì)小鼠肝微粒體細(xì)胞色素P450酶的影響:見(jiàn)表1。酶誘導(dǎo)劑地塞米松組明顯增加小鼠肝微粒體CYP450酶的含量,誘導(dǎo)率為189.3%,與對(duì)照組相比差異非常顯著(P<0.01)。酶抑制劑硝苯吡啶陽(yáng)性對(duì)照組可使小鼠肝微粒體CYP450酶活性明顯降低(P<0.05)。BBH(200mg/kg)、CsA(45mg/kg)組CYP450酶活性與對(duì)照組比較雖有下降,但統(tǒng)計(jì)學(xué)上并無(wú)明顯差異(P>0.05)。而B(niǎo)BH和CsA合用3d后P450酶活性即明顯降低(P<0.01)。2.2erd酶活性測(cè)定合用對(duì)小鼠肝微粒體ERD酶活性的影響:見(jiàn)表2。給藥3d后,酮康唑陽(yáng)性對(duì)照組可使小鼠肝微粒體ERD酶活性明顯降低(P<0.05)。BBH(200mg/kg)、CsA(45mg/kg)組ERD酶活性與對(duì)照組比較雖有下降,但統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)明顯差異(P>0.05)。而B(niǎo)BH合用CsA組ERD活性明顯降低(P<0.05)。給藥6d后,各用藥組肝微粒體ERD酶活性進(jìn)一步降低,尤以BBH合用CsA組降低最為明顯(P<0.05)。2.3各給藥后各時(shí)間點(diǎn)adm酶活性的比較合用對(duì)小鼠肝微粒體ADM酶活性的影響:見(jiàn)表3。給藥3d時(shí),BBH、CsA及兩藥合用組小鼠肝微粒體ADM酶活性與對(duì)照組比較均無(wú)明顯差異(P>0.05)。給藥6d時(shí),BBH組和CsA組ADM酶明顯受到抑制(P<0.05),而兩藥合用組的抑制作用則更加明顯(P<0.01),抑制率達(dá)73.86%。酮康唑組給藥3d時(shí)的ADM酶活性與對(duì)照組無(wú)明顯差異,在給藥6d時(shí)則表現(xiàn)出明顯的誘導(dǎo)作用。2.4表1:表4:表4合用對(duì)小鼠肝微粒體GST酶活性的影響:見(jiàn)表4。給藥3或6d時(shí),BBH、CsA、BBH+CsA組對(duì)GST酶活性均有明顯抑制作用(P<0.05)。3cch和csa的相互作用藥物間相互作用最重要的機(jī)制是藥物對(duì)CYP450酶活性的影響,本研究對(duì)小鼠肝微粒體CYP450酶測(cè)定結(jié)果表明:BBH和CsA對(duì)該酶雖都有不同程度的抑制,但與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異。但是兩者相加,抑制作用似也相加,其抑制率(38.33%)比陽(yáng)性對(duì)照硝苯吡啶(30.0%)還高,說(shuō)明BBH與CsA合用對(duì)CYP450酶活性確有抑制作用。CPY3A是參與口服藥物首過(guò)效應(yīng)的主要酶系,也是造成藥物間相互作用的重要原因。CsA是公認(rèn)的CYP3A4底物,主要代謝途徑為羥化和N-去甲基化。CsA的血濃度可因合用CYP3A抑制劑如酮康唑、紅霉素、硫氮酮、硝苯吡啶、西米替丁等而升高。亦可因合用CYP3A誘導(dǎo)劑如糖皮質(zhì)激素、苯巴比妥、卡馬西平、利福平和苯妥英鈉而下降。紅霉素脫甲基酶是一種細(xì)胞色素P450同功酶,測(cè)定此酶主要反映了CYP3A的活性。本研究結(jié)果表明CsA是CYP3A抑制劑,且給藥6d比3d時(shí)抑制作用更強(qiáng),這與其在臨床治療中表現(xiàn)出的自身抑制現(xiàn)象相符;BBH在3d時(shí)抑制作用不明顯,但在給藥6d時(shí)抑制率也達(dá)到35.83%;BBH和CsA都表現(xiàn)出時(shí)效關(guān)系。BBH與CsA合用抑制效應(yīng)明顯加強(qiáng),3和6d的抑制率均在60%以上,比陽(yáng)性對(duì)照藥酮康唑的抑制率還高許多。氨基比林N-脫甲基酶主要反映了CYP1A、2B1、2C11的活性,本研究結(jié)果表明,在給藥3d時(shí),BBH、CsA和兩藥合用組均與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異,但在給藥6d時(shí),BBH和CsA均表現(xiàn)出明顯的抑制作用,而B(niǎo)BH與CsA合用組尤其顯著,抑制率高達(dá)73.86%,時(shí)效作用明顯,其機(jī)制是否與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合有關(guān)尚需進(jìn)一步探討。GST是一組參與機(jī)體解毒功能的同功酶,其主要作用是催化還原型GSH與親電性化合物結(jié)合,形成無(wú)毒的結(jié)合物排出體外。GST本身也可以與親電性化合物結(jié)合,促進(jìn)藥物及外源性物質(zhì)的代謝和清除。本研究結(jié)果表明無(wú)論是給藥3d還是6d,BBH、CsA和兩藥合用組均對(duì)該酶有抑制作用,但時(shí)效關(guān)系不明顯,且BBH與CsA合用組也并不比單藥的兩組抑制作用更強(qiáng)。CsA與BBH的相互作用以及BBH對(duì)CYP450的影響國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究表明,BBH與CsA的組合是藥物代謝酶CYP450、ERD(CYP