五葉草莓65%醇提液對(duì)s

五葉草莓65%醇提液對(duì)s

五葉草（又名泡沫和泡沫，當(dāng)?shù)厝艘脖环Q為“泡沫”和“泡沫”）。它是陜西省秦嶺山區(qū)的一種野生植物。它屬于薔薇科和多年生草本植物。山區(qū)人民收集了大量白色成熟的水果，吃了大量的食物和飲料。當(dāng)?shù)亓餍械牟葆t(yī)學(xué)儀法對(duì)上腹部疼痛、腹部腫瘤、小便、窒息和胃痛等疾病沒有顯著影響。我們發(fā)現(xiàn)單味野生植物五葉草莓水煎液,具有抑制胃癌等消化系腫瘤生長(zhǎng),并能調(diào)節(jié)患者免疫功能的作用,且五葉草莓65%乙醇提取部位抑瘤率超過水提部位,為此本實(shí)驗(yàn)采用五葉草莓65%醇提液進(jìn)行抑瘤實(shí)驗(yàn)。制備方法(65%乙醇回流提取):稱取五葉草莓全草1250g,剪成約1cm長(zhǎng)短,置于蒸餾燒瓶中加入65%乙醇為提取溶劑,加入溶劑量分別為12、10、8倍,水浴回流提取3次,時(shí)間分別為4h、3h、2h,合并3次提取物,過濾。濾液減壓濃縮,回收乙醇至浸膏,得醇提浸膏為215g。惡性腫瘤是一種常見病、多發(fā)病,有效防治腫瘤是關(guān)系到人類前途命運(yùn)的問題,一直被世界各國(guó)所關(guān)注。腫瘤不僅是細(xì)胞增殖和分化異常的疾病,也是細(xì)胞凋亡異常的疾病中醫(yī)中藥因具有多途徑、多靶點(diǎn)、毒副作用小等優(yōu)勢(shì),在腫瘤治療和輔助治療方面發(fā)揮著不小的作用。我們從實(shí)驗(yàn)角度探討五葉草莓65%醇提液對(duì)S180荷瘤小鼠模型的作用機(jī)制。1實(shí)驗(yàn)材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和儀器健康雄性SPF昆明小鼠50只,年齡4～9周,體重19～22g,由西安交大醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,合格證號(hào):SC·XK(陜)2007-001。1.2腫瘤植株購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,荷瘤S180腹水瘤小鼠,每7天傳代1次。1.3葉草莓的制備五葉草莓65%醇提液:五葉草莓采購(gòu)自陜西秦嶺山區(qū),經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系生藥教研室胡本祥教授鑒定為薔薇科植物五葉草莓的全草,本藥為正品。經(jīng)65%乙醇提取后,每1g提取物相當(dāng)于5.8g生藥,置0～4℃冰箱里保存?zhèn)溆谩－h(huán)磷酰胺(CTX):由山西普德藥業(yè)有限公司提供,生產(chǎn)批號(hào)H14023686,臨用時(shí)用生理鹽水配制成所需濃度2mg/ml。IL-2放射免疫試劑盒和TNF放射免疫試劑盒:由北京福瑞生物有限公司提供生產(chǎn)批號(hào)090825。1.4降壓機(jī)器和管機(jī)器電子天平(FA1004N)由上海精密科學(xué)儀器有限公司天平儀器廠制造;低速離心機(jī)(KDC-40)由科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司制造;FM-2000全自動(dòng)r免疫計(jì)數(shù)器由西安凱普機(jī)電有限責(zé)任公司制造;膜式電動(dòng)吸引器由上海醫(yī)療器械工業(yè)公司醫(yī)用吸引器廠制造。2實(shí)驗(yàn)方法2.1實(shí)體瘤模型制備所有小鼠先適應(yīng)性喂養(yǎng)7天,后在無菌條件下,用5mL注射器接8號(hào)針頭刺入已接種7d的荷瘤S180腹水瘤小鼠的腹腔中,采集S180小鼠腹水,不加抗凝劑,1mL腹水加1mlPBS液,放入離心機(jī)1000rpm/min離心6min,連續(xù)2次,棄上清液,取離心后溶液1mL加一滴0.2%臺(tái)盼藍(lán)溶液混勻,在顯微鏡下用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),經(jīng)檢測(cè)活細(xì)胞率>95%,用PBS液稀釋調(diào)整瘤細(xì)胞懸液密度至1×107個(gè)/mL,每只小鼠右側(cè)腋部皮下被注入0.2mL瘤細(xì)胞懸液接種制成實(shí)體瘤模型。2.2小組小鼠被接種24h后,按體重隨機(jī)分為模型組、CTX組、五葉草莓高劑量、五葉草莓低劑量組,每組10只,分組后稱重。所有小鼠均為普通飲食。2.3ctx對(duì)灌胃量的影響將分別給予五葉草莓65%醇提液高劑量(8.26g·kg·d)組、五葉草莓65%醇提液低劑量(4.13g·kg·d)組、CTX(0.04g·kg·d)組,五葉草莓65%醇提液組灌胃給藥,陽性對(duì)照CTX組腹腔注射,生理鹽水組灌胃量同五葉草莓醇提液每天灌胃量。以上各組在接種瘤細(xì)胞后第2天開始給藥。以上小鼠每天給藥1次,連續(xù)14天。2.4小鼠脫瘤率的測(cè)定S180荷瘤小鼠給藥14天后,第15天處死小鼠,剝離瘤體,計(jì)算抑瘤率;剖取脾臟和胸腺,計(jì)算脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù),分離血清,用放射免疫法檢測(cè)血清中IL-2、TNF-α的含量。2.5統(tǒng)計(jì)方法各組數(shù)據(jù)均按均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,采用t檢驗(yàn)及方差分析,運(yùn)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。3結(jié)果3.1小鼠按照大鼠的前前表作在于飲食、飲水、活動(dòng)正常接種前所有小鼠靈活,體毛光澤致密,進(jìn)食飲水可,生長(zhǎng)良好。1周后五葉草莓65%醇提液各劑量組及環(huán)磷酰胺組右腋下可見皮下腫塊。正常組小鼠飲食、飲水、活動(dòng)正常,被毛光澤,反應(yīng)靈敏。模型組小鼠接種瘤細(xì)胞1周后瘤體生長(zhǎng)迅速,進(jìn)食、飲水減少,小鼠活動(dòng)明顯減少,被毛無光澤,反應(yīng)遲鈍;五葉草莓65%醇提液各組及環(huán)磷酞胺組腫瘤生長(zhǎng)相對(duì)緩慢,而環(huán)磷酰胺組小鼠比五葉草莓65%醇提液各劑量組和模型對(duì)照組小鼠活潑,被毛略有光澤。3.25%液態(tài)草吉隆對(duì)s180蓮花腫瘤的嚴(yán)重影響3.35%液態(tài)草對(duì)s180蓮花瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響3.45%乙醇提取物對(duì)s180蓮花瘤大鼠血清tnf-i和il-2的影響3.5葉草莓20%醇提液大、難以感染造成瘤灶周圍炎性反應(yīng)光鏡下可見,模型組瘤細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,核漿比例大,核異形性強(qiáng),核大深染,可見病理性核分裂象,部分區(qū)域可見腫瘤細(xì)胞侵及血管壁。五葉草莓65%醇提液高、低劑量組細(xì)胞異型性有所緩解,腫瘤細(xì)胞減少,瘤灶周圍伴有炎性反應(yīng)。CTX組腫瘤細(xì)胞明顯減少,可見大片炎細(xì)胞區(qū)域,見圖1～4。4葉草莓醇提液對(duì)s180荷瘤小鼠血清中il-2、tnf-的影響本文從實(shí)驗(yàn)研究方面探討了五葉草莓65%醇提液的抑瘤和改善機(jī)體免疫功能的作用,結(jié)果顯示:五葉草莓65%醇提液高、低劑量組對(duì)s180荷瘤小鼠的腫瘤有抑制作用,其機(jī)制是可能增加了S180荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF-α的含量,促進(jìn)S180荷瘤小鼠免疫器官胸腺、脾臟的生長(zhǎng),與改善荷瘤小鼠的免疫功能有關(guān)。5對(duì)荷瘤小鼠血清tnf、il-2、th-2的活性檢測(cè)近年來人們?cè)絹碓秸J(rèn)識(shí)到腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)。免疫系統(tǒng)不僅具有清除病原微生物和其毒素、損傷或衰老的自身細(xì)胞、移植的外來細(xì)胞的功能,也能清除那些因各種因素而發(fā)生突變的新生細(xì)胞,即腫瘤細(xì)胞。免疫系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)上述功能,主要是依靠免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子。腫瘤壞死因子(TNF)是機(jī)體免疫反應(yīng)中引起出血和壞死的細(xì)胞因子。TNF-α對(duì)惡性腫瘤的作用尤為突出。白細(xì)胞介素2(IL-2),原稱T淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)因子,主要由抗原激活的T細(xì)胞產(chǎn)生,其最重要的作用是誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞的增殖與分化,即T淋巴細(xì)胞受抗原刺激后產(chǎn)生IL-2,IL-2又作用于T淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)其自身增殖、分化和發(fā)揮功能,IL-2在機(jī)體抗腫瘤疫中有著重要地位,尤其在增強(qiáng)CTL(細(xì)胞毒性T細(xì)胞)及(Th)T輔助細(xì)胞的活性和激活T細(xì)胞增殖等方面起關(guān)鍵作用。本實(shí)驗(yàn)以S180荷瘤小鼠為模型,對(duì)五葉草莓65%醇提取物進(jìn)行了抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究。結(jié)果顯示,五葉草莓65%醇提取物對(duì)荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)有抑制作用,高劑量組抑瘤率為45.05%,低劑量組抑瘤率為37.77%,五葉草莓65%醇提取物高、低劑量組與模型組比較