促透劑對(duì)復(fù)方酮康唑乳膏中酮康唑體外透皮作用的影響

促透劑對(duì)復(fù)方酮康唑乳膏中酮康唑體外透皮作用的影響

作為一種承受著抗真菌、抗過敏、抗炎止癢等作用的外用制劑，南方醫(yī)院已經(jīng)開發(fā)出具有抗真菌、抗過敏、抗炎巴比妥等主要成分的丙酮丙酸氯仿等。筆者參考文獻(xiàn)采用自制擴(kuò)散裝置,以離體鼠皮為透皮屏障,以5種不同促透劑對(duì)其滲透性進(jìn)行研究。1材料和方法1.1藥品、試劑與儀器LC-10A型高效液相色譜儀(日本島津);體外擴(kuò)散裝置(自制),ZD-85雙功能氣浴恒溫振蕩器(江蘇金壇市富華儀器有限公司),定量毛細(xì)管(美國(guó)DrummondscicoUSA)。酮康唑?qū)φ掌?中國(guó)藥品生物制品檢定所提供),雙戊烯(DP,同濟(jì)微量元素研究所),薄荷醇(M,上海香料廠),氮酮(azone,北京第二制藥廠),白油、霍巴油、維生素E、二甲基硅油、輔來松、尿素、杰馬防腐劑、亞硫酸鈉、丙酸氯倍他索、甘油均為藥用,其他試劑為分析純。昆明種小白鼠,SPF級(jí),體重(20±2)g,雌雄兼用,第一軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。1.2方法1.2.1混合分配均勻①取白油80g、霍巴油、維生素E、二甲基硅油各20g、輔來松30g置燒杯中混合均勻;②尿素10g、杰馬防腐劑0.6mL、亞硫酸鈉2g,純化水適量共溶(50℃);③酮康唑20g、丙酸氯倍他索0.5g加甘油6mL研細(xì)。將②加至①中低溫乳化至凝后,緩緩加入③攪拌均勻即得乳膏。1.2.2促透劑b.nb.選擇不同的促透劑加入到乳膏中制成含不同促透劑的樣品乳膏。Ⅰ號(hào)樣品(不含促透劑);Ⅱ號(hào)樣品(1.5%DP+1.5%azone);Ⅲ號(hào)樣品(1.5%DP+1.5%M);Ⅳ號(hào)樣品(3%M);Ⅴ號(hào)樣(2%azone);Ⅵ號(hào)樣品(3%DP)。1.2.3皮膚、皮下脂肪、溶解藥物健康小鼠,處死后立即剃除其腹部毛,剝離腹部皮膚,去除皮下脂肪,用純化水反復(fù)沖洗干凈,再用0.9%氯化鈉注射液沖洗幾遍,泡于0.9%氯化鈉注射液中,置4℃冰箱冷藏24h內(nèi)使用。1.2.4檢測(cè)波長(zhǎng)及流速色譜柱:Zobax-ODS(4.6mm×250mm,10μm);流動(dòng)相:甲醇-0.02mol·L-1磷酸二氫鉀緩沖液(pH7.40)(75∶25);檢測(cè)波長(zhǎng):239nm;流速:1.2mL·min-1。精密稱取干燥至恒重的酮康唑適量,用甲醇溶解稀釋成0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mg·mL-1的梯度溶液,進(jìn)樣10μL,以峰面積積分值(Y)對(duì)濃度(X)線性回歸,回歸方程:Y=1305481.7X+5987.3,R2=0.9992,表明酮康唑在0.2～1.0μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。1.2.5透皮吸收百分率測(cè)定方法按文獻(xiàn)方法采用雙室擴(kuò)散池,釋放池為長(zhǎng)10cm,內(nèi)徑1.5cm開口的玻璃管。接受池為50mL的錐形瓶,內(nèi)裝0.01mol·L-1的鹽酸溶液40mL。將試驗(yàn)乳膏均勻涂布于預(yù)先處理好的鼠皮然后置于玻璃管下端開口處后用絲線和防水膠布固定在釋放池下端(角質(zhì)層朝向玻璃管側(cè)),將鼠皮端置于接受液液面下再將整個(gè)透皮吸收裝置置于氣浴恒溫振蕩器中,振蕩方式為回旋式,振蕩速度200次·min-1,試驗(yàn)溫度(37±0.2)℃,擴(kuò)散面積1.5cm2,在5,10,15,25,35,45,60min自接受池內(nèi)各精密吸取4mL,同時(shí)補(bǔ)加等量0.01mol·L-1鹽酸溶液(各樣品分別用同鼠相近部位皮膚以空白基質(zhì)隨行進(jìn)行透皮實(shí)驗(yàn)),在相應(yīng)時(shí)間取樣作為空白對(duì)照,用注射器將其緩緩?fù)迫隨pepak-C18色譜柱中,用純化水30mL沖洗此色譜柱,水洗液棄去。繼用30mL二氯甲烷-乙醚(2∶1)混合液洗脫,收集洗脫液,減壓回收,用10mL甲醇溶解,進(jìn)樣10μL,根據(jù)峰面積計(jì)算出接受液中酮康唑含量。為準(zhǔn)確計(jì)算出透皮吸收百分率,按下式進(jìn)行校正:Ct=Cn+V1∑Ci-1/V(i=1～n,Ct為校正濃度,Cn為實(shí)測(cè)濃度,V1為取樣體積,V為接收池容積);S=CtV/W(S為累積滲透量,V為接收池容積,W為接收池面積);Q=S/Ni×100%(Q為累積透皮吸收百分率,Ni為釋放池中酮康唑量)。1.2.6統(tǒng)計(jì)方法數(shù)據(jù)的錄入和分析處理在SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件上完成。不同濃度各時(shí)間點(diǎn)的透皮藥量比較采用重復(fù)測(cè)量的方差分析,用LSD法作多重比較。2呈著性分布情況復(fù)方酮康唑乳膏使用促透劑組(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ組)與未使用促透劑組(Ⅰ組)比較均差異有極顯著性(P<0.01),見表1。實(shí)驗(yàn)研究表明3%DP+1.5%azone促透效果最好,與1.5%M+1.5%DP及2%azone相比差異有極顯著性(P<0.01),但與3%DP和3%M相比分別在35,45,60min時(shí)差異有顯著性(P<0.05)。3dp的協(xié)同作用結(jié)果證實(shí)單獨(dú)使用DP、M時(shí)促透效果更優(yōu)于兩藥聯(lián)用,結(jié)果差異有顯著性(P<0.05),提示DP、M兩種促透劑不具協(xié)同作用。1.5%azone增強(qiáng)了DP的透皮促滲作用,提示它與后者協(xié)同產(chǎn)生雙元滲透作用。由于乳膏基