酮康唑傳遞體的制備及質(zhì)量評價(jià)

酮康唑傳遞體的制備及質(zhì)量評價(jià)

傳遞體（t）也稱為軟納米脂質(zhì)體，是一種新型的皮膚劑。通過將某些表面活性劑加入到制備脂質(zhì)體的類脂材料中,制備成具有高度變形性,且能高效地穿透比其自身小數(shù)倍的皮膚孔道而達(dá)到透皮給藥目的的類脂聚積體。將藥物制成傳遞體透皮制劑,具有可制備藥品種類多、透過率高、使用方便、起效快等優(yōu)點(diǎn)。國內(nèi)外TF的研究主要集中在干擾素、胰島素等大分子藥物,而低分子藥物研究則少見。為此,特對酮康唑傳遞體(Ketoconazoletransfersome,KCZTF)的制備進(jìn)行了探討,并初步確定了含量測定方法,為KCZTF的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。1實(shí)驗(yàn)部分1.1藥物、試劑和試劑酮康唑(南京制藥二廠,批號:20000603);酮康唑?qū)φ掌?中國藥品生物制品檢定所,批號:0294-9801);注射用大豆磷脂(上海浦江磷脂有限公司,批號:20010227);膽酸鈉(中國醫(yī)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司,批號:20001227);膽固醇(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司,批號:20010108);SephadexG-50(上海腦海生物科技公司);甲醇為色譜純;其余試劑均為分析純。H-800型透射電鏡(日本Hitachi公司);高效液相色譜儀(美國Waters公司);RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠);AS2060B超聲波粉碎機(jī)(美國Autoscience)。1.2kczbt的制備按文獻(xiàn),定量稱取處方量的注射用大豆磷脂、膽固醇、維生素E及KCZ,溶于適量氯仿-甲醇混合溶媒(氯仿-甲醇體積比1∶2)中,置圓底燒瓶中,于37℃水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿,使磷脂等成膜材料在燒瓶壁形成均勻的類脂薄膜;另取緩沖溶液(pH5.8)適量溶解膽酸鈉,然后緩緩倒入上面的圓底燒瓶中,在水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā),直到形成透明的均勻乳白色溶液;再取0.9%NaCl水合介質(zhì)旋轉(zhuǎn)洗膜1h左右,直到形成澄清而透明的乳白色溶液;將所得混懸液在冰浴條件下經(jīng)超聲處理(2min×3,每次間隔30s);再經(jīng)0.15μm微孔濾膜加壓(0.5MPa)濾過,即可制得KCZTF。同法制備不含膽酸鈉的KCZ普通脂質(zhì)體。1.3kczbt的平均粒徑取樣品適量,稀釋,用1%磷鉬酸負(fù)染色,在透射電鏡下(15萬倍)觀察TF顆粒的形態(tài)。KCZTF和KCZ普通脂質(zhì)體均呈圓形或橢圓形(圖1)。粒度在50~250nm之間,轉(zhuǎn)換視野觀察600個(gè)不同微粒,50~100nm占24.67%,100~150nm占43.52%,150~200nm占23.55%,200~250nm占8.26%,按公式Dυ=(Σfdt3)1/3(式中f為頻數(shù),dt為體積徑,取每組段中值)計(jì)算得KCZTF的平均粒徑Dυ=146.70nm;KCZ普通脂質(zhì)體平均粒徑Dυ=133.24nm。1.4kczrt質(zhì)量控制1.4.1流動(dòng)相、柱溫采用SpherisorbC18(10μ)色譜柱,流動(dòng)相為甲醇-水(80∶20,內(nèi)含0.05%三乙胺),流速1.0ml·min-1;檢測波長244nm;柱溫為室溫;進(jìn)樣體積為10μl。其色譜圖見圖2。1.4.2線性關(guān)系考察精密稱取一定量的KCZ對照品,用流動(dòng)相配制成濃度分別為15、30、45、60、75、90μg·ml-1的對照品溶液,進(jìn)樣10μl,按“1.4.1”項(xiàng)下條件測定峰面積,以KCZ溶液濃度C對峰面積A作圖,得回歸方程:C=6.360×10-5A+1.332(r=0.9999),表明KCZ含量在15.0~90.0μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。1.4.3流動(dòng)相的定容精密移取“1.2”項(xiàng)下制備的KCZTF10μl于10ml量瓶中,加入流動(dòng)相,振搖,定容。取10μl注入HPLC,記錄峰面積,代入回歸方程得樣品中KCZ的含量為10.34μg·ml-1(RSD=1.45%,n=3)。1.4.4返回率測試取KCZTF溶液適量,精密加入處方量KCZ對照品,制備成適當(dāng)濃度的溶液,依“1.4.3”項(xiàng)下方法測定,計(jì)算回收率(表1)。1.4.5精密度和準(zhǔn)確度取含量分別為15、45、75μg·ml-1的KCZ對照品溶液于同日內(nèi)每隔2h測定含量,并每日測定1次,連續(xù)3d,計(jì)算日內(nèi)和日間精密度,結(jié)果見表2。1.4.6洗脫液收集精密量取KCZTF1ml上SephadexG-50柱(300mm×10mm),以流動(dòng)相洗脫,流速約1.0ml·min-1,收集洗脫液每份1ml。按“1.4.3”項(xiàng)下方法分別測定游離藥物量(Wy)和TF總藥量(Wz),按ER%=[(Wz-Wy)/Wz]×100%計(jì)算,測得TF的平均包封率為53.48%±1.86%(n=6);采用相同方法得到普通脂質(zhì)體的平均包封率為36.53%±1.53%(n=6)。1.5外觀性狀測定參照中國藥典作溫度和光照實(shí)驗(yàn)。精密量取一定量的樣品,密閉于棕色玻璃瓶中,于0℃、25℃、40℃、60℃的恒溫干燥箱中放置10d,于第5、10天取出觀察外觀性狀并測定含量。精密量取一定量樣品密閉于無色玻璃瓶中(25℃),4000lx光照10d,第5、10天觀察外觀性狀并測定含量(表3)。1.6微孔濾膜性能測試考察在外力作用下(0.1~0.5MPa)TF混懸液變形通過0.15μm微孔濾膜的性能。分別記錄5ml水、5mlTF和5ml普通脂質(zhì)體通過濾膜的時(shí)間,按P=(tTF/t水)×100%計(jì)算相對速率,每個(gè)壓力組做6次,結(jié)果見表4。經(jīng)t檢驗(yàn),P<0.01,顯示TF與普通脂質(zhì)體具有極顯著差異。2穩(wěn)定性和可變形性實(shí)驗(yàn)薄膜分散法是制備脂質(zhì)體的常用方法,其制備所得大多為多相脂質(zhì)體。文中實(shí)驗(yàn)采用超聲分散法并結(jié)合微孔濾膜法,制備的TF平均粒徑小,但容易產(chǎn)熱且有泡沫,應(yīng)在冰水浴中短時(shí)并間斷超聲。制備KCZTF時(shí),采用偏酸的緩沖液可將藥物包封率由35%提高到50%以上。在實(shí)驗(yàn)確定的色譜條件下,輔料不影響KCZ的測定,加樣回收率為102.67%,日內(nèi)和日間RSD均小于2.0%,證實(shí)了含量測定方法的可靠性。穩(wěn)定性影響因素實(shí)驗(yàn)表明,在0℃、25℃及4000lx(25℃)條件下KCZTF性狀無明顯變化,藥物包封率變化小;而在40℃、60℃恒溫條件下,藥物包封率變化大,說明藥物滲漏多,且滲漏隨溫度增加而增加;TF外觀變黃,說明溫度使脂質(zhì)材料產(chǎn)生了變化。TF具有高度變形性。過濾前,TF和普通脂質(zhì)體的含量及平均包封率相近(P>0.05,n=5),粒徑在0.25~5μm之間;過濾后,TF的包封率無顯著變化(P>0.05,n=5),粒徑≥150nm的占觀察總數(shù)(600個(gè))的31.81%;而普通脂質(zhì)體粒徑均在1