枳實(shí)消痞丸及其拆方對(duì)大鼠胃中空及血漿胃動(dòng)素水平的影響

枳實(shí)消痞丸及其拆方對(duì)大鼠胃中空及血漿胃動(dòng)素水平的影響

《魁三察經(jīng)》是中醫(yī)補(bǔ)氣消毒之方，能改善患者的早食、飯后大便等癥狀。本實(shí)驗(yàn)觀察了該方劑及其拆方對(duì)大鼠胃排空和血漿胃動(dòng)素(MOT)水平的影響,結(jié)果報(bào)告如下。1材料和方法1.1全方組的制備雄性Wistar大鼠112只,7~8周齡,180~210g,由上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。枳實(shí)消痞丸方(枳實(shí),厚樸,麥芽,黨參,茯苓,白術(shù),炙甘草,半夏,黃連,干姜)用蒸餾水制成全方組及消法(枳實(shí)、厚樸、麥芽)、補(bǔ)法(黨參、茯苓、白術(shù)、炙甘草)、和法(半夏、黃連、干姜)4種水煎液以及合煎沖劑、分煎沖劑兩種全方?jīng)_劑,濃度(生藥量/ml)分別為1、0.423、0.346、0.231、1及1g/ml。由上海中藥研究所加工提供。西沙必利片劑(西安楊森制藥有限公司,批號(hào)9707154)制成0.2mg/ml的水溶液。魚粉蛋白胨溶液(40%);酚紅(1.0mg/ml);磷酸三鈉(63.7g/L);MOT放免試劑盒(北京解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所)。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1各組大鼠灌胃負(fù)壓mot①胃排空測定分組:72只大鼠分為標(biāo)準(zhǔn)組、正常對(duì)照組、西沙必利組、枳實(shí)消痞丸方飲片組(全方)、消法組,補(bǔ)法組,和法組,全方合煎沖劑組、全方分煎沖劑組,共9組,每組8只。②MOT測定分組:40只分為正常對(duì)照組、全方組、消法組,補(bǔ)法組,和法組,每組8只。各用藥組灌胃均1.5ml/只,每天1次,用藥4周。標(biāo)準(zhǔn)組及正常對(duì)照組用0.9%NaCl1.5ml/只灌胃同上,均灌胃4周。各組分籠飼養(yǎng),自由進(jìn)食與飲水。1.2.2胃科學(xué)使用液胃排空的測定:采用酚紅標(biāo)記蛋白胨溶液法。40%蛋白胨溶液(懸濁液)于實(shí)驗(yàn)前數(shù)天用蒸餾水配制,并加酚紅作為不吸收的標(biāo)記物(1.0mg/ml),4℃保存。各組大鼠用藥結(jié)束后,禁食18h;用預(yù)熱的蛋白胨溶液(37℃)灌胃,3ml/只;標(biāo)準(zhǔn)組灌胃后立即處死,其他各組灌胃40min后以頸椎脫臼法處死;迅速剖腹,結(jié)扎大鼠胃幽門及賁門,取出胃,沿大彎側(cè)剪開,胃內(nèi)容物收集于量杯。用30ml蒸餾水沖洗胃3次,沖洗液也倒入量杯。量杯內(nèi)液體再用蒸餾水滴定至100ml,充分混勻;取5ml4℃3100r/min離心15min;取上清1ml加入5mlNa3PO4(63.7g/L),渦旋混合;每個(gè)樣本的酚紅濃度(Csample)用分光光度計(jì)于523nm處測定吸光度。胃排空率以標(biāo)準(zhǔn)組為基準(zhǔn),按下列公式計(jì)算:胃排空率(%)=(Cstandard-Csample)/Cstandard×100%),Cstandard代表標(biāo)準(zhǔn)組中各樣本平均吸光度。MOT的測定:采用放免法,用藥結(jié)束后,各組大鼠禁食18h(水、藥如常),2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,股靜脈采血2ml,置于含30μl10%EDTA二鈉和30μl抑肽酶塑料管中混勻,4℃離心,3500r/min15min,取血漿250μl,-20℃以下保存待檢。為避免血漿中冷凝蛋白對(duì)測定的干擾,測定時(shí)血漿復(fù)融后,4℃離心,取上清液按試劑盒要求條件測定。用MOT標(biāo)準(zhǔn)液的樣品結(jié)合百分率繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,查出相應(yīng)的樣本值。樣本管和標(biāo)準(zhǔn)管的檢測均采用雙管法。1.3統(tǒng)計(jì)處理方法多組間均數(shù)比較采用方差分析。顯著性水平設(shè)α=0.05。采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。2結(jié)果2.1補(bǔ)法組和分充顆粒組胃宣傳及結(jié)果結(jié)果見表1。由表1可見,除和法組外,各用藥組的胃排空率均顯著快于正常對(duì)照組;而補(bǔ)法組和分煎沖劑組胃排空率又較全方組及西沙必利組為慢,其余各組兩兩間差異無顯著性意義。與正常對(duì)照組比較1)P<0.05,2)P<0.01;與西沙必利組比較3)P<0.01;與全方組比較4)P<0.052.2組患者的mot釋放作用結(jié)果見表2。1)與對(duì)照組比較P<0.05由表2可見,枳實(shí)消痞丸方具有促進(jìn)MOT釋放的作用,拆方研究表明方中消法組的藥物起主要作用,補(bǔ)法組也有升高M(jìn)OT的趨勢(shì),但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3促進(jìn)胃宣傳的藥物作用枳實(shí)消痞丸方是李東垣治療虛實(shí)相兼之痞滿證的代表方劑,由枳術(shù)丸、半夏瀉心湯、四君子湯3方加減化裁而成。方中枳實(shí)苦瀉辛散,沉降力強(qiáng),有良好的破氣消積之功,以辛苦性溫之厚樸行氣消痞、下氣除滿,丹波元胤云“厚樸之性,不論虛實(shí),氣之逆而為脹閉者,并能治之”(《藥雅》),再佐以麥芽消食和胃,3藥合用,更增其行滯氣消痞滿之功;以苦寒之黃連清熱燥濕以瀉痞,半夏辛溫和胃而散結(jié)除痞,用少量干姜溫中祛寒,3藥相和,辛開苦降,調(diào)其寒熱,助枳、樸行氣開痞除滿;用參、術(shù)、苓、草補(bǔ)中健脾,祛濕和中。綜觀全方,消補(bǔ)兼施,寒熱并用,實(shí)為行氣消痞良劑。我們臨床上應(yīng)用枳實(shí)消痞丸方治療功能性消化不良(FD)取得了較好的療效,胃腸運(yùn)動(dòng)失常和胃排空延遲與FD的發(fā)病密切相關(guān),本文的實(shí)驗(yàn)研究表明,本方具有明顯促進(jìn)胃排空的作用。進(jìn)一步的拆方研究發(fā)現(xiàn)在本方的藥物中,體現(xiàn)消導(dǎo)之法的藥物(枳實(shí)、厚樸、麥芽)促進(jìn)胃排空的作用最為明顯,補(bǔ)法組(黨參、白術(shù)、茯苓、甘草)也能顯著促進(jìn)大鼠的胃排空,但其作用較全方組和消法組為弱。本次研究未發(fā)現(xiàn)沖劑和傳統(tǒng)水煎劑的作用差別;分煎沖劑組也能促進(jìn)胃排空,但作用明顯不如合煎沖劑組和飲片組,說明藥物的制備辦法可能影響到某些有效成分的發(fā)揮,合煎可能使本方一些藥物成分發(fā)揮更大的協(xié)同作用。既往有報(bào)道,枳實(shí)、厚樸可興奮試驗(yàn)動(dòng)物的胃腸運(yùn)動(dòng),此兩藥可能是消法組中起主要作用的。而補(bǔ)法組藥物中的黨參、白術(shù)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中亦有類似作用;甘草則能抑制小鼠的胃腸推進(jìn),提示其可能為補(bǔ)法組藥物中的抑制成分,使得補(bǔ)法組的促進(jìn)胃排空作用較消法組為弱。有研究表明柴胡、枳實(shí)兩藥合煎時(shí)的促胃腸推進(jìn)功能比兩藥分煎時(shí)更明顯,這與我們此次對(duì)枳實(shí)消痞丸方的研究結(jié)果相似。我們以前的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)已證明枳實(shí)消痞丸加減方能提高大鼠的紅細(xì)胞膽堿酯酶活性,迷走神經(jīng)是支配胃腸生理活動(dòng)的重要外源性神經(jīng),迷走神經(jīng)切斷術(shù)后胃的運(yùn)動(dòng)受損或消失充分說明了該神經(jīng)的重要性,因此迷走神經(jīng)興奮性加強(qiáng)可能是本方促進(jìn)胃排空的重要機(jī)制。MOT是由22個(gè)氨基酸組成的多肽,分泌MOT的細(xì)胞分布在小腸上段,尤其在十二指腸。一般認(rèn)為,MOT的主要作用器官是胃,在消化間期對(duì)胃排空內(nèi)容物起主要作用。本實(shí)驗(yàn)研究也證明枳實(shí)消痞丸方具有促進(jìn)MOT釋放的作用,跟胃排空實(shí)驗(yàn)類似,拆方研究表明方中消法組的藥物起主要作用,補(bǔ)法組也有升高M(jìn)OT