高效液相色譜法測定奶粉中三聚氰胺的含量

測定奶粉中三聚氰胺的含量

——高效液相色譜法生物工程1001班目錄三鹿毒奶粉事件 1液相色譜法簡介2樣品檢測方案3結論與反思4毒奶粉事件回顧2008年7月，舉國上下正在為剛剛過去的汶川大地震默哀紀念的時候，正在為即將到來的北京奧運會而歡慶的時候，一則新聞報道了大量嬰兒因喝了某品牌奶粉而患上了腎結石。隨后三鹿集團被推上了風口浪尖，一時間包括蒙牛、伊利在內(nèi)的全國各大品牌奶粉均被查出“毒奶粉”，引起了全國恐慌，三鹿集團因此也破產(chǎn)倒閉。而這一毒奶粉事件的罪魁禍首——三聚氰胺也隨之為大眾知曉。高效液相色譜法原理

高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送（最高輸送壓力可達4.9′107Pa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜（每米塔板數(shù)可達幾萬或幾十萬）；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續(xù)檢測。

高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量的有機物，原則上都可應用高效液相色譜法來進行分離、分析。

三聚氰胺是一種低毒的化工原料，動物實驗結果表明，其在動物體內(nèi)代謝很快且不會存留，主要影響泌尿系統(tǒng)。乳制品中添加三聚氰胺會使得食品的蛋白質(zhì)測試含量偏高，從而使劣質(zhì)食品通過食品檢驗機構的測試，就送檢的奶粉樣品，采用高效液相色譜法（HPLC）測定其中的三聚氰胺的含量。因此，在該對奶粉樣品的檢測實驗中，由于樣品不耐高溫，宜采用此法分析。高效液相色譜法的特點

①高壓：流動相為液體，流經(jīng)色譜柱時，受到的阻力較大，為了能迅速通過色譜柱，必須對載液加高壓。

②高效：分離效能高?？蛇x擇固定相和流動相以達到最佳分離效果，比工業(yè)精餾塔和氣相色譜的分離效能高出許多倍。③高靈敏度：紫外檢測器可達0.01ng，進樣量在μL數(shù)量級。

④應用范圍廣：百分之七十以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性、熱穩(wěn)定性差化合物的分離分析，顯示出優(yōu)勢。⑤分析速度快、載液流速快：較經(jīng)典液體色譜法速度快得多，通常分析一個樣品在15～30分鐘，有些樣品甚至在5分鐘內(nèi)即可完成，一般小于1小時。樣品檢測方案高效液相色譜法檢測樣品的來源和預處理方法確定儀器配置確定初始操作條件定性鑒定與定量分析實驗結果及判定樣品的來源和預處理方法高效液相色譜法要求試樣能制成溶液。這樣，我們在接到一個未知樣品時，就必須了解的來源，從而估計樣品可能含有的組分，以及樣品的溶解度范圍。如果樣品體系簡單，試樣組分可溶解則可直接分析。如果樣品中有不能用HPLC直接分析的組分，或樣品濃度太低，就必須進行必要的預處理，如采用吸附、解析、萃取、濃縮、稀釋、提純、衍生化等方法處理樣品。原理：以三聚氰胺為原料制作的成型品經(jīng)4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色譜分離、測定，以保留時間定性、峰高或峰面積定量。確定儀器配置

1、主要儀器與設備a高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器b分析天平：感量為0.0001g和0.01gc離心機：轉(zhuǎn)速不低于4000r/mind超聲波水浴e固相萃取裝置f氨氣吹干儀渦旋混合器2、材料與方法：以三聚氰胺為原料制作的成型品經(jīng)4%乙酸浸泡，浸泡液中三聚氰胺用高效液相色譜分離、測定，以保留時間定性、峰高或峰面積定量。確定初始操作條件1、色譜條件

色譜柱：C184.6×150mm，5μm流動相：己烷磺酸鈉（5mmol/L）-磷酸（0.1%）溶液+甲醇（90+10）；流速1.0mL/min。柱溫：35℃紫外檢測器：波長為235nm。進樣體積：10μL2、測定將儀器調(diào)至最佳狀態(tài)后，分別將濃度為0.05μg/mL，0.1μg/mL，0.5μg/mL，1μg/mL，2μg/mL的標