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文檔簡介
選修三重要知識點整理第一章基因工程1.限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)主要從原核生物(用于切割外源DNA,保護自身)中分離純化出來,識別序列由6個核苷酸(或4、5、8個)組成。末端種類:平末端和黏性末端2.DNA連接酶效率低3.運載體(1)作用:①作為運載工具,將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細胞內(nèi)。②利用它在宿主細胞內(nèi)對目的基因進行大量復(fù)制。(2)種類:質(zhì)粒、λ噬菌體的衍生物和動植物病毒等。(3)條件:①有一個或多個限制酶切位點②能自我復(fù)制③有標(biāo)記基因(4)一般來說,天然載體往往不能滿足人類的所有要求,因此在基因工程中,對某些天然的載體進行人工改造。4.基因工程中形成的重組DNA是DNA分子片段的連接,而不是合成DNA分子或轉(zhuǎn)錄合成mRNA的過程5.DNA連接酶:不需要模板DNA聚合酶:需要模板DNA復(fù)制時都形成磷酸二脂鍵6.基因操作程序:Ⅰ獲取目的基因Ⅱ構(gòu)建表達載體(核心)Ⅲ導(dǎo)入受體細胞Ⅳ目的基因的檢測與鑒定Ⅰ獲得目的基因(1)基因組文庫(所有的)部分基因文庫(部分的),如cDNA文庫(2)PCR技術(shù)擴增目的基因原理:DNA復(fù)制指數(shù)方式增加需要:模板DNA,原料(游離的四種脫氧核苷酸),引物,DNA聚合酶(3)人工合成(基因較小)化學(xué)合成:DNA合成儀(已知序列)反轉(zhuǎn)錄法:未知序列Ⅱ構(gòu)建表達載體(核心):目的基因、啟動子、終止子、標(biāo)記基因Ⅲ導(dǎo)入受體細胞(1)植物細胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法:雙子葉植物、裸子植物的體細胞或受精卵基因槍法花粉管通道法(2)動物細胞:顯微注射技術(shù)受體細胞:受精卵(a含有目的基因表達所需的物質(zhì);b具有全能性)(3)微生物細胞:原核生物(繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對較少)作為受體細胞大腸桿菌:Ca2+處理細胞(感受態(tài)細胞)Ⅳ目的基因的檢測與鑒定1)檢測:DNA分子雜交技術(shù)(原理:堿基互補配對)①目的基因作探針②轉(zhuǎn)錄出mRNA③翻譯成蛋白質(zhì):抗原抗體雜交2)鑒定:個體生物學(xué)水平7.逆轉(zhuǎn)錄形成的目的基因不含內(nèi)含子原因:mRNA形成時切掉了內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的RNA內(nèi)含子:能轉(zhuǎn)錄不能翻譯外顯子:能轉(zhuǎn)錄能翻譯真核生物基因編碼區(qū):內(nèi)含子和外顯子原核和真核生物的非編碼區(qū):對遺傳起調(diào)控作用(啟動子和終止子)8.植物基因工程技術(shù)①提高農(nóng)作物的抗逆能力②改良農(nóng)作物的品質(zhì)③利用植物生產(chǎn)藥物9.殺蟲的基因:Bt毒蛋白基因(我國轉(zhuǎn)基因抗蟲棉)、蛋白酶抑制劑基因、淀粉酶抑制劑基因、植物凝集素基因10.病原微生物:病毒、真菌、細菌等。11.轉(zhuǎn)基因玉米:賴氨酸含量比對照提高30%12.動物基因工程:導(dǎo)入生長素基因---提高生長速度導(dǎo)入腸乳糖酶基因---改善畜產(chǎn)品品質(zhì)生產(chǎn)藥物---乳腺生物反應(yīng)器或乳房生物反應(yīng)器優(yōu)點:易提取、產(chǎn)量高、質(zhì)量好、成本低轉(zhuǎn)基因動物作器官移植的供體優(yōu)點:抑制抗原基因的表達、或除去抗原決定的基因、無免疫排斥反應(yīng)13.工程菌第一種基因工程藥物---重組人胰島素細胞因子、抗體、疫苗、激素等。我國生產(chǎn):白細胞介素-2、干擾素(糖蛋白,為我國第一個批量生產(chǎn)的藥物)、乙肝疫苗14.體外基因治療和體內(nèi)基因治療:都處于初期臨床試驗階段15.基因工程是在兩個物種間轉(zhuǎn)移基因,克服了兩個物種間由于生殖隔離不能進行基因交流的障礙,能定向培育生物新品種。16.基因重組:1)有性生殖時:非等位基因的重新組合2)DNA的拼接技術(shù)---基因工程17.基因工程在原則上只能生產(chǎn)自然界已存在的蛋白質(zhì)18.蛋白質(zhì)工程:第二代基因工程基因修飾或基因合成第二章細胞工程1.植物的組織培養(yǎng)離體的組織、器官或細胞愈傷組織植物體2.植物體細胞雜交技術(shù)生殖方式:無性生殖脫分化再分化外植體固體培養(yǎng)基營養(yǎng):蔗糖、礦質(zhì)元素(無機鹽)激素:生長素、細胞分裂素(也有赤霉素)注:愈傷組織之后需要給予光照條件原理:植物細胞的全能性去除細胞壁的方法:酶解法(纖維素酶和果膠酶)誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法:物理法:離心、振動和電激化學(xué)法:聚乙二醇(PEG)生長素含量>細胞分裂素:誘導(dǎo)脫分化和根原基形成生長素含量<細胞分裂素:誘導(dǎo)再分化和芽原基形成
一、植物細胞工程雜種細胞形成的標(biāo)志:生成新的細胞壁植物體細胞雜交的原理:細胞膜的流動性、植物細胞的全能性意義:克服不同物種遠緣雜交的障礙3植物細胞工程的應(yīng)用(1)微型繁殖意義:保持親本優(yōu)良性狀、快速繁殖(2)作物脫毒取材部位:莖尖、根尖(分生區(qū))(3)人工種子:由胚狀體和人工種皮(營養(yǎng)物質(zhì)、殺菌劑)(4)單倍體育種(5)細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)例如:從愈傷組織中提取紫草素二、動物細胞工程(一)動物細胞培養(yǎng)1、過程:原代培養(yǎng)幼齡動物的組織塊分散成單個細胞細胞懸液細胞貼壁接觸抑制胰蛋白酶或膠原蛋白酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶傳
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