淫羊藿苷干預(yù)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞對(duì)NF-κB信號(hào)通路表達(dá)的影響

淫羊藿苷干預(yù)關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞對(duì)NF-κB信號(hào)通路表達(dá)的影響南京市中醫(yī)院骨傷科

錢衛(wèi)慶

立項(xiàng)依據(jù)：國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀及發(fā)展動(dòng)態(tài)分析骨關(guān)節(jié)炎是一個(gè)世界性骨骼健康問題，嚴(yán)重影響老年人壽命和生活質(zhì)量，目前研究的重心主要基于分析蛋白酶對(duì)軟骨細(xì)胞凋亡及軟骨細(xì)胞外基質(zhì)降解的作用方面。其中對(duì)于淫羊藿苷抑制軟骨破壞，發(fā)揮軟骨保護(hù)的作用已被廣泛認(rèn)可。立項(xiàng)依據(jù)：課題組相關(guān)研究概況我科前期在江蘇省中醫(yī)藥局科技項(xiàng)目及南京市醫(yī)學(xué)科技發(fā)展項(xiàng)目的資助下我們就淫羊藿苷促成骨形成機(jī)制方面進(jìn)行了相關(guān)的動(dòng)物及蛋白組學(xué)方面的研究，并圓滿結(jié)題。我科近年來開始就淫羊藿苷對(duì)于軟骨細(xì)胞保護(hù)的機(jī)理方面開展探索工作。立項(xiàng)依據(jù)：前期研究及相關(guān)文獻(xiàn)查閱1.在呼吸系統(tǒng)方面、心血管疾病方面，已有大量試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)淫羊藿苷可以抑制NF-κB通路的活化，達(dá)到抑制炎性細(xì)胞因子表達(dá)的作用[1-2]2.在骨科疾病方面，大量研究證實(shí)NF-κB信號(hào)通路與OA形成與發(fā)展具有密切的聯(lián)系。

NF-κB首先是由于細(xì)胞外刺激，通過細(xì)胞內(nèi)的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致軟骨降解和關(guān)節(jié)損傷[3]3.穿心蓮內(nèi)酯能夠通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，顯著地下調(diào)IL-1β刺激人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞，降低MMP-3/13等多種炎性介質(zhì)的表達(dá)［4］

[1]杜文靜；補(bǔ)腎中藥組分淫羊蕾昔對(duì)哮喘小鼠嗜酸粒細(xì)胞凋亡的影響[d];復(fù)旦大學(xué);2011年[2]CHENSR，XUXZ，WANGYH，etal．IcariinDerivativeInhibitsInflammationthroughSuppressionofp38Mitogen-ActivatedProteinKinaseandNuclearFactor-BPathways［J］．BiolPharmBull，2010，33(8):1307-1313．[3].周莊，張柳等NF-κB信號(hào)通路在骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展中作用機(jī)制的研究［J］．中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2012，18(1):78－82．[4].DingQH,JiXW,ChengY,etal.inhibitionofmatruxmetalloprteinasesandinduciblenitricoxidesynthasebyandrographolideinhumanosteoarthriticchondrocytes[J].modRheumatol,2012Dec15.立項(xiàng)依據(jù)：前期研究及相關(guān)文獻(xiàn)查閱4.uPA系統(tǒng)是NF-κB的下游調(diào)控因子，NF-KB在炎癥過程中被激活后,進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮轉(zhuǎn)錄活性,可上調(diào)uPA的表達(dá)［5］5.uPA和uPAR（uPA受體）在關(guān)節(jié)軟骨病變的表層表達(dá)最為強(qiáng)烈,并且uPA和uPAR的水平與關(guān)節(jié)軟骨破壞的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性［6］[5].MarcuKB，OteroM，OlivottoE，NF一kappaBsignaling:multipleanglestotargetOA.CurrDrugTargets，2010,11(5):599一613.

[6].張立智，張先龍，王琦，等．骨關(guān)節(jié)炎軟骨下骨的成骨細(xì)胞生物學(xué)表型研究［J］．第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，33(10):1003－1007．此次試驗(yàn)推測(cè)NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)示意圖：立項(xiàng)依據(jù)：前期研究及相關(guān)文獻(xiàn)查閱NF-κB通路uPA系統(tǒng)細(xì)胞外基質(zhì)降解OA假設(shè)：淫羊藿苷干預(yù)軟骨細(xì)胞的過程中，淫羊藿苷是否也可以通過抑制NF-κB通路的活化，抑制炎性細(xì)胞因子表達(dá)，從而達(dá)到保護(hù)軟骨細(xì)胞作用？同時(shí)，在抑制NF-κB通路的活化后，是否對(duì)下游調(diào)控因子uPA系統(tǒng)產(chǎn)生影響，而進(jìn)一步達(dá)到抑制蛋白酶對(duì)軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的降解，起到保護(hù)關(guān)節(jié)軟骨的作用？立項(xiàng)依據(jù)：本課題科研假設(shè)立項(xiàng)依據(jù)：前期研究工作基礎(chǔ)我們之前在淫羊藿苷對(duì)大鼠成骨細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)影響的研究中發(fā)現(xiàn)10ng.ml-1

濃度的淫羊藿苷能快速促進(jìn)SD大鼠成骨細(xì)胞的增殖和分化[7]。[7].錢衛(wèi)慶，尹宏，孫海濤。不同濃度淫羊藿苷對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖、分化的影響,《中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)》2011,36:23-25。前期研究：Icariin干預(yù)OB后細(xì)胞增殖情況研究方案：實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)原代成骨細(xì)胞傳代24小時(shí)后分為5組:(1)空白組:

10%IMDM正常培養(yǎng);(2)PDTC組：加入0.5mmol/LNF-κB阻滯劑PDTC(3)淫羊藿低劑量組:加入0.1mg/mL淫羊藿苷(4)淫羊藿中劑量組:加入1mg/mL淫