《保健食品中14種真菌毒素含量的高通量快速測(cè)定 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》（征求意見(jiàn)稿）編制說(shuō)明

1.任務(wù)來(lái)源2022年10月，無(wú)限極（中國(guó)）有限公司向廣東省食品流通協(xié)會(huì)提出了制定廣東省食品流通協(xié)會(huì)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)《保健食品中14種真菌毒素含量的高通量快速測(cè)定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》的項(xiàng)目申請(qǐng)，協(xié)會(huì)組織評(píng)審專(zhuān)家小組，召開(kāi)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)評(píng)審會(huì)議，評(píng)審小組成員對(duì)該項(xiàng)目進(jìn)行論證并獲得通過(guò)。2022年12月7日在《全國(guó)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)信息平臺(tái)》完成了立項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)公示。廣東省食品流通協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化專(zhuān)業(yè)委員會(huì)下達(dá)了《保健食品中14種真菌毒素含量的高通量快速測(cè)定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》制訂任務(wù)，開(kāi)始該標(biāo)準(zhǔn)的研究制定工作，在組織上擬定了相關(guān)的措施，確定了本標(biāo)準(zhǔn)的制訂思路。2.協(xié)作單位本標(biāo)準(zhǔn)起草單位為無(wú)限極（中國(guó)）有限公司、廣東省科學(xué)院生物與醫(yī)學(xué)工程研究所、必維科技服務(wù)（西安）有限公司等單位，由廣東省食品流通協(xié)會(huì)歸口。3.編制背景、必要性及意義“民以食為天、食以安為先”，食品安全是重大戰(zhàn)略民生問(wèn)題。以中草藥為基礎(chǔ)的健康食品，包括口服液、片劑、膠囊、固體飲料、壓片糖果等，因風(fēng)味獨(dú)特、具有營(yíng)養(yǎng)性或保健功能性等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)而備受消費(fèi)者青睞。然而，中藥材受真菌毒素污染嚴(yán)重，且中藥材中受到污染的真菌毒素種類(lèi)較多，不僅限于黃曲霉毒素類(lèi)，而且真菌毒素具有耐高溫特性，行業(yè)常見(jiàn)的現(xiàn)有生產(chǎn)工藝難以去除。目前，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法以及文獻(xiàn)報(bào)道的真菌毒素的檢測(cè)方法主要采用薄層色譜法（TLC）、等，樣品前處理主要采用固相萃取柱、多功能凈化柱、免疫親和柱以及QuEChERS方法等凈化技術(shù)。由于真菌毒素在實(shí)際樣品中通常含量較低，并且不同真菌毒素的結(jié)構(gòu)差異大、理化性質(zhì)差異大，導(dǎo)致多數(shù)分析方法只能檢測(cè)單個(gè)、單類(lèi)或少數(shù)幾種真菌毒素，不能滿足批量樣品中多種真菌毒素同時(shí)高通量檢測(cè)的需求。而QuEChERS結(jié)合UPLC-MS/MS技術(shù)由于具有快速、簡(jiǎn)便、廉價(jià)、準(zhǔn)確度高和靈敏度高等優(yōu)勢(shì)，能同時(shí)實(shí)現(xiàn)多種真菌毒素高效的定性定量分析，目前已成為各種食品以及中藥材中多種真菌毒素同時(shí)檢測(cè)的主要方法。這些已報(bào)道的QuEChERS結(jié)合UPLC-MS/MS多數(shù)是采用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線法或基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)合同位素內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析，并且不同的食品樣品所含的基質(zhì)成分差異大，因此這些方法的適用范圍僅限于研究中的食品種類(lèi)，不能覆蓋其它食品類(lèi)型。目前國(guó)內(nèi)外研究較少，且檢測(cè)項(xiàng)目單一，檢測(cè)方法靈敏度較低。故我們亟待開(kāi)發(fā)出一個(gè)原理合理、范圍合適、操作較為簡(jiǎn)單、干擾少、成本低、儀器上機(jī)時(shí)長(zhǎng)較短的方法來(lái)填補(bǔ)保健食品不同劑型下14種真菌毒素的測(cè)定。超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)具備液相色譜高效的在線分離能力和質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度的檢測(cè)能力，可以同時(shí)得到化合物的保留時(shí)間、分子量以及特征結(jié)構(gòu)碎片等豐富的信息，其多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)技術(shù)兼具有選擇離子掃描的靈敏度和二級(jí)質(zhì)譜的特征性，在痕量分析方面具有很大的優(yōu)勢(shì)。本標(biāo)準(zhǔn)建立了同時(shí)測(cè)定保健食品中14種真菌毒素的UPLC-MS/MS檢測(cè)方法，方法操作簡(jiǎn)單，結(jié)果穩(wěn)定可靠，可為監(jiān)管部門(mén)提供技術(shù)支撐。本標(biāo)準(zhǔn)的制訂與實(shí)施，迎合了保健食品產(chǎn)品多樣化發(fā)展的趨勢(shì)，高通量精準(zhǔn)分析技術(shù)的建立，不僅可以有效提高分析效率，同時(shí)也有助于系統(tǒng)、全面地識(shí)別中草藥基健康產(chǎn)品中多種真菌毒素，最大可能降低檢測(cè)盲點(diǎn)，為行業(yè)提供技術(shù)支持。4.主要工作過(guò)程（1）前期基礎(chǔ)廣東省食品流通協(xié)會(huì)于2022年12月組織成立了標(biāo)準(zhǔn)起草小組，確定了工作進(jìn)度時(shí)間表，并進(jìn)行了分工。（2）標(biāo)準(zhǔn)編制組第一次工作會(huì)議2023年2月-3月，起草小組進(jìn)行了技術(shù)論證和技術(shù)規(guī)范內(nèi)容探討，確定了制定計(jì)劃、制定的基本原則、標(biāo)準(zhǔn)框架、標(biāo)準(zhǔn)基本內(nèi)容。（3）標(biāo)準(zhǔn)編制組第二次工作會(huì)議2023年4月-6月，起草小組對(duì)《保健食品中14種真菌毒素含量的高通量快速測(cè)定超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》的方法進(jìn)行全面調(diào)研，收集國(guó)際和國(guó)內(nèi)生物產(chǎn)業(yè)領(lǐng)域的標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)技術(shù)資料，結(jié)合對(duì)生產(chǎn)企業(yè)及中藥材進(jìn)行調(diào)研匯總。起草小組根據(jù)現(xiàn)實(shí)需求完成了標(biāo)準(zhǔn)初稿，并對(duì)相關(guān)企業(yè)及技術(shù)單位征求意見(jiàn)，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)初稿意見(jiàn)進(jìn)行有必要的修改。（4）編制組內(nèi)征求意見(jiàn)2023年7月-10月，比較與研究我國(guó)原國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)內(nèi)容，并結(jié)合方法的研究工作，制定出標(biāo)準(zhǔn)的討論稿，起草小組完成本方法的研究工作，根據(jù)相關(guān)參與單位修改意見(jiàn)，完成驗(yàn)證報(bào)告。收集相關(guān)驗(yàn)證樣品，將驗(yàn)證樣品分別寄往驗(yàn)證單位，進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)方法的室間驗(yàn)證工作，同時(shí)形成《標(biāo)準(zhǔn)》草案及《編制說(shuō)明》的征求意見(jiàn)稿。1、編制原則（1）通用性充分考慮我國(guó)保健食品不同中草藥基產(chǎn)品類(lèi)型（片劑、膠囊、口服液、固體飲料、即食谷物棒等）中14種真菌毒素的測(cè)定方法現(xiàn)狀和現(xiàn)實(shí)情況，明確其測(cè)定原理、測(cè)定方法步驟，適用于保健食品中14種真菌毒素的測(cè)定。（2）規(guī)范性本標(biāo)準(zhǔn)遵循GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第一部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則》和GB/T20001.4-2015《標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第4部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)》的要求進(jìn)行編寫(xiě)制訂，標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)內(nèi)容參考了與真菌毒素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)的文獻(xiàn)，參照了GB/T6379.1-2004《測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度(正確度與精密度)》第1部分總則與定義和GB/T6379.2-2004《測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度》第2部分確定標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量方法重復(fù)性與再現(xiàn)性的基本方法。（3）注意與國(guó)際接軌在制定本標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，參考了現(xiàn)有的真菌毒素的分析方法等技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)、指導(dǎo)原則，吸收了國(guó)內(nèi)外幾年來(lái)先進(jìn)的分析手段、處理過(guò)程、反應(yīng)條件等，對(duì)方法中的前處理?xiàng)l件，參數(shù)調(diào)整、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性等進(jìn)行優(yōu)化，體現(xiàn)了標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)性、科學(xué)性和先進(jìn)性。（4）協(xié)調(diào)一致性與現(xiàn)行有效的相關(guān)真菌毒素含量測(cè)定的國(guó)家法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范保持一致，對(duì)方法提要、分析步驟、結(jié)果計(jì)算和精密度等要求作出相應(yīng)的規(guī)定。2、標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容主要11個(gè)部分：范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、試樣的制備、測(cè)定步驟、結(jié)果計(jì)算和表述、靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度、資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)研究分析和驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)報(bào)告。本標(biāo)準(zhǔn)不涉及相關(guān)專(zhuān)利。五、預(yù)期達(dá)到的社會(huì)效益、對(duì)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的作中藥材受真菌毒素污染嚴(yán)重，且中藥材中受到污染的真菌毒素種類(lèi)較多，不僅限于黃曲霉毒素類(lèi)，而且真菌毒素具有耐高溫特性，行業(yè)常見(jiàn)的現(xiàn)有生產(chǎn)工藝難以去除。但目前常見(jiàn)的檢測(cè)方法前處理方法繁瑣，且一般毒素方法都采用針對(duì)性的免疫親和柱、專(zhuān)一性強(qiáng)，只針對(duì)某一種真菌毒素進(jìn)行，存在分析效率低和分析成本高的問(wèn)題,而且單一真菌毒素分析可能存在檢測(cè)盲點(diǎn)。另外，中草藥基來(lái)源的健康食品成分復(fù)雜、基質(zhì)不同，現(xiàn)有真菌毒素檢測(cè)方法也具有一定的不適宜性；因此開(kāi)展中草藥等復(fù)雜基質(zhì)下各類(lèi)劑型中多種真菌毒素高通量精準(zhǔn)分析技術(shù)研究勢(shì)在必行。本標(biāo)準(zhǔn)與目前食品、保健食品行業(yè)科技、生產(chǎn)、工藝及管理水平的適應(yīng)性強(qiáng)，標(biāo)準(zhǔn)化程度高，便于該類(lèi)保健食品企業(yè)所引用，保健食品原輔料及其他植物性食品可參照?qǐng)?zhí)行。同時(shí)，該方法的確定可以有效的監(jiān)控保健食品市場(chǎng)中14種真菌毒素的含量水平，也可作為中小企業(yè)生產(chǎn)中質(zhì)量控制，有效提高為保健食品市場(chǎng)上14種真菌毒素分析效率，同時(shí)也有助于系統(tǒng)、全面地識(shí)別中草藥基健康產(chǎn)品中多種真菌毒素，最大可能降低檢測(cè)盲點(diǎn)，為行業(yè)提供技術(shù)支持。六、采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的程度，以及與國(guó)際、國(guó)外同類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)水平的對(duì)比情況，或與測(cè)試的國(guó)外樣品、樣機(jī)的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況目前，國(guó)際與國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)方法以及文獻(xiàn)報(bào)道的真菌毒素的檢測(cè)方法主要采用薄層色譜法（TLC）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、高校液相色譜法（HPLC）和超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）等，樣品前處理主要采用固相萃取柱、多功能凈化柱、免疫親和柱以及QuEChERS方法等凈化技術(shù)。由于真菌毒素在實(shí)際樣品中通常含量較低，并且不同真菌毒素的結(jié)構(gòu)差異大、理化性質(zhì)差異大，導(dǎo)致多數(shù)分析方法只能檢測(cè)單個(gè)、單類(lèi)或少數(shù)幾種真菌毒素，不能滿足批量樣品中多種真菌毒素同時(shí)高通量檢測(cè)的需求。七、在標(biāo)準(zhǔn)體系中的位置，與現(xiàn)行相