YY-T1182-核酸擴(kuò)增檢測(cè)用試劑盒

YY/T1182-核酸擴(kuò)增檢測(cè)用試劑（盒）1范疇本原則規(guī)定了核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑（盒）【下列簡(jiǎn)稱“試劑（盒）”】的術(shù)語(yǔ)和定義、命名和分類、技術(shù)規(guī)定、實(shí)驗(yàn)辦法、標(biāo)記、標(biāo)簽和闡明書(shū)、包裝、運(yùn)輸和貯存等。本原則合用于核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑（盒）的質(zhì)量控制。核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑（盒）應(yīng)涉及核酸提取、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析試劑組份，如核酸擴(kuò)增檢測(cè)試劑（盒）內(nèi)不含有核酸提取組份，應(yīng)由生產(chǎn)公司闡明或指定提取試劑（盒）。本原則不合用于基因分型、基因芯片和病毒基因分型/突變檢測(cè)用試劑（盒）及血源篩查的試劑（盒）。2規(guī)范性引用文獻(xiàn)下列文獻(xiàn)對(duì)于本文獻(xiàn)的應(yīng)用是必不可少的。但凡注日期的引用文獻(xiàn)，僅注日期的版本合用于本文獻(xiàn)。但凡不注日期的引用文獻(xiàn)，其最新版本（涉及全部的修改單）合用于本文獻(xiàn)。GB/T21415-體外診療醫(yī)療器械生物樣品中量的測(cè)量校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性3術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義合用于本文獻(xiàn)。聚合酶鏈反映polymerasechainreaction,PCR聚合酶鏈反映或多聚酶鏈反映是一種對(duì)特定的DNA或RNA片段在體外進(jìn)行快速擴(kuò)增的辦法，由變性-退火-延伸三個(gè)基本反映環(huán)節(jié)構(gòu)成。雜交（膜上、板上）PCRhybridization含有一定同源序列的兩條核酸單鏈（DNA或RNA）能夠通過(guò)氫鍵的方式，按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則相結(jié)合，探針結(jié)合于特定核酸序列或PCR產(chǎn)物的雜交過(guò)程能夠在液相中進(jìn)行，也能夠?qū)⑵渲幸环N固定在固相載體上進(jìn)行。電泳PCRelectrophoresis根據(jù)PCR產(chǎn)物分子質(zhì)量和所帶電荷的不同在電場(chǎng)中進(jìn)行分離的技術(shù)。實(shí)時(shí)熒光PCRreal-timepolymerasechainreaction,PCR在PCR過(guò)程中運(yùn)用熒光染料釋放的熒光定量的變化直接反映出PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，熒光信號(hào)變量與擴(kuò)增產(chǎn)物變量成正比，并通過(guò)對(duì)熒光的采集和分析以達(dá)成對(duì)原始模板量進(jìn)行分析的PCR。注：在每個(gè)循環(huán)中檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物與否可被檢測(cè)。測(cè)量系統(tǒng)的線性linearityofameasuringsystem給出的測(cè)量成果與樣品中被測(cè)量的值直接成比例的能力。注1：對(duì)與體外診療醫(yī)療器械，線性相有關(guān)測(cè)量成果在一給定測(cè)量范疇經(jīng)校正或線性化后來(lái)的測(cè)量示值。注2：線性通過(guò)測(cè)量包含被測(cè)量已知配方或其間相對(duì)關(guān)系（不必絕對(duì)懂得）的樣原來(lái)評(píng)定。當(dāng)測(cè)量成果相對(duì)被測(cè)量絕對(duì)或相對(duì)數(shù)值作圖時(shí)，所畫(huà)曲線對(duì)直線的符合程度及線性度的量度。樣本線性linearityofseriesdilutedsamples對(duì)高濃度樣本進(jìn)行系列稀釋，得到的檢測(cè)濃度對(duì)數(shù)值與稀釋比例之間有關(guān)。分析特異性analyticalspecificity測(cè)量程序只測(cè)量被測(cè)量的能力。測(cè)量精密度precisionofmeasurement在規(guī)定條件下，互相獨(dú)立的測(cè)量成果間的一致程度。注1：測(cè)量精密度不能用于被測(cè)量有關(guān)的數(shù)字值表達(dá)，在指定目的下只能以“足夠”或“局限性”進(jìn)行描述。注2：精密度的程度普通與精密度相反的測(cè)量不精密度統(tǒng)計(jì)量表達(dá)，如原則差和變異系數(shù)。注3：給定測(cè)量程序的“精密度”能夠根據(jù)特定的精密度條件進(jìn)行分類?！爸貜?fù)性”與基本不變的條件有關(guān)，常稱為“序列內(nèi)精密度”或“批內(nèi)精密度”?！爸噩F(xiàn)性”與條件變化有關(guān)，如：時(shí)間、不同實(shí)驗(yàn)室、操作者和測(cè)量系統(tǒng)（涉及不同校準(zhǔn)和試劑批號(hào)）。計(jì)量學(xué)溯源性metrologicaltraceability通過(guò)一條含有規(guī)定不擬定度的不間斷的比較鏈，使測(cè)量成果或測(cè)量原則的值能夠與規(guī)定的參考原則，普通是與國(guó)標(biāo)或國(guó)際原則聯(lián)系起來(lái)的特性。注1：通過(guò)校準(zhǔn)傳遞方案擬定的（參考）測(cè)量程序?qū)崿F(xiàn)每一步比較。注2：溯源性有幾個(gè)類型。本原則使用術(shù)語(yǔ)“計(jì)量學(xué)溯源性”。檢測(cè)限detectionlimit,limitofdetection樣品中以一定概率可被聲明與零有差別的被測(cè)量的最低值。注1:也被描述為“最低檢測(cè)限”（minimumdetectableconcentration）(或劑量或值)。注2：有時(shí)被不對(duì)的地指作分析敏捷度。注3：本原則中的最低檢測(cè)限為區(qū)別于零的不低于95%可信區(qū)間的最低濃度。定量限limitofquantitation給定分析程序能定量檢測(cè)分析物的最小濃度或量。閾值循環(huán)數(shù)Ct（Cp）cyclethreshold,crossingpoint實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程中，反映管內(nèi)的熒光信號(hào)達(dá)成指數(shù)擴(kuò)增時(shí)經(jīng)歷的循環(huán)周期數(shù)。重要的計(jì)算方式是以擴(kuò)增過(guò)程前3到15個(gè)循環(huán)的熒光值的10倍原則差為閾值，當(dāng)熒光值超出閾值時(shí)的循環(huán)數(shù)則為閾值循環(huán)數(shù)（Ct）?；蛐蚲enotype一種有機(jī)體的遺傳構(gòu)成，即明確界定具體等位基因位點(diǎn)的基因組。內(nèi)標(biāo)internalcontrol在同一反映管中與靶序列共同擴(kuò)增的一段非靶序列分子，其目的是鑒別儀器故障、試劑因素、聚合酶活性因素或樣本中存在克制物等造成的成果不抱負(fù)的因素。4命名和分類命名***核酸（DNA或RNA）擴(kuò)增檢測(cè)試劑（盒）(辦法學(xué))。分類可按以下方式分類：根據(jù)核酸擴(kuò)增檢測(cè)分析采用的辦法學(xué)原理分為：實(shí)時(shí)熒光PCR試劑（盒）、RT-PCR試劑（盒）、PCR雜交檢測(cè)試劑（盒）、PCR-電泳法檢測(cè)試劑（盒）等。根據(jù)對(duì)實(shí)驗(yàn)成果的鑒定可分為：定量和定性。5技術(shù)規(guī)定外觀外觀應(yīng)滿足下列條件：試劑（盒）應(yīng)符合生產(chǎn)公司規(guī)定的外觀規(guī)定；試劑（盒）應(yīng)組份完全，包裝外觀清潔、無(wú)泄漏、無(wú)破損；標(biāo)志、標(biāo)簽筆跡清晰。溯源性生產(chǎn)公司應(yīng)根據(jù)GB/T21415-及有關(guān)規(guī)定提供所用核酸原則品的來(lái)源、溯源的賦值過(guò)程和對(duì)應(yīng)規(guī)定，以及測(cè)量不擬定度等內(nèi)容。測(cè)量系統(tǒng)的線性樣本線性線性有關(guān)系數(shù)︱r︱≧。試劑（盒）系列原則品線性試劑（盒）原則品應(yīng)不少于4個(gè)濃度，宜包含線性范疇上限和下限，線性有關(guān)系數(shù)︱r︱≧。精確度定性試劑對(duì)陽(yáng)性參考品進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)成果應(yīng)為陽(yáng)性。定量試劑精確度應(yīng)符合以下規(guī)定之一：檢測(cè)國(guó)標(biāo)品（或參考品）/國(guó)際原則品（或參考品），絕對(duì)偏差不超出±個(gè)對(duì)數(shù)數(shù)量級(jí)；回收實(shí)驗(yàn)：回收率在85%~115%范疇內(nèi)。分析特異性分析特異性應(yīng)滿足下列規(guī)定：檢測(cè)一定數(shù)量的不含被測(cè)物的樣本，成果應(yīng)為陰性；檢測(cè)可能引發(fā)非特異反映的樣本，如與被測(cè)物種屬相近、感染部位相似或感染癥狀相似的其它樣本，成果應(yīng)為陰性。亞型檢測(cè)能力檢測(cè)生產(chǎn)公司規(guī)定試劑檢測(cè)范疇內(nèi)國(guó)內(nèi)常見(jiàn)亞型，應(yīng)能檢出。注：只有當(dāng)分析物含有不同亞型時(shí)應(yīng)滿足此項(xiàng)規(guī)定。精密度定性試劑批內(nèi)精密度應(yīng)符合Ct值的變異系數(shù)（CV,%）≦5%定量試劑批內(nèi)精密度應(yīng)符合檢測(cè)濃度對(duì)數(shù)值的變異系數(shù)（CV,%）≦5%。檢測(cè)限/定量限定性試劑檢測(cè)限應(yīng)符合生產(chǎn)公司聲稱的值。定量試劑定量限應(yīng)符合生產(chǎn)公司聲稱的值。合用時(shí)，檢測(cè)限應(yīng)符合生產(chǎn)公司聲稱的值。干擾物質(zhì)對(duì)血液樣本，檢測(cè)含有生產(chǎn)公司規(guī)定濃度的干擾物質(zhì)如血紅素及其代謝產(chǎn)物、脂血等樣本，及含過(guò)量EDTA抗凝劑的樣本，應(yīng)符合生產(chǎn)公司規(guī)定的規(guī)定。穩(wěn)定性可選用下列辦法進(jìn)行驗(yàn)證：效期穩(wěn)定性：生產(chǎn)公司應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的使用期。取到效期后的樣品檢測(cè)測(cè)量線性、精確度、分析特異性、亞型檢測(cè)能力、精密度、檢測(cè)限/定量限、干擾物質(zhì)，應(yīng)分別符合、、、、、、的規(guī)定。熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：測(cè)量線性、精確度、分析特異性、亞型檢測(cè)能力、精密度、檢測(cè)限/定量限、干擾物質(zhì)，應(yīng)分別符合、、、、、、的規(guī)定。注1：熱穩(wěn)定性不能用于推導(dǎo)產(chǎn)品使用期，除非是采用基于大量的穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)建立的推導(dǎo)公式。注2：根據(jù)產(chǎn)品特性可選擇a),b)辦法的任意組合，但所選用辦法宜能驗(yàn)證產(chǎn)品的穩(wěn)定性，以確保使用期內(nèi)產(chǎn)品性能符合原則規(guī)定。6實(shí)驗(yàn)辦法外觀在自然光下目視檢查外觀，成果應(yīng)符合的規(guī)定。溯源性生產(chǎn)公司提供的溯源性資料應(yīng)符合的規(guī)定。測(cè)量系統(tǒng)的線性樣本線性在生產(chǎn)公司規(guī)定的線性范疇內(nèi)，取靠近線性范疇上限的高值樣本按一定比例（例：5倍或10倍）稀釋為最少5種濃度，其中低值濃度樣本需靠近線性范疇的下限。按試劑（盒）闡明書(shū)進(jìn)行操作，將每一濃度樣本重復(fù)檢測(cè)3孔，計(jì)算每一濃度的對(duì)數(shù)值和Ct均值，以濃度的對(duì)數(shù)值為Y，Ct均值為X,進(jìn)行線性擬合，計(jì)算其線性有關(guān)系數(shù)r,成果應(yīng)符合的規(guī)定。試劑（盒）系列原則品線性按試劑（盒）闡明書(shū)進(jìn)行操作，試劑（盒）中每一原則品重復(fù)檢測(cè)3孔，計(jì)算每一原則品的標(biāo)示濃度的對(duì)數(shù)值與Ct值的均值，以濃度的對(duì)數(shù)值為Y,Ct均值為X,進(jìn)行線性擬合，計(jì)算其線性有關(guān)系數(shù)r，成果應(yīng)符合的規(guī)定。精確度定性試劑對(duì)陽(yáng)性參考品進(jìn)行測(cè)定，檢測(cè)成果應(yīng)符合的規(guī)定。定量試劑建議按以下優(yōu)先次序，采用下列辦法之一測(cè)試定量試劑（盒）的精確度，應(yīng)符合的規(guī)定。絕對(duì)偏差用試劑盒對(duì)參考物質(zhì)或有證參考物質(zhì)（CRM）和對(duì)應(yīng)的參考測(cè)量程序按照符合GB/T21415-規(guī)定的溯源次序進(jìn)行測(cè)試，重復(fù)測(cè)定3次，取測(cè)試成果均值（M）,按公式（1）計(jì)算絕對(duì)偏差（B）,成果應(yīng)符合的規(guī)定?；蛴糜袇⒖嫁k法定值的高、中、低3個(gè)濃度的樣本（可參考EP6-A的規(guī)定適宜添加被測(cè)物，以獲得高濃度的樣品）對(duì)試劑（盒）進(jìn)行測(cè)試，每個(gè)濃度樣品重復(fù)測(cè)定3次，分別取測(cè)試成果均值，按公式（1）計(jì)算絕對(duì)偏差，成果應(yīng)符合的規(guī)定。B=M-T…………..(1)式中：B-絕對(duì)偏差；M-測(cè)試成果均值；T-參考物質(zhì)標(biāo)示值，或各濃度人血清定值。b)回收實(shí)驗(yàn)在樣品中加入一定體積原則溶液（原則溶液體積與樣本體積比應(yīng)不不不大于1:20，或其體積比不會(huì)產(chǎn)生基質(zhì)的變化，加入原則溶液后樣品總濃度必須在試劑（盒）測(cè)定線性范疇內(nèi)），重復(fù)測(cè)定3次，取平均值，按公式（2）計(jì)算回收率，成果應(yīng)符合的規(guī)定。R=c×(V0+V)-c0×V0×100%………………..(2)V×cs式中：R-回收率；V-加入原則溶液的體積；V0-樣品的體積c-樣品加入原則溶液后的測(cè)定濃度c0-樣品的測(cè)定濃度cs-原則溶液的濃度分析特異性檢測(cè)可能引發(fā)非特異反映的樣本，如與被測(cè)物種屬相近、感染部位相似或感染癥狀相似的其它樣本，成果應(yīng)符合的規(guī)定。亞型檢測(cè)能力檢測(cè)生產(chǎn)公司規(guī)定實(shí)際檢測(cè)范疇內(nèi)國(guó)內(nèi)常見(jiàn)亞型樣本，樣本個(gè)數(shù)應(yīng)最少一種亞型有一種樣本，檢測(cè)成果應(yīng)符合的規(guī)定。精密度定性試劑（盒）用最少高、低2個(gè)濃度水平的樣本各重復(fù)檢測(cè)10次，計(jì)算Ct值變異系數(shù)（CV,%）,成果應(yīng)符合的規(guī)定。定量試劑（盒）用最少高、低2個(gè)濃度水平的樣本各重復(fù)檢測(cè)10次，其濃度對(duì)數(shù)值變異系數(shù)（CV,%）應(yīng)符合的規(guī)定。檢測(cè)限/定量限定性試劑檢測(cè)生產(chǎn)公司生產(chǎn)濃度值的樣本20次，最少17次檢測(cè)成果符合規(guī)定。定量試劑檢測(cè)生產(chǎn)公司聲稱濃度值的樣本25次，最少22次檢測(cè)成果符合規(guī)定。干擾物質(zhì)按照生產(chǎn)公司規(guī)定的辦法進(jìn)行檢測(cè)，成果應(yīng)符合的規(guī)定。穩(wěn)定性可選用下列辦法進(jìn)行驗(yàn)證：a)效期穩(wěn)定性：取到效期后的樣品進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)符合的規(guī)定。b)熱穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取使用期內(nèi)樣品按生產(chǎn)公司規(guī)定的辦法進(jìn)行檢測(cè)，應(yīng)符合的規(guī)定。7標(biāo)記、標(biāo)簽和使用闡明書(shū)標(biāo)記、標(biāo)簽試劑（盒）外包裝上的標(biāo)記、標(biāo)簽應(yīng)最少涉及下列內(nèi)容：a)產(chǎn)品名稱、型號(hào)或規(guī)格；b)生產(chǎn)公司名稱、地址、聯(lián)系方式；c)醫(yī)療器械注冊(cè)證書(shū)編號(hào)；d)產(chǎn)品原則編號(hào)；e)重要成分；f)產(chǎn)品用途、合用范疇；g)貯存辦法；h)生產(chǎn)日期或批號(hào)，使用期限。使用闡明書(shū)試劑（盒）包裝內(nèi)應(yīng)放置使用闡明書(shū)，使用闡明書(shū)應(yīng)最少涉及下列內(nèi)容：a)產(chǎn)品名稱、型號(hào)或規(guī)格；b)生產(chǎn)公司名稱、地址、聯(lián)系方式及售后服務(wù)單位；c)《醫(yī)療器械生產(chǎn)公司許可證》編號(hào)、醫(yī)療器械注冊(cè)證書(shū)編號(hào)；d)產(chǎn)品原則編號(hào)；e)重要成分；f)產(chǎn)品用途、合用范疇；g)注意事項(xiàng)；h)具體使用闡明；i)貯存辦法；j)生產(chǎn)日期或批號(hào)，使