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實(shí)驗(yàn)六腸道桿菌的檢驗(yàn)(一)目的要求:1熟悉腸道桿菌的分離鑒定程序及臨床意義;2掌握腸道桿菌的生化反應(yīng)特點(diǎn)和數(shù)值鑒定方法;3掌握鑒定腸道桿菌的生化反應(yīng)試驗(yàn)和血清學(xué)試驗(yàn)的操作方法和結(jié)果分析實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(第一次實(shí)驗(yàn)):1.錄像:腸道桿菌。2.制備Mac瓊脂平板,SS瓊脂平板:
(每人1個(gè)平板,Mac板或者SS板)3.大腸埃希菌、變形桿菌接種Mac瓊脂平板;乙型副傷寒沙門菌、福氏志賀菌接種SS瓊脂平板(每人接種一種菌,每組接種4種菌)腸道細(xì)菌(主要為桿菌)的分離鑒定程序介紹
糞便標(biāo)本
直接分離
SS瓊脂平板或EMB平板副溶血性弧菌選擇培養(yǎng)基挑選無(wú)色小菌落
雙糖鐵培養(yǎng)基進(jìn)一步生化反應(yīng)血清學(xué)試驗(yàn)菌落形態(tài)生化反應(yīng)藥敏試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告腸道選擇培養(yǎng)基的制備Mac瓊脂平板/麥康凱瓊脂平板(MacConkeyAgar,MAC)
營(yíng)養(yǎng)成分(蛋白胨/Nacl);成分:抑雜菌劑(膽鹽)
;
乳糖(初步區(qū)分致病菌非致病菌);酸堿指示劑(中性紅,酸為紅色堿為無(wú)色)
制作:溶解培養(yǎng)基——消毒滅菌——制備平皿腸道選擇培養(yǎng)基的制備SS瓊脂平板(SalmonellaShigellaagar)
營(yíng)養(yǎng)成分(蛋白胨/Nacl);成分:抑雜菌劑(膽鹽/煌綠/結(jié)晶紫)
;
乳糖(初步區(qū)分致病菌非致病菌);枸櫞酸鐵胺和硫代硫酸鈉(檢測(cè)H2S)酸堿指示劑(如中性紅,酸為紅色堿為無(wú)色)
制作:溶解培養(yǎng)基——消毒滅菌——制備平皿Mac固體培養(yǎng)基SS固體培養(yǎng)基(已制備高壓消毒)(已制備高壓消毒)加熱熔化加熱熔化傾注平板20個(gè)傾注平板20個(gè)
保證每人一個(gè)Mac或SS平版(每實(shí)驗(yàn)桌保證兩種平板)細(xì)菌接種(下次看結(jié)果):1.菌種:大腸埃希菌、變形桿菌——Mac;乙型副傷寒沙門菌、福氏志賀菌——SS
(注意:每4人一組;每組應(yīng)該接種四種細(xì)菌;每個(gè)平皿標(biāo)記好培養(yǎng)基/接種菌/操作者)2.方法:連續(xù)或分區(qū)劃線接種3.注意點(diǎn):做好標(biāo)記!
嚴(yán)格無(wú)菌操作;
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