近交系大、小鼠遺傳檢測(cè)方法研究進(jìn)展

近交系大、小鼠遺傳檢測(cè)方法研究進(jìn)展

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)研究的成功。采用高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥學(xué)等實(shí)驗(yàn)研究,不但能排除實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身對(duì)實(shí)驗(yàn)研究的影響,而且也能得到準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。近交系動(dòng)物經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系內(nèi)所有個(gè)體都可追溯到起源于第20代或以后代數(shù)的一對(duì)共同祖先。經(jīng)連續(xù)20代以上親代與子代交配與全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系數(shù)應(yīng)大于99%。同一品系內(nèi)的動(dòng)物基因高度純合,基因純合度已達(dá)到98%以上。近交系小鼠是生物醫(yī)學(xué)科研中最常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一,約占所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的80%。在長(zhǎng)期保種、育種過程及繁殖生產(chǎn)中,近交系動(dòng)物可能發(fā)生遺傳污染或遺傳突變,導(dǎo)致該種群動(dòng)物的基因型發(fā)生改變。為確保其基因的純合性及品系特征的延續(xù)性,定期的遺傳監(jiān)測(cè)非常必要。遺傳檢測(cè)是遺傳監(jiān)測(cè)的重要內(nèi)容之一,是指通過形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)等方法來測(cè)定動(dòng)物品系的遺傳組成是否發(fā)生變化。本文就近交系大、小鼠遺傳檢測(cè)方法研究進(jìn)展作一綜述。傳統(tǒng)的小鼠遺傳檢測(cè)方法有形態(tài)學(xué)方法、免疫學(xué)方法、生物化學(xué)方法。這些方法并不能很好地檢測(cè)出各亞系之間的遺傳差異。隨著一系列分子遺傳標(biāo)記的發(fā)現(xiàn),分子生物學(xué)檢測(cè)方法被應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳檢測(cè)。目前我國(guó)有關(guān)近交系小鼠、大鼠遺傳監(jiān)測(cè)的國(guó)標(biāo)上對(duì)生化標(biāo)記基因檢測(cè)法、皮膚移植法做了詳細(xì)介紹。同時(shí)注明:除以上兩種方法外,還可選用其它方法對(duì)近交系動(dòng)物進(jìn)行遺傳質(zhì)量檢測(cè),如毛色基因測(cè)試、免疫標(biāo)記基因檢測(cè)、下頜骨測(cè)量法、染色體標(biāo)記檢測(cè)(Cytogenetictechniques)、DNA多態(tài)性檢測(cè)法(DNAmarkers)等。1社會(huì)學(xué)方法1.1毛發(fā)基因檢測(cè)方法coatcoordina1.2下頜形態(tài)分析動(dòng)物的骨骼形態(tài)具有高度的遺傳性,小鼠的下頜骨亦如此,并且可能是由多基因位點(diǎn)決定的。各近交系小鼠之間,下頜骨的形態(tài)都具有顯著差異。采用下頜骨形態(tài)分析技術(shù)進(jìn)行小鼠和大鼠的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè),已為世界公認(rèn)。該方法對(duì)明確和檢查由遺傳突變或污染引起的亞系間差異,是一種靈敏、有效的方法。它監(jiān)測(cè)了大量的基因位點(diǎn),但所測(cè)基因的數(shù)量及其在染色體上的位置還不詳細(xì)。1.3小鼠染色體的遺傳標(biāo)記方法選擇染色體標(biāo)顯帶法是用細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù),對(duì)每一條染色體著絲點(diǎn)區(qū)域DNA物質(zhì)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。該區(qū)域富含A-T堿基對(duì)的隨體DNA,包容著大量的基因序列。又由于近交系小鼠在染色體著絲點(diǎn)區(qū)域都有其自身的特征,故提供了有力的標(biāo)記,從而在更多基因群的水平上達(dá)到監(jiān)測(cè)目的。近交系小鼠染色體,全部為端著絲點(diǎn)染色體,大小、形態(tài)近似,染色體標(biāo)記必須以染色體臂上由異源染色質(zhì)和同源染色質(zhì)所能顯示的深淺或亮暗帶紋來識(shí)別每一條染色體,確定其核型排列、染色體序號(hào),進(jìn)而識(shí)別每一號(hào)染色體的著絲點(diǎn)特征,即染色體遺傳標(biāo)記。目前有兩種方法:其一是G-C帶法,其二是Q-H熒光帶法。前者需要的條件低,普通光學(xué)顯微鏡即可分辨。但統(tǒng)一細(xì)胞需經(jīng)兩次分帶處理,故重復(fù)性較差,需要相當(dāng)熟練的操作,后者需要使用熒光顯微鏡,優(yōu)點(diǎn)是一次染色,成功率高,重復(fù)性好。2免疫方法2.1察同系異體皮膚移植物同系異體皮膚移植法,是利用免疫系統(tǒng)識(shí)別“自己”與“異己”的特性,通過觀察同系異體皮膚移植物能否接受以判定組織相容性基因的異同,從而進(jìn)行近交系動(dòng)物遺傳監(jiān)測(cè)。該法操作簡(jiǎn)單、檢查范圍較廣。缺點(diǎn)是:只能測(cè)出近交系小鼠中的基因型是否一致,而不能測(cè)出各品系是否保持著原有的遺傳特性;需要觀察較長(zhǎng)時(shí)間。2.2近交系小鼠的h-2單倍型檢測(cè)在免疫遺傳學(xué)中,能引起強(qiáng)烈的移植排斥反應(yīng)的抗原系統(tǒng)稱為主要組織相容性抗原系統(tǒng)。小鼠的主要組織相容性系統(tǒng)稱為H-2復(fù)合體(MajorHistocompatibilityComplex,H-2Complex),是定位于小鼠第17號(hào)染色體上的一個(gè)區(qū)段,是決定小鼠免疫遺傳特性最主要的基因群,由K、I、S、G、D和TL等6個(gè)個(gè)基因區(qū)段組成,其中以K、D基因區(qū)段產(chǎn)物的免疫反應(yīng)性最強(qiáng),最具決定性。近交系小鼠中不同的品系其H-2復(fù)合體組成不同,表現(xiàn)在H-2單倍型(Haplotype)的不同。H-2單倍型可以通過抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行判別。單克隆抗體能夠特異性地與抗原進(jìn)行反應(yīng),具有專一性,能夠識(shí)別出對(duì)應(yīng)的抗原物。利用H-2抗原的D區(qū)和K區(qū)所對(duì)應(yīng)的單抗,通過微量細(xì)胞毒法可以判定D區(qū)和K區(qū)的類型,實(shí)施近交系小鼠的免疫遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)。免疫標(biāo)記基因檢測(cè)就是應(yīng)用血凝技術(shù)和細(xì)胞毒檢驗(yàn)來檢測(cè)包括H-2K、H-2D、Lyb、Thy等免疫學(xué)細(xì)胞抗原標(biāo)記。小鼠MHC—H-2單倍型的檢測(cè)技術(shù)在不斷發(fā)展和完善,從多價(jià)抗血清細(xì)胞毒法,到單價(jià)抗血清微量細(xì)胞毒法,到目前的單克隆抗體微量細(xì)胞毒檢測(cè)技術(shù),其檢測(cè)速度更快,從采樣到檢出結(jié)果約3h,操作更簡(jiǎn)單,目前應(yīng)用商品化的單克隆抗體,結(jié)果更準(zhǔn)確,準(zhǔn)確率達(dá)95%以上。該方法中專一性很強(qiáng),較生化標(biāo)記基因法復(fù)雜,檢查的是特定的遺傳位點(diǎn),所需要的MHC特殊位點(diǎn)的異型抗血清不宜得到。但為了彌補(bǔ)皮膚移植法耗時(shí)長(zhǎng)的不足,新國(guó)標(biāo)征求意見稿中增加了近交系小鼠H-2單倍型檢測(cè)方法-微量細(xì)胞毒法。馬麗穎等根據(jù)近交系小鼠的H-2基因序列設(shè)計(jì)相應(yīng)的探針,通過Southern雜交檢測(cè)可以確定近交系小鼠的基因型,得出了跟微量細(xì)胞毒法一致的結(jié)果。該檢測(cè)方法簡(jiǎn)便、易行,檢測(cè)結(jié)果客觀,可以應(yīng)用于近交系小鼠的遺傳檢測(cè)。3生化標(biāo)記基因檢測(cè)法檢測(cè)細(xì)胞外在分子身份證上的基因變異各種近交系小鼠、大鼠在生化多態(tài)性位點(diǎn)上都具有各自特定的等位基因,可作為遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)的依據(jù)。生化標(biāo)記基因檢測(cè)法就是根據(jù)同工酶或異構(gòu)蛋白的變化來推測(cè)相應(yīng)的基因變化。目前我國(guó)國(guó)標(biāo)上,近交系小鼠選擇位于10個(gè)染色體上的13個(gè)生化位點(diǎn),近交系大鼠選擇7個(gè)生化位點(diǎn),作為遺傳檢測(cè)的生化標(biāo)記。ICLAS監(jiān)測(cè)中心從19個(gè)標(biāo)準(zhǔn)遺傳標(biāo)記中選擇15個(gè),檢查品系的遺傳背景。生化標(biāo)記基因檢測(cè)法通過表型變化來推測(cè)基因變化,較形態(tài)學(xué)進(jìn)了一大步。該法具有速度快、所需試樣量小等特點(diǎn)。不足之處是需要一定的設(shè)備和較貴的試劑,檢測(cè)的位點(diǎn)局限,多是單基因遺傳的位點(diǎn),不能反映動(dòng)物的整個(gè)遺傳概貌;結(jié)果不易分析判讀。4基因核酸檢測(cè)近交系小鼠由于其特殊的繁育過程,最終導(dǎo)致品系內(nèi)個(gè)體間(除雌雄間存在著有無Y染色體的差別外)遺傳構(gòu)成的多樣性完全消失,即在同一近交系內(nèi)不同個(gè)體的基因型(除雌雄間由Y染色體決定外)在個(gè)體間完全相同,而不同近交系間,因始建時(shí)個(gè)體來源不同,所以最終品系間存在基因型的不同。分子生物學(xué)技術(shù)可以直接檢驗(yàn)動(dòng)物基因組核酸的改變。隨著一系列分子遺傳標(biāo)記的發(fā)現(xiàn),分子生物學(xué)技術(shù)逐步應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳檢測(cè),如隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性(RandomamplifiedpolymorphicDNA,RAPD)、PCR單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)、微衛(wèi)星(Microsatellite)[21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41]和DNA指紋(DNAFingerprints)[26,42,43,44,45,46]等。分子生物學(xué)方法為近交系動(dòng)物的遺傳監(jiān)測(cè)提供了直接客觀的途徑。聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)能夠快速有效地分析特異DNA片段和序列,被廣泛應(yīng)用于DNA多態(tài)性檢測(cè)中。4.1rapd分析RAPD不需預(yù)先知道目標(biāo)序列,可隨機(jī)擴(kuò)增DNA片段,檢測(cè)個(gè)體之間的多態(tài)性,是檢測(cè)DNA概貌的一個(gè)強(qiáng)有力的技術(shù)。RAPD-PCR可用于分析同一群體不同個(gè)體之間和同一物種不同群體之間的遺傳相關(guān)性和變異性。RAPD通過多個(gè)引物擴(kuò)增情況給出近交系小鼠基因組的信息。當(dāng)用同一條引物擴(kuò)增不同的品系,或者同一品系用不同的引物擴(kuò)增時(shí),其結(jié)果均有差異。差異的程度因引物而異,因品系而異。如果不同的個(gè)體用同一條引物擴(kuò)增,那么其擴(kuò)增帶型的相似程度反映了這些不同個(gè)體之間遺傳背景組成的相似程度。當(dāng)用同一條引物擴(kuò)增同一近交系中不同個(gè)體時(shí),它們的擴(kuò)增帶型應(yīng)該非常一致,因?yàn)榻幌凳墙?jīng)近交20帶以上培育而成,每個(gè)個(gè)體基因位點(diǎn)均達(dá)到了98%以上的純合。如果其中某一個(gè)體多個(gè)引物的擴(kuò)增帶型不同于同一近交系中其他個(gè)體時(shí)。那么此個(gè)體的遺傳背景可能已有所改變。王洪等六個(gè)品系近交系小鼠進(jìn)行了RAPD分析,結(jié)果顯示RAPD方法是一種有效的近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳檢測(cè)手段?？蓪?duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行種間分析和種內(nèi)分析。RAPD技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求十分嚴(yán)格,RAPD圖譜受諸多因素影響,可比性差,重復(fù)性差,這也是RAPD技術(shù)尚不成熟,需要完善的地方。4.2snp的擴(kuò)增、鑒定和分析SNP是指在基因組水平上由于單個(gè)核苷酸位置上存在轉(zhuǎn)換、顛換、插入、缺失等變異所引起的DNA序列多態(tài)性。近年來,單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)技術(shù)被用于近交系小鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè),并建立了近交系小鼠的SNP數(shù)據(jù)庫(kù)。Petkov等選擇28個(gè)SNP標(biāo)記,這些標(biāo)記覆蓋了所有小鼠常染色體和X染色體,能區(qū)分所有的近交系小鼠,提示該方法是一個(gè)快速、可靠及高效的遺傳監(jiān)測(cè)方法。國(guó)內(nèi),胡培麗等將基于等位基因?qū)Ｒ恍詳U(kuò)增的單管雙向等位基因?qū)Ｒ恍詳U(kuò)增(single-tubebi-directionalallelespecificamplification,SB-ASA)方法用于近交系小鼠遺傳質(zhì)量檢測(cè),發(fā)現(xiàn)本方法能夠快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)出小鼠基因組中的SNP,通過多個(gè)SNP位點(diǎn)綜合分析,可以有效地鑒別已有的近交系小鼠。SNP主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。SNP所表現(xiàn)的多態(tài)性只涉及到單個(gè)堿基的變異,具有密度高、代表性、遺傳穩(wěn)定性等特點(diǎn),能夠全面地反映基因組的遺傳及變異情況。4.3微衛(wèi)星位點(diǎn)多態(tài)性法人和小鼠基因組中存在大量寡核甘酸串聯(lián)重復(fù)序列,重復(fù)單位為2～6bp,重復(fù)次數(shù)在10～60次,這些重復(fù)序列稱為微衛(wèi)星,又稱為短小串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeats,STR),這些重復(fù)序列的DNA長(zhǎng)度取決于重復(fù)序列的數(shù)量。微衛(wèi)星DNA具有極高的多態(tài)性,按孟德爾遺傳規(guī)律遺傳。其突出特點(diǎn)是基因位點(diǎn)多、多態(tài)性高、擴(kuò)增片段短,在實(shí)驗(yàn)小鼠品系鑒定中實(shí)驗(yàn)價(jià)值較高。近交系小鼠中微衛(wèi)星長(zhǎng)度變化的發(fā)生率很低,所以微衛(wèi)星的長(zhǎng)度可以作為某一品系近交系小鼠的恒定參數(shù),而在不同近交系之間微衛(wèi)星的長(zhǎng)度則有差異,因此檢測(cè)微衛(wèi)星位點(diǎn)可用作近交系小鼠的遺傳檢測(cè)。微衛(wèi)星DNA多態(tài)性的檢測(cè)方法有:DNA指紋圖譜法、變性聚丙烯酸胺凝膠電泳檢測(cè)法、毛細(xì)管電泳法、PCR結(jié)合限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析法(PCR-RFLP)、多重PCR微衛(wèi)星熒光標(biāo)記全自動(dòng)基因組掃描等。近交系大小鼠遺傳監(jiān)測(cè)中,變性聚丙烯酸胺凝膠電泳檢測(cè)法應(yīng)用較多。該法根據(jù)微衛(wèi)星位點(diǎn)兩端的互補(bǔ)序列(側(cè)翼序列)合成引物,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,由于重復(fù)次數(shù)不同而形成長(zhǎng)度不同的片段,用高分辨的變性聚丙烯酞胺凝膠電泳來分類這些長(zhǎng)度不同的片段,最后用溴化乙錠、AgNO3、亞甲基藍(lán)等染色,就可表現(xiàn)出不同的電泳帶型,從而判斷是否發(fā)生遺傳污染或遺傳變異。在同一品系內(nèi),如果電泳表現(xiàn)為一條帶,且泳動(dòng)距離一致,則所檢動(dòng)物在該基因座上是純合的,表明沒有發(fā)生遺傳污染或遺傳變異。如果電泳呈現(xiàn)2條帶(應(yīng)注意排除影子帶)或泳動(dòng)距離不一致,即出現(xiàn)多態(tài)性,表明基因座是雜合或發(fā)生了遺傳變異。聚丙烯酰胺凝膠分辨率高,可以分辨出長(zhǎng)度差為1～2bpDNA片段。該法的最大的問題是“影子帶”的問題,一般每一條目標(biāo)帶的后方總可以見到“影子帶”,很難去除,嚴(yán)重干擾了試驗(yàn)結(jié)果的判斷,另此外方法比較復(fù)雜,較難控制。微衛(wèi)星DNA不但具有高度的多態(tài)性,而且有豐富的可供個(gè)體識(shí)別標(biāo)志的微衛(wèi)星基因座(小鼠基因圖譜已包含了7377個(gè)微衛(wèi)星DNA,其中有6580個(gè)顯示多態(tài)性,且這些微衛(wèi)星位點(diǎn)均勻地分布于全部染色體上,能夠更全面地反映基因組的遺傳及變異情況)。近年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記方法在近交系小鼠遺傳分析中的應(yīng)用進(jìn)行了廣泛的研究,并篩選出一些有鑒別意義的微衛(wèi)星位點(diǎn)[32,33,34,35,36,37,38,39]。研究表明,微衛(wèi)星位點(diǎn)在不同品系的小鼠之間具有多態(tài)性,在不同的亞系之間也有具有多態(tài)性?？刹捎梦⑿l(wèi)星標(biāo)記方法區(qū)分不同的近交小鼠品系、近交小鼠亞系。微衛(wèi)星多態(tài)性分析能夠快速、經(jīng)濟(jì)地對(duì)近交系小鼠進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)。李瑞生等將微衛(wèi)星位點(diǎn)DNA多態(tài)性分析運(yùn)用于近交系大鼠的遺傳監(jiān)測(cè)中,同樣發(fā)現(xiàn),大鼠的微衛(wèi)星位點(diǎn)具有顯著多態(tài)性:不同品系個(gè)體之間具有多態(tài)性;不同地區(qū)同一品系的不同個(gè)體之間也存在一定的差異。該方法為近交系大鼠的遺傳背景監(jiān)測(cè)提供了可靠的信息。微衛(wèi)星位點(diǎn)的突出特點(diǎn)是基因位點(diǎn)多,多態(tài)性高、擴(kuò)增片段短,能夠反映出動(dòng)物的遺傳概貌,檢測(cè)時(shí)只需剪小段尾巴提取DNA,而不必處死小鼠,并且方法簡(jiǎn)便,易于推廣。然而,目前我國(guó)微衛(wèi)星在大、小鼠中進(jìn)行的研究,僅限于不同的實(shí)驗(yàn)室各自選用不同的微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)近交系大、小鼠進(jìn)行多態(tài)性分析,由于所選的微衛(wèi)星位點(diǎn)不盡相同,缺乏一系列統(tǒng)一的評(píng)估指標(biāo),與實(shí)際應(yīng)用還有很大距離。在我國(guó)尚無微衛(wèi)星方法檢測(cè)大、小鼠遺傳質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)方法和判定標(biāo)準(zhǔn)。此外,微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記技術(shù)在運(yùn)用過程中受到一些因素的制約:微衛(wèi)星的篩選過程繁雜;對(duì)微衛(wèi)星DNA的檢測(cè)需要高分辨率的檢測(cè)方法,理論上最高分辨率應(yīng)能夠分辨出一個(gè)堿基的差別。目前常用的PAGE銀染技術(shù)雖能達(dá)到這個(gè)要求,但過程復(fù)雜,這就給大樣本量的檢測(cè)帶來了困難。如果能解決上述問題,微衛(wèi)星在分子生物學(xué)上的應(yīng)用也將會(huì)更加廣泛。今后需選擇更多的微衛(wèi)星位點(diǎn)對(duì)更多品系進(jìn)行分析,加強(qiáng)微衛(wèi)星位點(diǎn)選擇和檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化研究,使微衛(wèi)星標(biāo)記真正應(yīng)用到近交系大、小鼠的日常質(zhì)量檢測(cè)中。4.4u3000近交系動(dòng)物dna指紋圖譜DNA多態(tài)性分為長(zhǎng)度多態(tài)性和序列多態(tài)性兩類。DNA長(zhǎng)度多態(tài)性是指由于片段插入、缺失或重復(fù)序列數(shù)目變異所致的DNA片段長(zhǎng)度的個(gè)體差異。其中約占整個(gè)基因組20%～30%的重復(fù)序列是導(dǎo)致DNA長(zhǎng)度多態(tài)性的最常見原因。其中重復(fù)單位為2～6bp的寡核苷酸串聯(lián)重復(fù)序列就是微衛(wèi)星DNA。根據(jù)不同位點(diǎn)的微衛(wèi)星DNA可有相同重復(fù)順序單位的特點(diǎn),用一種核心重復(fù)順序作為探針,可檢測(cè)到許多不同位點(diǎn)的微衛(wèi)星,經(jīng)SouthernBlot轉(zhuǎn)移雜交,放射自顯影在X光膠片上顯現(xiàn)DNA指紋圖譜,該圖譜不表示任何特定微衛(wèi)星位點(diǎn),而是許多微衛(wèi)星位點(diǎn)的集合狀態(tài)。近交系是經(jīng)過至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配或親代與子代交配培育而成,其近交系數(shù)應(yīng)大于99%,亦即近交系個(gè)體之間所攜帶的遺傳信息量應(yīng)基本一致。依DNA指紋技術(shù)的原理,近交系實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體之間的DNA指紋圖帶的平均相似系數(shù)、共有帶率均應(yīng)接近100%或達(dá)到100%。該法所得的結(jié)論有足夠的可靠性和準(zhǔn)確性。在近交系動(dòng)物的遺傳監(jiān)測(cè)中,一個(gè)好的遺傳檢測(cè)方法所用的遺傳標(biāo)記必須是既遵循簡(jiǎn)單的孟德爾遺傳方式,親子間穩(wěn)定遺傳,又在生物的進(jìn)化過程中具有一定的變異而表現(xiàn)出足夠的多態(tài)性。DNA指紋技術(shù)以基因組中廣泛存在的高度可變串聯(lián)重復(fù)序列(VNTRs)為遺傳標(biāo)記,恰好具有上述優(yōu)點(diǎn)。因此,DNA指紋圖譜技術(shù)因其高變異性、多位點(diǎn)性、簡(jiǎn)單而穩(wěn)定的遺傳性等優(yōu)點(diǎn)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳監(jiān)測(cè)中得到了越來越廣泛的應(yīng)用。指紋技術(shù)中用到的探針及其標(biāo)記和檢測(cè)方法也隨著大量高水平微衛(wèi)星探針、寡聚核苷酸探針的出現(xiàn)、計(jì)算機(jī)分析軟件的使用、實(shí)驗(yàn)技術(shù)的提高以及統(tǒng)計(jì)方法的改進(jìn)而日益完善。然而,DNA指紋技術(shù)與目前的生化標(biāo)記分析方法相比尚存在一些問題:操作繁瑣、判定上缺乏標(biāo)準(zhǔn),以及無確切的χ和P值等來衡量近交系動(dòng)物個(gè)體間、群體間與不同品系間的差異及不能區(qū)分雜合體和純合體等,因此如何進(jìn)一步簡(jiǎn)化操作、如何根據(jù)DNA指紋圖譜確定個(gè)體在該位點(diǎn)上的基因型、如何掌握特異性的探針、如何建立統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)用于實(shí)驗(yàn)室間的使用和參考等問題都有待于進(jìn)一步研究。5微衛(wèi)星dna檢測(cè)隨著生活水平的提高,人們對(duì)醫(yī)療保健、生存質(zhì)量日益重視。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物作為疾病動(dòng)物模型的主要材料,在臨床藥物實(shí)驗(yàn)、毒理實(shí)驗(yàn)等科研中起著越來越重要的作用。近交系小鼠因其基因高度純合,且遺傳特征穩(wěn)定,在實(shí)驗(yàn)中可減少實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的數(shù)量和重復(fù)次數(shù),且有利于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可比性及可重復(fù)性,故廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究。如何對(duì)近交系小鼠進(jìn)行長(zhǎng)期、有效、嚴(yán)格、定時(shí)的遺傳學(xué)監(jiān)測(cè)是非常重要的。傳統(tǒng)的遺傳質(zhì)