hpv-16感染與外陰營(yíng)養(yǎng)不良的關(guān)系

hpv-16感染與外陰營(yíng)養(yǎng)不良的關(guān)系

陰道疾病，也稱為白色陰道疾病，是一種程度較低的疾病，其病因尚不清楚。有的學(xué)者提出,外陰白斑實(shí)際上是指外陰局部神經(jīng)與血管在吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和輸送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)過(guò)程中出現(xiàn)障礙引起的組織變性與色素改變的一種疾病。中國(guó)中醫(yī)研究院已將其列為世界性難以治愈性疾病,王家璧等認(rèn)為該病變可發(fā)展為外陰鱗狀細(xì)胞癌。WHO已正式將其列為癌前病變。人乳頭狀瘤病毒(humanpapillomavirusvirus,HPV)是一種DNA腫瘤病毒,與生殖道、肺、食道、呼吸道粘膜及皮膚的腫瘤發(fā)生有關(guān),其致癌性已在宮頸癌中得到證實(shí)。高危型HPV(16、18型)對(duì)生殖器的致?lián)p傷作用尤為明顯。有關(guān)HPV-16感染與外陰營(yíng)養(yǎng)不良的關(guān)系,到目前為止,研究或報(bào)道的很少。本實(shí)驗(yàn)采用病理學(xué)、免疫組織化學(xué)和電鏡技術(shù),對(duì)臨床病理診斷為外陰白斑或外陰營(yíng)養(yǎng)不良標(biāo)本進(jìn)行HPV-16病毒的檢測(cè)及其蛋白表達(dá)的研究,以探討HPV-16在外陰營(yíng)養(yǎng)不良的發(fā)生、發(fā)展中的作用,對(duì)臨床的治療具有重要的指導(dǎo)意義。1組織病理學(xué)觀察標(biāo)本來(lái)源:標(biāo)本來(lái)自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科和黑龍江省醫(yī)院病理科。臨床病理診斷為外陰白斑組織和外陰營(yíng)養(yǎng)不良的共28例,平均年齡為47.1歲。28塊組織中,臨床診斷為外陰白斑有19例,外陰營(yíng)養(yǎng)不良的有9例。另有7例外陰營(yíng)養(yǎng)不良新鮮組織進(jìn)行了電鏡觀察。HPV-16單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒,均由福州邁新生物技術(shù)公司提供。免疫組織化學(xué)采用的是sABC法,具體方法略。電鏡常規(guī)標(biāo)本制備,Epon-812包埋,50~80nm的超薄切片,JEM-1220型透射電鏡觀察。2結(jié)果2.1增生型營(yíng)養(yǎng)不良類(lèi)型28例外陰標(biāo)本,臨床診斷19例外陰白斑中,9例屬于外陰營(yíng)養(yǎng)不良。在光鏡下,病理診斷有11例(1128,39.3%)表皮增厚,角化過(guò)度或角化不全,棘細(xì)胞增生,上皮角延長(zhǎng),基底層或棘細(xì)胞層可出現(xiàn)不典型增生,棘細(xì)胞空泡變性等改變(圖1),真皮乳頭水腫以及慢性炎性細(xì)胞浸潤(rùn),此型病理診斷為增生型營(yíng)養(yǎng)不良(hyperplasticdystrophy)。有的在真皮毛囊周?chē)募?xì)胞增生明顯。少數(shù)出現(xiàn)基底細(xì)胞層結(jié)構(gòu)紊亂,有核分裂像。有3例(328,10.7%)表皮變薄,上皮角消失,表皮角化過(guò)度,棘細(xì)胞減少或消失,色素脫失,真皮淺層水腫,伴有少量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),此型病理診斷為萎縮性硬化性苔癬(lichensclerosusetatrophicus)。另外50%(1428)上述兩種改變同時(shí)存在,病理診斷為混合性營(yíng)養(yǎng)不良(mixeddystrophy)。2.2pv-16表達(dá)部位和組織病理學(xué)結(jié)果28例外陰白斑和營(yíng)養(yǎng)不良標(biāo)本中,有17例HPV-16陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為60.7%(1728),其中有11例病理診斷為增生型營(yíng)養(yǎng)不良,100%HPV-16陽(yáng)性表達(dá);而病理診斷為萎縮性硬化性苔癬或部分混合性營(yíng)養(yǎng)不良的病例,HPV-16陽(yáng)性表達(dá)減弱或無(wú)表達(dá)。陽(yáng)性表達(dá)部位主要位于基底細(xì)胞和棘細(xì)胞的胞漿、胞膜及細(xì)胞間的連接上(圖2),但以棘細(xì)胞為主,偶可見(jiàn)真皮下毛囊周?chē)錾募?xì)胞。棘細(xì)胞層和基底細(xì)胞層增生越明顯,HPV-16表達(dá)越強(qiáng)。在外陰鱗狀細(xì)胞癌的切片中,細(xì)胞漿內(nèi)陽(yáng)性顆粒表達(dá)減少。2.3膠質(zhì)瘤基底細(xì)胞7例外陰營(yíng)養(yǎng)不良標(biāo)本中,5例(57,71.4%)可見(jiàn)棘細(xì)胞層細(xì)胞核畸變,染色質(zhì)變異,核周細(xì)胞基質(zhì)溶解形成微小空泡狀,灶性溶合形成大的透明區(qū)而空泡化,棘細(xì)胞間連接緊密,橋粒豐富,胞漿內(nèi)含有較多脂滴,張力絲增多,形成高密度斑塊,有的線粒體腫脹,線粒體嵴消失。部分基底細(xì)胞呈凋亡狀態(tài),細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)構(gòu)紊亂(圖3)。2例(27,28.8%)在棘細(xì)胞和基底細(xì)胞核內(nèi)查見(jiàn)呈類(lèi)晶格排列的病毒顆粒(圖4)。3pv-16在陰部細(xì)胞毒性與免疫活性關(guān)系方面的作用,主要在于細(xì)胞生根,HPV是一類(lèi)分子長(zhǎng)度大約為8kb左右的小分子環(huán)狀雙股DNA病毒。通過(guò)DNA序列分析,至今已發(fā)現(xiàn)大約有70多型,不同型HPV常常分布于不同組織的上皮表面,大約有20多型HPV易感染粘膜上皮,特別是生殖道的粘膜上皮。大量分子流行病學(xué)研究資料表明,HPV-16與生殖道腫瘤密切相關(guān)。在宮頸癌活檢組織中,HPV-16的檢出率顯著高于正常宮頸組織。HPV-16基因組中共有8個(gè)開(kāi)放閱讀框架:E1、E2、E4、E5、E6、E7早期開(kāi)放閱讀框架和L1、L2晚期開(kāi)放閱讀框架,其中E1蛋白的功能主要涉及病毒DNA的復(fù)制,E1蛋白是參與病毒DNA的復(fù)制的重要因子,E1還有可能參與HPV-16誘導(dǎo)細(xì)胞永生化過(guò)程;E2蛋白的功能主要作為病毒基因轉(zhuǎn)錄的活化因子或抑制因子雙向調(diào)節(jié)病毒早期基因的表達(dá),同時(shí)還與病毒DNA的復(fù)制有關(guān);E4蛋白可誘使上皮角質(zhì)細(xì)胞骨架降解,幫助病毒從感染細(xì)胞中釋放;E5蛋白的二聚體亞單位可能通過(guò)與PDGFβ受體結(jié)合并使其活化,引發(fā)一系列細(xì)胞內(nèi)事件,最終刺激細(xì)胞有絲分裂;E6、E7基因編碼具有轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì),E6E7開(kāi)放讀框?yàn)檎{(diào)節(jié)病毒生長(zhǎng)的編碼區(qū),已有報(bào)道將高危型HPV-E6E7轉(zhuǎn)染人角質(zhì)形成細(xì)胞后,可誘導(dǎo)人角質(zhì)形成細(xì)胞永生化。HPV-E6E7介導(dǎo)的作用包括細(xì)胞永生化、轉(zhuǎn)化、腫瘤形成和凋亡等,永生化被認(rèn)為是發(fā)展為完全惡性的一個(gè)步驟。目前,對(duì)HPV-16在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用研究的較多也較清楚,但對(duì)于外陰癌前病變和外陰營(yíng)養(yǎng)不良的研究較少。本研究發(fā)現(xiàn),28例外陰白斑和營(yíng)養(yǎng)不良的標(biāo)本中,有17例HPV-16強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性率為60.7%(1728),而HPV-16強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)與棘細(xì)胞增生呈正相關(guān),電鏡下可見(jiàn)棘細(xì)胞和基底細(xì)胞核內(nèi)有病毒顆粒,HPV-16陽(yáng)性檢測(cè)率為28.8%(27)。本研究證實(shí)HPV-16感染與增生型營(yíng)養(yǎng)不良的發(fā)生有密切關(guān)系,是促進(jìn)棘細(xì)胞和基底細(xì)胞增生的重要因素。HPV-16的8個(gè)ORF的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)發(fā)生在病毒增值的不同階段,在表皮明顯增生的11例標(biāo)本中均可見(jiàn)以棘細(xì)胞為主的細(xì)胞漿內(nèi)的HPV-16的高陽(yáng)性表達(dá),并由于電鏡下棘細(xì)胞層細(xì)胞核畸變,染色質(zhì)變異,核周空泡化,這些表明HPV-16對(duì)外陰部上皮的最初影響是E6、E7蛋白的表達(dá)使細(xì)胞發(fā)生的永生化和細(xì)胞增生,此時(shí)存在于胞漿中的陽(yáng)性顆粒應(yīng)為E1、E2蛋白,它們參與了E6、E7蛋白的作用過(guò)程外陰病毒感染的標(biāo)本中,鱗狀上皮高度增生,并可見(jiàn)局灶性棘細(xì)胞內(nèi)HPV-16陽(yáng)性高表達(dá)也支持了上述觀點(diǎn)。在表皮過(guò)度增生發(fā)生癌前變的標(biāo)本中,細(xì)胞漿中陽(yáng)性顆粒表達(dá)減少,但可見(jiàn)棘細(xì)胞、基底細(xì)胞膜和細(xì)胞連接上有HPV-16陽(yáng)性表達(dá),這與Mugnus等人關(guān)于宮頸上皮細(xì)胞被HPV-16永生化后所見(jiàn)結(jié)果相似;電鏡下棘細(xì)胞間連接緊密,橋粒豐富,胞漿內(nèi)含有較多脂滴,張力絲增多,據(jù)此推測(cè)應(yīng)該是E5蛋白的表達(dá),通過(guò)改變與細(xì)胞增生相關(guān)的細(xì)胞膜蛋白活性與E6、E7蛋白共同