微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌

實(shí)驗(yàn)四

培養(yǎng)基的制備和消毒滅菌精選ppt明確培養(yǎng)基的配置原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解高壓蒸氣滅菌的基本原理、應(yīng)用范圍及高壓蒸氣滅菌的操作方法；學(xué)習(xí)棉塞的制作等基本操作技術(shù)。目的要求：精選ppt

基本原理：培養(yǎng)基中含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCl提供無(wú)機(jī)鹽。在配制固體培養(yǎng)基時(shí)還要加入一定量的瓊脂作為凝固劑，瓊脂在96℃時(shí)溶化，40℃時(shí)凝固，通常不被微生物分解利用。一、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備精選ppt牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方

牛肉膏3.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g水1000mlpH7.4～7.6精選ppt實(shí)驗(yàn)器材

溶液或試劑牛肉膏，蛋白胨，NaCl，瓊脂，lmol/LNaOH

lmol/LHCl。儀器或其他用具試管，三角瓶，燒杯，量筒，玻棒，天平，牛角匙，高壓蒸氣滅菌鍋，pH試紙，棉花，牛皮紙，記號(hào)筆，麻繩，紗布等。精選ppt操作步驟1．稱量

按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入燒杯中。2．溶化

在上述燒杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒攪勻，然后在石棉網(wǎng)上加熱使其溶解。

精選ppt

在未調(diào)pH前，先用pH試紙測(cè)量培養(yǎng)基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中逐滴加入lmol／LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測(cè)其pH，直至pH達(dá)7.6。反之，用lmol／LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。3．調(diào)pH精選ppt4．過(guò)濾

用濾紙或多層紗布過(guò)濾。一般無(wú)特殊要求的情況下，這一步可以省去（本實(shí)驗(yàn)勿需過(guò)濾）。

5．分裝

按實(shí)驗(yàn)要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管內(nèi)或三角燒瓶?jī)?nèi)。分裝試管，其裝量不超過(guò)管高的1／5，滅菌后制成斜面。精選ppt6．加塞

在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)人培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能。7．包扎

在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時(shí)冷凝水潤(rùn)濕棉塞，其外再用繩子扎好。注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。精選ppt8．滅菌

將上述培養(yǎng)基以0.103MPa121℃，20min高壓蒸氣滅菌。

精選ppt二、馬丁氏培養(yǎng)基的制備

基本原理：是一種用來(lái)分離真菌的選擇性培養(yǎng)基。此培養(yǎng)基是由葡萄糖、蛋白胨、KH2PO4、MgSO4·7H2O、孟加拉紅和鏈霉素等組成。其中葡萄糖作為碳源，蛋白胨作為氮源，KH2PO4、MgSO4·7H2O作為無(wú)機(jī)鹽，為微生物提供鉀、磷、鎂離子。這種培養(yǎng)基的特點(diǎn)是培養(yǎng)基中加人的孟加拉紅和鏈霉素能有效的抑制細(xì)菌和放線菌的生長(zhǎng)，而對(duì)真菌無(wú)抑制作用，因而真菌在這種培養(yǎng)基上可以得到優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)，從而達(dá)到分離真菌的目的。精選ppt馬丁氏培養(yǎng)基的配方KH2PO41gMgSO4·7H2O0.5g蛋白胨5g葡萄糖10g瓊脂15~20g水1000mlpH自然臨用時(shí)以無(wú)菌操作在100ml培養(yǎng)基中加入l％的鏈霉素0.3ml，使其終濃度為30μg/ml。精選ppt實(shí)驗(yàn)器材

溶液或試劑

KH2PO4，MgSO4·7H2O，蛋白胨，葡萄糖，瓊脂，鏈霉素（1％水溶液）。

儀器或其他用具

試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，天平，牛角匙，高蒸氣滅菌鍋等。精選ppt操作步驟稱量溶化加塞包扎滅菌精選ppt三、高壓蒸氣滅菌

基本原理：

高壓蒸氣滅菌是將待滅菌的物品放在一個(gè)密閉的加熱滅菌鍋內(nèi)，通過(guò)加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸氣。待水蒸氣急劇地將鍋內(nèi)的冷空氣從排氣閥中驅(qū)盡，然后關(guān)閉排氣閥，繼續(xù)加熱，此時(shí)由于蒸氣不能溢出，而增加了滅菌器內(nèi)的壓力，從而使沸點(diǎn)增高，得到高于100℃的溫度。導(dǎo)致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的目的。精選ppt在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排除是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒魵獾呐蛎泬?，所以，?dāng)水蒸氣中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸氣的溫度低于飽和蒸氣的溫度。精選ppt實(shí)驗(yàn)器材牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基馬丁氏培養(yǎng)基培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、移液管手提式高壓蒸氣滅菌鍋等。精選ppt操作步驟1.將內(nèi)層鍋取出，再向外層鍋內(nèi)加入適量的水，使水面與三角擱架相平為宜。2.放回內(nèi)層鍋，并裝入待滅菌物品。3.加蓋，并將蓋上的排氣軟管插入內(nèi)層鍋的排氣槽內(nèi)。再以兩兩對(duì)稱的方式同時(shí)旋緊相對(duì)的兩個(gè)螺栓。精選ppt4.用煤氣加熱，待冷空氣完全排盡后，關(guān)上排氣閥。當(dāng)鍋內(nèi)壓力升到所需壓力時(shí)，控制熱源，維持壓力至所需時(shí)間。本實(shí)驗(yàn)用0.1Mpa，121.5℃，20min滅菌。5.滅菌所需的時(shí)間到后，關(guān)閉煤氣，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表降至“0時(shí)，打開(kāi)排氣閥，旋松螺栓，打開(kāi)蓋子，取出滅菌物品