第七八九章 藥效毒理臨床

中藥新藥藥效、毒理及臨床研究中醫(yī)藥學院中藥藥劑實驗室中藥新藥藥效學研究

中藥新藥毒性試驗研究

中藥新藥的臨床研究

主要內(nèi)容中藥新藥藥效學研究

概念、內(nèi)容研究的重要性及局限性研究的基本要求研究的步驟及基本內(nèi)容

中藥新藥藥效學研究的概念和內(nèi)容

概念：遵循中醫(yī)藥理論，運用現(xiàn)代科學方法，根據(jù)新藥的功能主治，選用或建立與中醫(yī)“證”與“病”相符或相近的動物模型和試驗方法，對新藥的有效性做出科學的評價。

在機體(主要為動物)或其器官、組織、細胞、亞細胞、分子、基因水平等模型上，采用整體和離體方法，進行綜合和分析的實驗研究，以闡明藥物防治疾病的作用及其作用機制，從而為新藥的有效性評價提供科學的依據(jù)。中藥新藥藥效學研究的重要性及局限性

發(fā)現(xiàn)研制新藥及對藥物進行再評價為新藥的臨床研究奠定基礎補充臨床研究的不足揭示中藥復方藥效的物質(zhì)基礎

局限性

動物實驗不能代替人體觀察，中藥研究結(jié)果最終要由臨床來檢驗

前者是后者的基礎，后者是前者的繼續(xù)與最后判定

試驗設計

試驗方法動物模型試驗指標的選擇動物的選擇

中藥新藥藥效學研究的步驟及基本內(nèi)容

對受試藥物的要求劑量的選擇給藥途徑和方法對照組的選擇實驗結(jié)果的處理依據(jù)：

《新藥審批辦法》及有關藥政法和規(guī)定原則：實事求是體現(xiàn)出高水平堅持中藥特色及有新意“隨機、對照、重復”；統(tǒng)計學處理等試驗設計

試驗設計根據(jù)新藥不同情況設計試驗方案以病名為主治的新藥：根據(jù)主治、參考功能選擇相應的試驗方法

（急性支氣管炎、失眠）以中醫(yī)證名為主治的新藥：應根據(jù)該病癥的現(xiàn)代認識設計關鍵的主要試驗（脾虛證）缺乏適當動物模型的新藥：據(jù)疾病的病因、病理變化、臨床癥狀及新藥的主要功能等，設計藥理試驗方案

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新藥研究要求達到的水平分清主次，突出重點首先應確定主要作用(關鍵性藥效)。一般主要作用設1-3項，每項應選作2—3種實驗方法，從多指標驗證其藥效。其他作用(輔助性藥效)可酌情做2-5項，每項選做1-2種實驗方法。體外實驗又稱離體實驗，是在體外進行的實驗觀察方法，包括離體器官、離體組織、細胞體外培養(yǎng)及試管內(nèi)試驗等。適用于分析試驗，特別是作用機制的研究。體內(nèi)實驗又稱在體實驗，是用整體動物進行藥理實驗的方法。比較接近臨床狀態(tài)，尤其符合中藥多成分、多靶點、多系統(tǒng)的調(diào)節(jié)整體作用，故中藥的藥效學試驗應以體內(nèi)實驗為主，體外實驗為輔。

試驗方法動物模型要求：理想的動物模型應與人類疾病的臨床相似，中醫(yī)方面應盡可能符合中醫(yī)臨床證或病的要求，以整體模型為主。

意義：在控制實驗條件下，用單一或特定的病因，短期或較短時間內(nèi)復制出典型的病理模型，不但在群體上容易得到滿足，并且可以避免在人身上進行實驗的危險性指標的選擇

特異性:針對性強、專屬性好，能夠反映變化本質(zhì)

敏感性:能準確反映病情、證候的變化及藥物的防治作用重現(xiàn)性:穩(wěn)定，重現(xiàn)性好，結(jié)果才可靠客觀性:主觀檢測的指標，不夠準確

指標的量化:便于統(tǒng)計學處理動物選擇

種類:動物的類別和種屬不同對藥物的反應存在很大差異，有時對藥效試驗的成敗起著關鍵的作用（大鼠、小鼠無嘔吐反應，貓、狗、猴和鴿等則對嘔吐反應敏感）品系:C57BL小鼠對腎上腺皮質(zhì)激素的敏感性比DBA小鼠高12倍。DBA小鼠和QTBL小鼠對音響的敏感度截然不同動物的選擇動物等級和健康：選用符合等級要求的健康動物，并附有供應單位的合格證書。目前我國的藥理學研究大多采用普通動物(conventionalanimal，CV)和清潔動物(cleananimal，CL)

實驗設施：從事新藥研究的實驗室及其設施應符合國家食品藥品監(jiān)督管理局的有關規(guī)定年齡：根據(jù)試驗要求，選用特定年齡、性別的動物常用動物性成熟年齡，小鼠為6-8星期，大鼠8—9星期性別：不同性別的動物對同一藥物的敏感性可以差異較大

對受試藥物的要求

處方固定制備工藝、藥品質(zhì)量標準應基本穩(wěn)定制劑或提取物作為受試藥的優(yōu)缺點給藥途徑對受試藥的要求劑量的選擇

劑量的確定臨床等效劑量（指根據(jù)體表面積折法換算的在同等體表面積(m2、cm2)單位時的劑量）根據(jù)臨床用量的體重計算（粗略的等效倍數(shù)為1(人)、3(狗、猴)、5(貓、兔)、7(大鼠、豚鼠)、10-11(小鼠)）根據(jù)半數(shù)致死量(LD50)計算根據(jù)文獻估計劑量藥效試驗的高劑量應低于長期毒性試驗的中劑量或低劑量通過預試驗測定劑量

劑量的選擇

劑量的設置劑量組：一般情況下，各種試驗至少應設置3個劑量組；每組試驗動物數(shù)，一般小鼠不得少于10只，大鼠為8只，貓、狗等為4只以上量效關系：藥效學試驗結(jié)果應呈現(xiàn)明確的量效關系給藥途徑和方法給藥途徑應盡可能與臨床應用途徑一致給藥容量根據(jù)試驗用藥劑量而定，但應該適宜不同組間劑量的高低，灌胃給藥采用等容積不同濃度；皮膚外用藥用不同濃度或不同面積或不同次數(shù)，而一般不宜用不同體積來體現(xiàn)給藥方式有預防性給藥和治療性給藥，或防治結(jié)合的給藥方式等

對照組的選擇正常對照組（空白對照組）模型對照組陽性(已知有效藥物)對照組三項要求：①可比性；②合法性；③擇優(yōu)性原劑型對照組實驗結(jié)果的處理

圖表：可用表格、線條圖、照片等，它們是表達統(tǒng)計數(shù)量關系的主要工具，故全稱為統(tǒng)計表和統(tǒng)計圖

實驗結(jié)果的處理

統(tǒng)計學處理：質(zhì)反應資料，又稱計數(shù)資料或定性資料（實驗結(jié)果常是百分比或自然比，其顯著性檢驗一般采用X檢驗）量反應資料，又稱計量資料或定量資料（常用T檢驗）等級資料（目前主張用等比差值法、等級序值法）實驗研究中，對實驗數(shù)據(jù)應保持真實性，不能輕易廢棄，對個別嚴重偏離的數(shù)據(jù)，即超過3個標準差，可考慮廢棄中藥新藥毒性試驗研究長期毒性實驗

急性毒性實驗

長期毒性實驗目的：觀察藥物在選定時間內(nèi)反復給予動物的情況下，動物出現(xiàn)損害的靶組織或器官及劑量-效應關系和可逆性等了解實驗動物對藥物能耐受的劑量范圍和對人來說可能無毒的安全劑量。

實驗動物受試藥物觀察指標

實驗動物實驗種類(免做長毒、只選用大鼠、應用嚙齒類和非嚙齒類二種動物進行)動物品系：實驗應選用封閉群動物。如嚙齒類的Wistar大鼠，非嚙齒類的Beatle犬實驗動物動物規(guī)格和數(shù)量：一般由雌雄各半、健康無病、檢疫合格的動物組成。各組平均體重相似，體重變異不超過20％。確定每組動物數(shù)的原則，主要考慮藥物毒性致實驗動物死亡數(shù)，實驗中處死動物的批次和實驗結(jié)束時及停藥后觀察恢復狀況所需能用于統(tǒng)計分析的動物數(shù)。飼養(yǎng)條件：通風良好；光照規(guī)律；環(huán)境清潔；溫、濕度適中且穩(wěn)定；室內(nèi)噪聲最好在50dB以下；食物應清潔，無霉變受試藥物

藥物形式應與臨床試驗用制劑完全一致(除可以不含賦形劑外)

固體制劑灌胃給藥，不溶于水的可制成混懸液?；鞈乙阂鶆蚴茉囁幬锝o藥途徑和方法口服藥物可灌胃或摻飼給藥注射給藥應嚴格消毒，并需經(jīng)常變換注射點以減少對局部的刺激，還應考慮藥液的酸堿度和滲透壓長期毒性實驗的給藥量應根據(jù)動物體重的變化不斷調(diào)整，一般每星期稱量體重并調(diào)整藥量1次各劑量組應采用等容量不同濃度給藥受試藥物給藥分組

3個或3個以上的劑量組高劑量組應有少數(shù)動物出現(xiàn)嚴重毒性反應或死亡(不超過20％)，低劑量組應相當或略高于藥效學試驗的有效劑量而不出現(xiàn)毒性反應，中劑量組在高低劑量組之間以等比關系排列受試藥物給藥分組

采用臨床試驗用制劑，對照組應給等容量的賦形劑如賦形劑或溶劑可能產(chǎn)生毒性時，還需另設空白對照組觀察指標檢測次數(shù)

3個月以內(nèi):末次給藥后24h，每組活殺部分動物，余下動物停藥繼續(xù)觀察2-4星期之后，同樣活殺全面檢測

3個月以上的，可增加在實驗中期活殺少量動物(如高劑量組和對照組)全面檢測各項指標檢查項目

一般檢查

1星期內(nèi)須嚴密觀察，以后每日至少觀察一次行為活動、外觀體征、糞便性狀等體重攝食量攝水量死亡實驗室檢查血液學:血常規(guī)、出凝血時間等尿液:尿量、尿常規(guī)等血液生化:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、總蛋白(TP)等病理組織學檢查了解受試藥物毒性引起的器質(zhì)性改變，是診斷毒性反應的重要指標麻醉后頸動脈或腹主動脈放血依序剖檢取材盡量廣泛病理切片盡量廣泛急性毒性實驗

急性毒性是指動物一次或24小時內(nèi)多次接受一定劑量的受試物，在一定時間內(nèi)出現(xiàn)的毒性反應基本內(nèi)容

受試物受試物應能充分代表臨床試驗受試物和上市藥品，因此建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質(zhì)量標準規(guī)定的中試樣品，并注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件及配制方法等。溶媒和/或輔料：應提供所用溶媒和/或輔料的批號、規(guī)格、生產(chǎn)廠家。

實驗動物雌雄各半，根據(jù)具體情況，可選擇嚙齒類和/或非嚙齒類動物。所用動物應符合國家有關藥物非臨床安全性研究的要求。通常采用健康成年動物進行試驗。動物初始體重不應超過或低于平均體重的20％。試驗分組除設受試物的不同劑量組外，還應設空白和／或陰性對照組。給藥途徑可采用不同給藥途徑進行急性毒性試驗，其中一種應與擬臨床給藥途徑一致，如不采用擬臨床途徑給藥，必須充分說明理由。經(jīng)口給藥時應禁食不禁水。

給藥容量經(jīng)口給藥，大鼠給藥容量一般每次不超過20ml/kg，小鼠一般每次不超過40ml/kg；其他動物及給藥途徑的給藥容量可參考相關文獻及根據(jù)實際情況確定觀察期限一般為14天，如果毒性反應出現(xiàn)較慢，應適當延長觀察時間，如觀察時間不足14天，應充分說明理由

觀察指標包括動物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反應等。對瀕死及死亡動物應及時進行大體解剖，其他動物在觀察期結(jié)束后進行大體解剖結(jié)果處理和分析根據(jù)觀察結(jié)果歸納分析，考察每種反應的劑量-反應及時間-反應關系。急性毒性試驗一般測定最大給藥量、最大無毒性反應劑量、最大耐受量、致死量等反應劑量判斷出現(xiàn)的各種反應可能涉及的組織、器官或系統(tǒng)等根據(jù)急性毒性試驗結(jié)果，提示在其他安全性試驗、臨床試驗、質(zhì)量控制方面應注意的問題幾個概念最大給藥量指單次或24小時內(nèi)多次（2～3次）給藥所采用的最大給藥劑量。最大給藥量試驗是指在合理的給藥濃度及合理的給藥容量的條件下，以允許的最大劑量給予實驗動物，觀察動物出現(xiàn)的反應。最大無毒性反應劑量是指受試物在一定時間內(nèi)，按一定方式與機體接觸，用靈敏的現(xiàn)代檢測方式未發(fā)現(xiàn)損害作用的最高劑量。最大耐受量是指動物能夠耐受的而不引起動物死亡的最高劑量。從獲取安全性信息的角度考慮，有時對實驗動物的異常反應和病理過程的觀察、分析，較以死亡為觀察指標更有毒理學意義。致死量受試物引起動物死亡的劑量，測定的致死量主要有最小致死量、半數(shù)致死量。在測定致死量的同時，應仔細觀察動物死亡前的中毒反應情況。

中藥新藥的臨床研究

概述

基本原則和方法病例選擇與療效評價安全性問題技術要求中藥新藥的臨床研究

概述