實(shí)驗(yàn)四 細(xì)菌接種培養(yǎng)法與生長現(xiàn)象觀察

#/5次，最后充入80%N2、10%H2和10%CO2混合氣體，若缸內(nèi)呈無氧狀態(tài)，則指示劑美藍(lán)為無色。每次觀察標(biāo)本后需重新抽氣換氣，用過的鈀粒經(jīng)160°C2h干烤后可重復(fù)使用。2）氣體發(fā)生袋法（Gas-pak法）：該法需以下二種容器：厭氧罐一一是由透明聚碳酸酯或不銹鋼制成，蓋內(nèi)有金屬網(wǎng)狀容器，其內(nèi)裝有厭氧指示劑美藍(lán)和用鋁箔包裹的催化劑鈀粒；氣體發(fā)生袋——是一種鋁箔袋，其內(nèi)裝有硼氫化鈉-氯化鈷合劑、碳酸氫鈉-檸檬酸合劑各1丸和1張濾紙條，使用時(shí)剪去特定部位，注入10ml水，水沿濾紙滲入到二種試劑中，發(fā)生下列化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生h2和C02。立即將氣體發(fā)生袋放入罐內(nèi)，密封罐蓋，使氣體釋放到罐中。C6H8O7+3NaHCO3^Na3（C6H5O7）+3H2O+3CO2fNaBH4+2H2OfNaBO2+4H2f（2）厭氧袋法：厭氧袋是用無毒透明、不透氣的復(fù)合塑料薄膜制成。袋中裝有催化劑鈀粒和2支安瓿，分別裝有H2、CO2發(fā)生器（化學(xué)藥品，成分同上）、指示劑美藍(lán)。使用時(shí)將接種細(xì)菌的平板放入袋中，密封袋口，先將袋中裝有化學(xué)藥品的安瓿折斷，幾分鐘后再折斷裝有美藍(lán)的安瓿，若美藍(lán)為無色則表示袋內(nèi)已處于無氧狀態(tài)，置35C溫箱孵育。（3）需氧菌共生法：將已知專性需氧菌（如枯草芽胞桿菌）和待檢厭氧菌分別接種到2個(gè)大小相同的平板上，將兩者合攏，縫隙用透明膠密封，置35C溫箱培養(yǎng)，需氧菌生長過程中消耗氧氣，待氧氣耗盡后，厭氧菌即開始生長。（4）平皿焦性沒食子酸法:按每100ml容積加入焦性沒食子酸1g和2.5mol/LNaOH10ml（也可用Na2CO3）的比例，先將焦性沒食子酸放入平皿蓋背面的滅菌紗布中,再滴入NaOH，立即將接種細(xì)菌的平板扣上，用熔化的石蠟密封平皿和平皿蓋的縫隙，置35C溫箱培養(yǎng)。（5）庖肉培養(yǎng)基法：將庖肉培養(yǎng)基上面的石蠟熔化，用毛細(xì)管吸取標(biāo)本后接種于培養(yǎng)基中，待石蠟?zāi)毯笾?7C孵育。用于培養(yǎng)基中的肉渣可吸收氧氣，石蠟?zāi)毯笃鸶艚^空氣的作用，從而使培養(yǎng)基內(nèi)呈無氧狀態(tài)。（6）厭氧手套箱培養(yǎng)法：厭氧手套箱是目前國際上公認(rèn)的培養(yǎng)厭氧菌最佳儀器之一。它是一個(gè)密閉的大型金屬箱，箱的前面有一個(gè)透明面板，板上裝有兩個(gè)手套，可通過手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作。箱側(cè)有一交換室，具有內(nèi)外二門，內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著。使用時(shí)將物品放入箱內(nèi)，先打開外門，放入交換室，關(guān)上外門進(jìn)行抽氣、換氣（h2,co2,n2）使之達(dá)到厭氧狀態(tài)，然后手伸入手套把交換室內(nèi)門打開，將物品移入箱內(nèi)，關(guān)上內(nèi)門。箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài)，是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中殘余氧化合成水的原理。該箱可調(diào)節(jié)溫度，本身是孵箱或?qū)⒎跸涓皆谄鋬?nèi)。該法適于作厭氧菌的大量培養(yǎng)研究。四、細(xì)菌生長現(xiàn)象的觀察1．液體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象：渾濁生長（如葡萄球菌）、沉淀生長（如鏈球菌）、菌膜生長（如枯草桿菌）。觀察要點(diǎn)：注意觀察培養(yǎng)基的透明度、管底和液面上是否有細(xì)菌生長。2．半固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象：（1）無鞭毛的細(xì)菌：僅沿穿刺線生長，穿刺線清晰，周圍培養(yǎng)基透明（如葡萄球菌）。（2）有鞭毛的細(xì)菌：沿穿刺線向四周擴(kuò)散生長，穿刺線邊緣呈羽毛狀，周圍培養(yǎng)基變渾濁（如大腸埃希菌）。觀察要點(diǎn)：注意觀察穿刺線是否清晰、周圍的培養(yǎng)基是否混濁。3．固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象：菌落：由一個(gè)細(xì)菌生長繁殖而形成的一個(gè)肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。因來源相同，同一個(gè)菌落的細(xì)菌為純種細(xì)菌。不同細(xì)菌菌落的形態(tài)學(xué)特征不同，可以鑒別細(xì)菌。菌苔：由多個(gè)菌落