小鼠白細胞介素10(IL-10) 酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA試劑盒)

僅供科研使用，不得用于臨床診斷。僅供科研使用，不得用于臨床診斷。#僅供科研使用，不得用于臨床檢驗。小鼠白細胞介素10(IL-10)酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA試劑盒)說明書黃石市艾恩斯生物科技有限公司【產(chǎn)品名稱】通用名稱：小鼠白細胞介素10(IL-10)酶聯(lián)免疫試劑盒(ELISA試劑盒)英文名稱：MouseInterleukin10(IL-10)ELISAKIT【包裝規(guī)格】48人份/盒，96人份/盒【預(yù)期用途】僅供科研使用，定量檢測血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液中小鼠白細胞介素10(IL-10)的濃度。【檢驗原理】本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。在預(yù)包被抗小鼠白細胞介素10(IL-10)抗體(固相抗體)的微孔酶標板中，加入小鼠白細胞介素10(IL-10)校準品和待測樣本，再加入另一株HRP標記的抗小鼠白細胞介素10(IL-10)抗體(酶標抗體)，經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標抗體的夾心復(fù)合物。加底物A和B,底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍色產(chǎn)物，在終止液(2M硫酸)作用下，最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標儀上測定吸光度(OD值)，吸光度(OD值)與待測樣品中小鼠白細胞介素10(IL-10)的濃度正相關(guān)。擬合校準品曲線，可以計算出樣本中小鼠白細胞介素10(IL-10)的濃度。【主要組成成分】主要成分組分數(shù)量主要成分校準品0.5ml/管*6管抗原配制的6個濃度標準品包被微孔板96T預(yù)包被固相抗體HRP標記抗體6mLHRP標記的檢測抗體底物液A6mL過氧化脲工作液底物液B6mLTMB工作液20X濃縮洗滌液30mL含0.15%Tween20的PBS說明書1份——自封袋1個——不干膠2片——校準品檢測范圍：15.6-1000pg/ml。校準品已經(jīng)通過測試，結(jié)果表明HBs抗原陰性，HIV1、HIV2和HCV抗體陰性，由于不存在一種試驗方法能夠完全保證沒有這些物質(zhì)，本品必須按照具有潛在的感染性進行處理，處理過程應(yīng)當(dāng)遵循通用的安全措施。需要但未提供的材料及耗材1、酶標儀2、精密移液器及一次性吸頭3、蒸餾水4、洗瓶或者自動洗板機5、37°C水浴鍋或恒溫箱6、500ml量筒7、無粉一次性乳膠手套【儲存條件及有效期】1、2-8C保存，切勿冷凍，有效期6個月。2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8C冰箱。3、開封后，按照建議的條件保存，校準品、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為14天，其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的?！具m用儀器】半自動的酶標儀，如ThermoMK3，或者國產(chǎn)酶標儀?！緲颖疽蟆繕颖绢愋秃筒杉韵轮皇橇谐鰳悠凡杉囊话阒改?。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑。1、細胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物，上清液保存在_20C以下，避免反復(fù)凍融。2、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min，小心地分離出血清，保存在-20C以下，避免反復(fù)凍融。3、血漿：肝素，EDTA，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清，血漿保存在-20°C以下，避免反復(fù)凍融。樣本保存和穩(wěn)定性樣本在2-8C條件下，可以儲存72h,或者在-20C儲存6個月。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍?！緳z驗方法】試劑準備1、使用前，所有的組分都要至少復(fù)溫30min,確保充分復(fù)溫到室溫。2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會有結(jié)晶產(chǎn)生，這屬于正常現(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶完全溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液，添加19份的蒸餾水。3、底物：底物液A和B，在使用前，按1:1體積充分混合，混合后15分鐘內(nèi)使用。操作程序1、所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標準品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。2、按前面試劑準備中描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。3、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。4、設(shè)置標準品孔、樣本孔和空白孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50卩L,樣本孔加待測樣本50pL,空白孔不加。5、除空白孔外，標準品孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶標記的檢測抗體100》L。6、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37C水浴鍋或恒溫箱溫育60min。7、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置20s，甩去洗滌液，吸水紙上拍干。8、如此重復(fù)4次（共洗板5次）。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進行洗板，添加浸泡20s的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。9、將底物A和B按1:1體積充分混合，所有孔中加入底物混合液100》L。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37C水浴鍋或恒溫箱溫育15min。10、所有孔加入終止液50》L,在酶標儀上讀取各孔吸光度（OD值）?！緳z驗結(jié)果的解釋】檢測完成后，以標準品濃度做為縱坐標，對應(yīng)的吸光度（OD值）作為橫坐標，利用計算機軟件，采用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl）,創(chuàng)建標準曲線方程，通過樣本的吸光度（OD值），利用方程計算樣品的濃度值。如果樣品被稀釋，通過上述方法測的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的最終濃度?！緳z驗方法的局限性】1、僅供科研使用，不得用于臨床診斷。2、在試劑盒標示的有效期內(nèi)使用，過期產(chǎn)品不得使用。3、跟其他廠家的試劑盒或者組分不能混用。4、使用試劑盒配套的樣品稀釋液。5、如果樣本值高于最高標準品濃度值，請將樣本適當(dāng)稀釋后，再重新測定。6、待測樣本中存在的人抗鼠等異嗜抗體會干擾檢測結(jié)果，檢測前，請排除該因素。7、通過其他方法得到的檢測結(jié)果，與本試劑盒測定結(jié)果不具有直接的可比性?！井a(chǎn)品性能指標】1、物理性能試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。2、劑量反應(yīng)曲線線性校準品劑量反應(yīng)曲線相關(guān)系數(shù)r值，大于等于0.9900。3、精密度批內(nèi)精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在同一個板塊內(nèi)精度評估。批內(nèi)變異系數(shù)CV%小于10%。批間精密度：三組已知的高、中、低濃度樣品，進行二十次在不同板塊內(nèi)精度評估。批間變異系數(shù)CV%小于15%。4、靈敏度最低檢出劑量小于。5、回收率三組已知的高、中、低濃度樣品，進行五次回收率評估，回收率在85%-115%之間。6、特異性本試劑盒識別天然和重組小鼠白細胞介素10(IL-10)，與結(jié)構(gòu)類似物無交叉。7、穩(wěn)定性2°C-8°C保存，有效期6個月?！咀⒁馐马棥可锇踩?、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染，所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進行處置。2、試劑盒的液體組分中，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng)，避免吸入煙霧與皮膚接觸。3、底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧。戴上防護手套，實驗完成后徹底洗手。技術(shù)提示1、混合蛋白溶液時，避免起泡。2、加校準品與樣本時，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應(yīng)該懸臂加樣，避免交叉污染。3、合適的溫育時間，和充分的洗滌步驟，是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。4、底物溶液為無色液體，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用。5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。6、實驗中，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中