頂空gc快速測定羅浮山草酸油中薄荷腦和水楊酸甲酯

頂空gc快速測定羅浮山草酸油中薄荷腦和水楊酸甲酯

羅浮山草藥油由楊酸甲酯、薄荷油、薄荷腦等79種藥物組成，以及適量的綠茶。具有驅(qū)風(fēng)解毒、消腫止痛的功效。羅浮山百草油成分復(fù)雜,薄荷腦和水楊酸甲酯為其主要成分,文獻(xiàn)采用乙酸乙酯溶解直接進(jìn)樣GC法測定,樣品中大量難或不揮發(fā)的組分易污染色譜柱。文獻(xiàn)改進(jìn)了樣品處理方法,采用揮發(fā)油提取器提取后測定,但操作煩瑣費(fèi)時(shí),且揮發(fā)性成分在操作過程中易損失?，F(xiàn)采用直接頂空氣相色譜法測定羅浮山百草油中薄荷腦和水楊酸甲酯的含量,避免了繁雜的提取過程,減少了干擾成分及對色譜柱的污染,簡便快速,定量準(zhǔn)確。1實(shí)驗(yàn)部分1.1藥品與色譜對照品SP-3420型氣相色譜系統(tǒng)(北京北分天普儀器技術(shù)有限公司)。薄荷腦(批號:110728-200506)、水楊酸甲酯(批號:110707-200107)對照品(中國藥品生物制品檢定所);羅浮山百草油(廣東羅浮山藥業(yè)有限公司,批號:L07I011、L08A181、L08D151);甲醇為色譜純;水為重蒸水。1.2方法和結(jié)果1.2.1聚乙二醇單次進(jìn)樣ld50色譜柱為SMA-WAX毛細(xì)管柱(30m×0.53mm×0.50μm),固定液為聚乙二醇;程序升溫起始溫度100℃,保持3min,4℃·min-1升到112℃,再以10℃·min-1到152℃,保持5min;進(jìn)樣口溫度200℃;檢測器溫度230℃。1.2.2頂部氣體進(jìn)樣測定采用微量注射器精密吸取對照品或供試品的甲醇溶液50μl,注入盛有2ml水的頂空瓶中,加蓋,密封,置80℃恒溫箱中平衡30min,用在同一恒溫箱中保溫的進(jìn)樣器抽取頂部氣體1ml進(jìn)樣測定。1.2.3對照品貯備液分別取薄荷腦和水楊酸甲酯對照品各約200、400mg,精密稱定,置5ml量瓶中,加甲醇定容,配制成含薄荷腦39.9mg·ml-1、水楊酸甲酯80.0mg·ml-1的對照品貯備液。精密量取貯備液適量于5ml量瓶中,加甲醇定容,即得對照品溶液。精密量取羅浮山百草油1ml,置5ml量瓶中,加甲醇溶解并定容,得供試品溶液。1.2.4理論板數(shù)測定按“1.2.1”項(xiàng)下方法分別吸取空白甲醇、對照品溶液和供試品溶液,按“1.2.2”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測定。由色譜圖可知薄荷腦、水楊酸甲酯與其他成分的分離良好,分離度均大于2.0,理論板數(shù)以薄荷腦計(jì)大于9×103?？瞻准状既芤?、對照品溶液和供試品溶液的色譜圖見圖1。1.2.5方法的線性回歸分析精密量取“1.2.3”項(xiàng)下對照品貯備液2.5ml,置5ml量瓶中,用甲醇定容,依此法對倍稀釋得5種系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別吸取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,按“1.2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測定,記錄色譜圖。以各成分峰面積為縱坐標(biāo),濃度為橫坐標(biāo),進(jìn)行線性回歸,回歸方程分別為:A薄荷腦=247C-790(r=0.9996)和A水楊酸甲酯=148C-1.23×104;兩者分別在62.4~9.98×102μg·ml-1和125~2.00×103μg·ml-1與峰面積成良好的線性關(guān)系。1.2.6最低檢測限的測定取線性最低檢測限的低點(diǎn)對照品溶液對倍稀釋,按“1.2.1”項(xiàng)下方法測定,按S/N=3計(jì),薄荷腦和水楊酸甲酯的最低檢測限分別為1.95、7.81μg·ml-1。1.2.7方法的線性范圍、峰峰面積取“1.2.3”項(xiàng)下的供試品溶液,于0、2、4、8、12、24h,按“1.2.1”項(xiàng)下方法測定,計(jì)算薄荷腦和水楊酸甲酯色譜峰峰面積的RSD分別為3.1%、3.7%。表明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。1.2.8薄荷腦和水楊酸甲酯含量的rsd取同一批號的羅浮山百草油,按“1.2.1”項(xiàng)下制備6份供試品溶液,分別按“1.2.1”項(xiàng)下方法測定,計(jì)算薄荷腦和水楊酸甲酯含量的RSD分別為1.8%、3.0%。1.2.9加標(biāo)回收率和rsd精密量取已知薄荷腦和水楊酸甲酯含量的同一批樣品6份,分別加入定量的混合對照品溶液,用甲醇溶解,按“1.2.1”項(xiàng)下方法進(jìn)樣測定,薄荷腦、水楊酸甲酯的回收率分別為99.2%、98.1%,RSD分別為0.5%、0.8%(n=6)。1.2.1頂部氣體進(jìn)樣測定取3批樣品,按“1.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按“1.2.1”項(xiàng)下方法抽取頂部氣體1ml進(jìn)樣測定。每份樣品平行測定3次,記錄色譜圖,按外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法以峰面積計(jì)算羅浮山百草油中薄荷腦和水楊酸甲酯的含量(表1)。2頂空條件的確定薄荷腦和水楊酸甲酯為羅浮山百草油中的主要成分,二者均有揮發(fā)性,常用的提取方法有蒸餾法和溶劑提取法,但提取時(shí)間長、提取效率低,且熱不穩(wěn)定和易氧化的成分易受到破壞。樣品經(jīng)頂空分析技術(shù)處理后,僅揮發(fā)性成分進(jìn)入色譜系統(tǒng),既減少了干擾,又不易污染或損壞色譜柱,適合于藥物中揮發(fā)性成分的含量測定和質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)曾固定頂空時(shí)間30min,考察了不同頂空溫度下薄荷腦和水楊酸甲酯的峰面積。結(jié)果表明,頂空溫度達(dá)80℃時(shí)