牡丹籽油對高脂血癥大鼠的作用及對糖尿病小鼠及小鼠糖耐量的影響

牡丹籽油對高脂血癥大鼠的作用及對糖尿病小鼠及小鼠糖耐量的影響

牡丹是毛科的一種落葉灌木，廣泛分布于河南、山東、安徽等地。自古以來，他就用自己的根皮來服藥，稱之為“丹皮”。牡丹籽是生產(chǎn)丹皮的副產(chǎn)品,且產(chǎn)量豐富,但目前牡丹籽多用作育種,并沒有發(fā)揮其藥用價值。牡丹籽油系從牡丹籽仁中提取的金黃色透明油狀液體,含有大量的不飽和脂肪酸,如亞油酸、亞麻酸和油酸等。亞油酸和亞麻酸是人體必需脂肪酸,具有降血脂、降膽固醇和促進脂肪代謝、增強免疫、預防冠心病等生理活性。在國外已將亞麻酸及其衍生物作為藥物或食品強化劑,用來預防和治療心血管疾病。目前,對于牡丹籽油的研究僅限于分離、提取、保存、理化性質(zhì)及組成等,對其深入研究較少。鑒于牡丹籽油含有大量活性成分不飽和脂肪酸,本實驗通過對牡丹籽油調(diào)節(jié)血脂、降低血糖作用的研究,為牡丹籽油的開發(fā)利用及其產(chǎn)業(yè)化奠定基礎,對于提高牡丹籽油的綜合利用價值和新品種的植物油開發(fā)和利用提供依據(jù)。1材料表面1.1動物SD大鼠,雄性,體質(zhì)量(200±20)g;昆明種小鼠,雄性,體質(zhì)量(20±2)g,由安徽長臨河醫(yī)藥科技有限公司提供。1.3血糖檢測儀器AU640型全自動生化分析儀,日本奧林巴斯;強生穩(wěn)步倍加型血糖儀及血糖試紙,美國強生;BS-110S精密電子天平,北京賽多利斯天平有限公司;TDL-16C臺式高速離心機,上海安亭科學儀器廠。2方法2.1高脂飼料及牡丹花籽油的單次給藥SD雄性大鼠60只,在實驗環(huán)境下基礎飼料適應性飼養(yǎng)1周后,根據(jù)體重隨機分成6組,基礎飼料對照組(空白組)、高脂飼料對照組(模型組)、高脂飼料+辛伐他汀(1mg·kg-1)組、高脂飼料+牡丹籽油高、中、低劑量(6.0、3.0、1.5g·kg-1)組,每組10只。高脂飼料由93.8%基礎飼料、1%膽固醇、5%豬油、0.2%膽鹽組成。除空白組外,各組開始給予高脂飼料喂養(yǎng),同時進行灌胃給藥,空白組和模型組給予等容積的蒸餾水,每5d稱量體重1次,根據(jù)體重變化調(diào)整給藥容積,連續(xù)灌胃30d。實驗第30天,大鼠禁食不禁水12h后,腹主動脈采血,靜置,常規(guī)制備血清,全自動生化分析儀檢測血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平。2.2牡丹籽油的降血糖作用研究2.2.1給藥、飼養(yǎng)及給藥劑量昆明種小鼠100只適應性飼養(yǎng)1周后,隨機分為空白組10只,模型組90只,小鼠均禁食不禁水18h后,模型組小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶(給藥體積10mL·kg-1,劑量90mg·kg-1,臨用前用生理鹽水配制成濃度為0.9%的四氧嘧啶溶液,放于棕色瓶中,2h內(nèi)用完),復制實驗性糖尿病模型,空白組給予等體積的生理鹽水,常規(guī)飼養(yǎng)。尾靜脈注射四氧嘧啶72h后,小鼠眼眥毛細血管采血,血糖儀檢測血糖值,取血糖值>11mmol·L-1的小鼠,按平均血糖值分為模型組、鹽酸二甲雙胍組(0.30g·kg-1),牡丹籽油高、中、低劑量(7.80、3.90、1.95g·kg-1)組,每組10只。除空白組和模型組外,各給藥組開始灌胃給藥,空白組和模型組給予等容積的蒸餾水,每5d稱量體重1次,根據(jù)體重變化調(diào)整給藥容量,連續(xù)灌胃30d。實驗第30天,小鼠禁食不禁水12h后,眼眥毛細血管采血,血糖儀檢測血糖值。2.2.2動物分組及給藥劑量昆明種小鼠72只適應性飼養(yǎng)1周后,隨機分為空白組、模型組、鹽酸二甲雙胍組(0.30g·kg-1),牡丹籽油高、中、低劑量(7.80、3.90、1.95g·kg-1)組,每組12只。除空白組和模型組外,各給藥組開始灌胃給藥,空白組和模型組給予等容積的蒸餾水,每5d稱量體重1次,根據(jù)體重變化調(diào)整給藥容量,連續(xù)灌胃30d。實驗第31天,小鼠禁食不禁水8h后,眼眥毛細血管采血檢測血糖值,記為0min的血糖值,除空白組外各組動物灌胃葡萄糖溶液(2.5g·kg-1,20mL·kg-1體重),空白組給予等容積的蒸餾水。于給糖后30、60、120min眼眥毛細血管采血,血糖儀檢測血糖值。2.3統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(ue0af±s)表示,使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析,任意兩組間比較采用t檢驗。3結(jié)果3.1牡丹花籽油對大鼠體重的影響各劑量組大鼠的初重、末重和增重與高脂飼料對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),說明在本實驗條件下牡丹籽油對大鼠的體重無明顯影響(表1)。3.2牡丹花籽油對小鼠血清hdl、tg、ldl-c、tg、ldl-c含量的影響大鼠給予高脂飼料喂養(yǎng)30d后,血清中TC、TG、LDL-C水平較正常組均明顯升高(P<0.01),HDL水平顯著減低(P<0.01)。牡丹籽油各給藥組血清TC、TG、LDL-C值均有所降低,其中低劑量組對TC水平的降低較為明顯,具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);高劑量組TG水平與高脂飼料組相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且HDL-C含量顯著升高(P<0.05),見表2。3.3連續(xù)給藥對牡丹花籽油高劑量和中劑量對牡丹花籽油糖含量的影響小鼠尾靜脈注射四氧嘧啶后,血糖水平顯著升高(P<0.01);連續(xù)給藥30d后,牡丹籽油高劑量和中劑量組血糖含量均顯著降低(P<0.05),且給藥前與給藥后血糖的變化值與模型組相比,具有統(tǒng)計學意義(P<0.01),見表3。3.4牡丹籽油對大鼠糖的抵抗力的影響4牡丹花籽油對高脂飼料的降血脂作用隨著人們生活水平的提高和生活習慣的改變,高脂血癥的發(fā)病率逐年上升,其進一步的發(fā)展會導致各種心血管疾病,對人類的健康造成極大的危害,嚴重影響人們的生活質(zhì)量,所以預防和治療高脂血癥已成為國內(nèi)外研究的重大課題。長期的血脂升高還會導致一些其它疾病的發(fā)生或加重,例如肥胖、高血壓、糖尿病等。如果能尋求改善食物結(jié)構(gòu)來減少高脂血癥及其并發(fā)癥的發(fā)生,將對高脂血癥的預防和輔助治療具有非常重要的意義。牡丹籽油的脂肪酸組成主要為亞麻酸、亞油酸、油酸等不飽和脂肪酸。亞油酸和亞麻酸是兩種對人體健康特別重要的必需脂肪酸,攝入體內(nèi)后可轉(zhuǎn)變?yōu)镋PA(Eicosapntemacniocacid)和DHA(docosahexaenoicacid)而發(fā)揮降低血脂和血壓的作用。常見的食用油中亞麻酸含量都較低,如棉籽油亞麻酸含量為2%~3%、大豆油為6%、菜籽油為0.3%~1.3%,而牡丹籽油中的脂肪酸組成簡單,并富含多種不飽和脂肪酸,特別是亞麻酸的含量高達35.7%。亞油酸、油酸具有降低血漿中膽固醇含量,減少膽固醇在血管壁的沉積,防止血栓形成、擴張血管等作用,亞油酸具有降低血壓并減少血液黏附或形成血栓的能力,油酸可降低血液總膽固醇和有害膽固醇,卻不降低有益膽固醇。大量研究表明油酸和亞油酸對心腦血管疾病有防治作用。研究表明亞油酸和n-3多不飽和脂肪酸在防治心腦血管疾病上具有協(xié)同增效作用。因此對牡丹籽油n-3多不飽和脂肪酸的開發(fā)利用及降血脂作用的研究,將為其進一步的開發(fā)奠定了理論基礎。根據(jù)“保健食品功能學評價程序和檢驗方法”中輔助降血脂功能的結(jié)果判定規(guī)則:“動物實驗在血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白——膽固醇三項指標檢測中血清總膽固醇和甘油三酯二項指標陽性,可判定該受試樣品輔助降血脂功能動物實驗結(jié)果陽性”。本研究在給予大鼠高脂飼料的同時經(jīng)灌胃給予牡丹籽油,結(jié)果顯示,牡丹籽油對高脂血癥大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均有降低作用,高劑量牡丹籽油可顯著升高HDL-C水平。高脂血癥是機體脂質(zhì)代謝紊亂引起的血脂(TC、TG、LDL)水平升高,而HDL是高脂血癥的保護因素,其含量越高則高脂血癥的發(fā)病率越低。由于血液中的脂類主要以載脂蛋白的形式轉(zhuǎn)運,所以血脂主要以脂蛋白形式存在,即LDL-C和HDL-C。牡丹籽油能降低TC、TG水平,升高HDL-C水平,提示牡丹籽油對高脂飼料引起的脂代謝紊亂具有一定調(diào)節(jié)作用。同時,牡丹籽油具有較好的降低四氧嘧啶誘導的糖尿病小鼠高血糖的作用,且呈現(xiàn)一定的量效關系,且對正常小鼠的糖耐量有一定的調(diào)節(jié)作用。實驗結(jié)果表明牡丹籽油具有良好的食用保健價值。1.2給藥劑量及降壓藥效果牡丹籽油:壓榨工藝制備,由洛陽花瓣舞生物技術有限公司提供;利之舒(辛伐他汀片),哈藥三精制藥公司生產(chǎn)(批號:1202006);鹽酸二甲雙胍,上海醫(yī)藥集團有限公司信誼制藥總廠(批號:120819B);血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定試劑盒均購于北京利德曼生化股份有限公司;葡萄糖注射液,海南中南科倫藥業(yè)有