實(shí)驗(yàn)一、酒花中蘆丁的高效液相色譜測定實(shí)驗(yàn)報(bào)告

PAGEPAGE1實(shí)驗(yàn)一、啤酒花中蘆丁的高效液相色譜法測定1..實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馀c掌握高效液相色譜法（HPLC）分析原理與基本操作方法。2．實(shí)驗(yàn)藥品與儀器酒花超臨界CO2萃取后的萃余物實(shí)驗(yàn)室自制；石油醚、甲醇（色譜純）、乙醇、乙酸、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品均購自北京化學(xué)試劑公司，超純水購自娃哈哈公司；Waters1525型高效液相色譜儀Waters2487型UV檢測器美國；超聲波清洗儀寧波新芝生物科技有限公司提供真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海申生科技有限公司提供。3.實(shí)驗(yàn)方法3.1.酒花中蘆丁的提取步驟準(zhǔn)確稱取1g酒花樣品2份，用50%的乙醇溶液以1：20的料液比，在60℃下分別用超聲波提取1h后離心4000轉(zhuǎn)/分，15分鐘，取上清液為酒花蘆丁提取液，經(jīng)0.45μm濾膜過濾后，用于HPLC分析。3.2.HPLC測定蘆丁的步驟先用蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再將樣品溶液用微量進(jìn)樣器吸取10μl樣品液進(jìn)樣分析,記錄色譜峰，測定樣品的蘆丁峰面積,代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程中計(jì)算相應(yīng)的蘆丁含量。HPLC測定條件：C18柱(4.6mm×250mm)，流動(dòng)相：甲醇-水-冰乙酸(40∶60∶2，V/V)；流速：1.0ml/min；柱溫：室溫，進(jìn)樣量：10μl；檢測波長：280nm；靈敏度：0.05AUFS。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法：取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇制成10ppm，20ppm，40ppm，60ppm，80ppm，100ppm系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別進(jìn)樣，記錄峰面積，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線（計(jì)算回歸方程為：Y=8.20×103X-4.77×103，相關(guān)系數(shù)為r=0.997981）。蘆丁的定性與定量分析：蘆丁的定性分析根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間確定，定量分析由蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線方法計(jì)算。蘆丁含量結(jié)果表示為mg/g酒花4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備圖2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)圖2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品色譜峰表1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線測定數(shù)據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml）1020406080100HPLC峰面積94310.0147600.0308800.0479500.0679900.0803400.04.2酒花提取液中蘆丁的測定NameRetentionTimePeakTypeArea%AreaHeight%HeightAmount%AmountUnitsIntegrationTypeRelativeRTRTRatioPeakLevelControlAmount%DeviationResponseUSPResolutionResolution(EPandJP)USPPlateCountEPPlateCountJPPlateCountk'USPTailingFactorSymmetryFactorPeakCodesPointsAcrossPeakStartTimeEndTimeBaselineStartBaselineEndSlopeOffset11.425Unknown879652.8679083.63BV221.1501.5171.1508.5834.434265e-004-5.396385e-00421.699Unknown66265721.5811116651.00VV181.5171.8171.1508.5834.434265e-004-5.396385e-00431.887Unknown1259154.10211119.68VV51.8171.9171.1508.5834.434265e-004-5.396385e-00442.035Unknown53678917.482371610.88VV281.9172.3831.1508.5834.434265e-004-5.396385e-00452.501Unknown53521917.43141556.49VV582.3833.3501.1508.5834.434265e-004-5.396385e-00463.490Unknown1119663.6560682.78VV183.3503.6671.1508.5834.434265e-004-5.396385e-00473.944Unknown2678428.7275413.46VV563.6674.6171.1508.5834.434265e-004-5.396385e-00485.045Unknown1443544.7040811.87VV514.6175.4671.1508.5834.434265e-004-5.396385e-00495.829Unknown1424184.6462012.84VV535.4676.3671.1508.5834.434265e-004-5.396385e-004106.599Unknown199340.657600.35VV296.3676.8501.1508.5834.434265e-004-5.396385e-004117.428Unknown42768913.93147666.77VV806.8508.1831.1508.5834.434265e-004-5.396385e-004128.294Unknown26980.091770.08VB248.1838.5831.1508.5834.434265e-004-5.396385e-004139.333Un